Recibido 02/11/2015, Aceptado 10/12/2015, Disponible online 24/12/2015 Estabilización del salvado de arroz: Tratamiento térmico por extrusión para inactivación enzimática (lipasas) Beatriz Guevara Guerrero1*, Alejandro Fernández Quintero2** 1,2 Universidad del Valle, Escuela de Ingeniería de Alimentos, Calle 13 # 100-00 Edif:338, Santiago de Cali, Colombia Email: *beatriz.guevara@correounivalle.edu.co ** alejandro.fernandez@correounivalle.edu.co Resumen El salvado de arroz (SA) contiene un alto nivel de aceite (12-20%), que es considerado un aceite saludable. Pero la rápida deterioración de los lípidos del SA causado por la actividad enzimática de lipasas limita su uso como parte de una dieta humana. Este trabajo de investigación muestra un estudio de un tratamiento térmico por extrusión para inactivar la actividad de las lipasas que causa la rancidez hidrolítica deteriorando el aceite en el SA. La presencia de ácidos grasos libres (AGL) en el salvado se determinó en función de diferentes tratamientos por extrusión tales como el contenido de humedad del SA, la velocidad de los tornillos y la temperatura en el barril del extrusor. El contenido de AGL se determinó en el salvado crudo y en el salvado extruido después del tratamiento de extrusión y después de 7 días de almacenamiento. El salvado crudo mostró un incremento en el contenido de AGL del 11,8% y los salvados extruidos no mostraron un aumento significativo en el contenido de AGL, el cual fue inferior al 2% durante el período de almacenamiento de 7 días, envasados en bolsas laminadas metalizadas y en condiciones ambientales de temperatura y humedad relativa (28 °C, 78%). Las condiciones óptimas del tratamiento de extrusión donde se presentó menor aumento de AGL en 7 días, una actividad de la lipasa inferior para el SA, resultó a una velocidad de tornillo de 200 rpm, temperatura del barril del 130 °C y contenido de humedad en el salvado del 20,5%. El tratamiento térmico por extrusión fue eficaz para inactivar la actividad de la lipasa en el salvado de arroz, la inactivación dependió del contenido de agua en el salvado, siendo mejor a altos niveles humedad. Esto significa que el mecanismo de la desnaturalización de una proteína, como la lipasa, la presencia de agua juega un importante papel. Palabras claves: Salvado de arroz, extrusión, ácidos grasos libres, inactivación, lipasas. Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -88 Abstract Rice bran (RB) contains a high level of oil (12 – 20%), which is considered a healthy oil. But the rapid deterioration of lipids of RB caused by the enzymatic activity of lipases limits its use as part of a human diet. This research work shows a study of a heat treatment by extrusion to inactivate lipase activity which causes hydrolytic rancidity deteriorating the oil in the RB. The presence of free fatty acids (FFA) in the bran was determined as a function of different treatments by extrusion such as the moisture content of the RB, the speed of the screws and the temperature in the barrel in the extruder. The content of FFA was determined in the crude bran and in the extruded bran just after the extrusion treatment and after 7 days of storage in both the crude and treated bran. The crude bran showed an increase in the FFA content of 11,8% and the extruded brans showed no significant increase in the FFA content, which was less than 2% during the storage period of 7 days, packed in bags of laminated and metallized film, at ambient conditions of temperature and relative humidity (28 °C, 78%). The optimal operational conditions of the extrusion treatment were tested at the smaller increase of FFA in 7 days, it means where the RB presented lower lipase activity, resulting at a speed screw of 200 rpm, barrel temperature of 130 °C and moisture content in the bran of 20,5%. The heat treatment by extrusion was effective to inactivate lipase activity in rice bran, but the inactivation depended on the water content in the bran, being enhanced at the highest moisture. It means that in the mechanism of denaturalization of a protein, like lipase, the presence of water plays an import role. Keywords: Rice bran, extrusion, free fatty acids, inactivation, lipases. I. INTRODUCCIÓN El salvado de arroz es un subproducto del proceso industrial del pulimento del arroz para consumo humano. Es rico en nutrientes como proteína, grasa y fibra. Adicionalmente es una buena fuente de vitaminas del grupo B y contiene minerales tales como hierro, potasio, calcio, magnesio, y manganeso (Saunders, 1985). rancidez hidrolítica producida por la actividad enzimática de las lipasas (Escamilla et al., 2006; Malekian et al., 2000; Martin et al., 1993), produciendo un rápido deterioro de los lípidos presentes (incremento de ácidos grasos libres), limitando la aplicación del salvado de arroz para el desarrollo de nuevos productos para la dieta humana. El salvado de arroz tiene un corto tiempo de vida útil debido principalmente a la Para lograr la estabilización del salvado de arroz (inactivación de las enzimas Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -89 lipasas) se han utilizado diferentes métodos como modificación del pH y tratamientos químicos (Escamilla et al., 2006), almacenamiento a bajas temperaturas (Kumar, 1965), microondas (Chaparro, 2009; Malekian et al., 2000), calentamiento óhmico (Lakkakula et al., 2004) y extrusión con tornillo simple (Martin et al., 1993; Randall et al., 1985; Sayre et al.,1982). El presente trabajo de investigación, es un estudio del tratamiento térmico por extrusión con doble tornillo para la inactivación de lipasas presentes en el salvado de arroz. El proyecto se enfocó en estudiar el efecto de la velocidad de los tornillos conjuntamente con la variación del contenido de humedad y la temperatura de los tornillos sobre la estabilidad del salvado de arroz en un periodo de almacenamiento de siete días. II. Materiales y Métodos Salvado de arroz: Proveniente de una industria arrocera, localizada en el municipio de Jamundí, Valle del Cauca, Colombia. Equipo: Se empleó un extrusor de doble tornillo modelo DS 32-II (Jinan Saixin Machinery Co, China). En la figura 1 se describe el proceso de experimentación. (*) El salvado de arroz utilizado, fue obtenido pasadas las 3 horas de ser sometido a la etapa de pulimento del grano de arroz. Figura 1. Diagrama de la fase experimental Proceso de extrusión El extrusor se programó a las condiciones de temperatura y velocidad de tornillos establecidas en el diseño experimental. Cada muestra de 1 kg, acondicionada a la humedad programada, se colocó en la tolva de alimentación. La tasa de alimentación del salvado al interior del extrusor se mantuvo constante de acuerdo a pruebas preliminares a 150 g/min. Durante el procesamiento de las muestras, se registró la temperatura real durante la operación. El producto tratado en el extrusor se enfriaba a temperatura ambiente tan pronto se obtenía. Posteriormente, a las muestras extruidas se les ajustaba la humedad final en estufa a 50 °C por 24 horas. Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -90 Empaque y almacenamiento Determinación de ácidos grasos libres (AGL) medición del contenido de AGL en los lípidos presentes en la muestra. Se extraían los lípidos utilizando el método Soxhlet. Se procesaban 15 g de muestra de salvado durante seis horas con 200 ml de éter de petróleo. Para eliminar el residuo del solvente en el lípido extraído se colocaba el extracto en estufa a 65 °C durante 24 horas. El contenido de ácidos grasos libres se obtuvo siguiendo el método oficial de AOAC, disolviendo el lípido en una mezcla de 20 ml de etanol - éter dietílico, se adicionaban tres gotas de fenolftaleína y neutralizaba con NaOH hasta obtener un leve color rosado. La titulación para cada muestra se realizó por duplicado. La actividad de la lipasa estuvo determinada por el incremento en la El contenido de AGL se determinó usando el siguiente cálculo. Las muestras extruidas estuvieron almacenadas en bolsas laminadas metalizadas (envase primario) y bolsas con cierre hermético (envase secundario) para controlar cambios por rancidez oxidativa. Las muestras empacadas se analizaron para determinar el contenido de AGL a un tiempo de almacenamiento de siete días. El almacenamiento de las muestras se realizó a las condiciones ambientales de temperatura y humedad relativa del laboratorio (28 °C, 78%). 𝐴𝐺𝐿 (%) = (𝑚𝐿 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝑚𝐿 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜 )𝑥 28.2 𝑥 𝑐𝑜𝑛𝑐 𝑁𝐴𝑂𝐻 (𝑁) 𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑖𝑝𝑖𝑑𝑜 (𝑔) El blanco consistió en la titulación con NaOH de 20 ml de etanol- éter dietílico utilizando como indicador fenolftaleína y sin muestra. Diseño experimental Se empleó la metodología de superficie de respuesta, el diseño central compuesto (DCC), con un diseño factorial 3𝑛 (niveles de +1 y -1), considerando dos puntos Ec. (1) axiales (+𝛼, −𝛼 ) y seis puntos centrales (nivel cero). Las tres variables independientes fueron el contenido de humedad del salvado de arroz, la temperatura del barril y la velocidad de los tornillos del extrusor. La variable de respuesta fue el incremento del contenido de AGL (%). A continuación, se observa las variables y los niveles usados en el diseño experimental. Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -91 Tabla 1. Variable y niveles de la experimentación III. Resultados y Discusión Al salvado de arroz estabilizado por el tratamiento térmico por extrusión se le determinó el incremento del contenido de ácidos grasos libres durante un periodo de almacenamiento de siete días. Para el análisis estadístico se empleó un modelo cuadrático, cuyo análisis de varianza (ANOVA) se presenta en la Tabla 2. Los factores de contenido de humedad, temperatura y velocidad del tornillo tuvieron un efecto significativo sobre la variable de la respuesta (valor p < 0,05), se presentó una interacción significativa entre los factores del contenido de humedad y temperatura del tornillo y un efecto de curvatura por parte de la temperatura. Tabla 2. Análisis de varianza de los resultados Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -92 En la figura 2, se identifica la interacción del contenido de humedad y la temperatura a una velocidad de tornillos constante de 200 rpm en función los incrementos del contenido de AGL (%) del salvado de arroz extruido a un tiempo de almacenamiento de siete días. La muestra control (sin estabilización), presentó durante el almacenamiento, un incremento en el contenido AGL del 11,8%. Por el contrario, se observó un incremento menor al 2% en el contenido de AGL en las muestras de salvado de arroz que fueron estabilizados en un rango de temperaturas de 110 - 150 C y a contenidos de humedad entre 14,5 – 20,5%, presentado una disminución de aproximadamente la sexta parte del porcentaje de formación de AGL con respecto a la muestra control. ° El salvado de arroz por su alto contenido de lípidos muestra una buena fluidez presentando poca fricción cizallamiento en el barril del extrusor en consecuencia la velocidad de los tornillos influyen directamente en el tiempo de residencia del tratamiento térmico para la inactivación de las lipasas. I. Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -93 II. Figura 2. Efecto del contenido de humedad del salvado y temperatura del extrusor sobre el incremento del contenido de AGL (%) a una velocidad de tornillos de 200 rpm. I. Líneas de Contorno, II. Superficie de respuesta Se observó que a menor temperatura y contenido de humedad se presenta un mayor incremento de AGL (%), adicionalmente se analiza como a esta misma temperatura se puede disminuir AGL (%) aumentando el contenido de humedad del salvado, resultado que concuerda con que el calentamiento a temperaturas suaves en la presencia de altos contenido de humedad es eficiente para la desnaturalización de forma permanente de lipasas (Barber et al, 1987). Este comportamiento se puede atribuir a la desnaturalización de las estructuras proteicas de las lipasas por efecto de las altas temperaturas utilizadas en la experimentación y por la interacción con el agua, permitiendo por puentes de hidrógeno un mayor despliegue de la Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -94 estructura cuaternaria de la enzima con losV. demás componentes del salvado produciendo una desnaturalización de forma permanente de las lipasas. Agradecimientos El menor incremento del contenido de AGL (%), es decir donde el salvado presentó menor actividad de lipasas fue en el salvado procesado a los mayores contenidos de humedad, con el extrusor calentado a 130 y 140 °C, por lo tanto se puede inferir que es innecesario utilizar temperaturas superiores a 130 °C para la inactivación enzimática en el salvado de arroz. Resultados similares se obtuvieron para la estabilización de salvado de arroz en estudios utilizando extrusores de tornillo simple (Malekian et al, 2000, Martin et al 1993, Randall et al, 1985). El autor principal agradece a Colciencias por la vinculación al programa de Jóvenes Investigadores, que permitió llevar acabo esta investigación. IV. Conclusiones El tratamiento térmico para la inactivación enzimática del salvado de arroz por extrusión de doble tornillo fue efectivo para la disminución significativa del porcentaje de formación de AGL para un tiempo de almacenamiento de siete días a las condiciones experimentación de contenido de humedades (17,5 – 20,5 %) y temperaturas (130 – 140 °C) presentaron un menor incremento del AGL (%) mejorando la estabilidad del salvado de arroz. Las velocidades de los tornillos (100 – 300 rpm) disminuyeron el incremento del AGL (%), permitiendo la estabilización del salvado de arroz, accediendo a identificar la relación o comportamiento del tiempo de residencia del SA con otras variables del proceso de extrusión. Los autores agradecen a la industria arrocera “La esmeralda” por el aporte del salvado de arroz. V. BIBLIOGRAFÍA AOAC. (1991). Official Method of Analysis. S. Williams (ed). 15th ed. AOAC publ. Association of Official Analytical Chemists. Washington, D.C Barber S., de Barber B. (1987). El salvado de arroz una materia prima subutilizada. Organización de las naciones unidas para el desarrollo industrial. Chaparro, M. (2009). Evaluación de la estabilización del salvado de arroz y extracción de su aceite por métodos convencionales. Tesis de maestría en diseño y gestión de procesos. Universidad de la Sabana. Escamilla, C.B., Varela, M. R., Sánchez, T.S., Solís, F.J., y Duran, B. (2006). Extrusion deactivation of rice bran enzymes by pH modification. Lipid science Technology, 107 (12), 871 – 876. Kim, C.J., Byun, H.S., Cheigh, and Know T.W. (1987). Optimization of extrusion rice bran stabilization process. Journal of food Science. 52(5) Kumar, D., (1965). Quality of bran oil as influenced by the conditions of storage of Vol 23, No 36 (2015), Revista Alimentos Hoy -95 rice bran. Journal of food science and technology, 2, 113- 114. Lakkakula, N.R., Lima, M.H., and Walker, T. (2004). Rice bran stabilization and rice bran oil. Malekian, F., Rao, R. M., Prinyawiwatkul, W., Marshall W.E., Windhauser, M., Ahmedna, M. (2000). Lipase and lipoxigenase activity, functionality, and nutrient losses in rice bran during storage. In Lousiana Agricultural Experiment Station, LSU, agricultural center, Baton Rouge. Bulletin: No. 870. 168. Martin, D., Godber, S., Gladness, S., Verma, L., y Wells J., (1993). Optimizing rice bran stabilization by extrusion cooking. Louisana Agriculture, 36(3). Randall, J.M., Sayre, R.N., Schultz, W. G., Fong, R. Y., Mossman, A. P., Tribelhorn, R. E., and Saunders, R. M. (1985). Rice bran stabilization by extrusion cooking for extraction of edible oil. Journal food science, 50, 361 – 364. Saunders, R.M. (1985). Rice bran: composition and potential food sources. Food Review International. 1(3), 465-495 Sayre, R.N., Saunders, R.M., Enochian, R.V., Schultz, W.G., and Beagle E.C. (1982). Review of rice bran stabilization systems with emphasis on extrusion cooking. Cereal Foods World. 27(7):317322. 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