determinaciones cuantitativas por rmn, una opcion valida ante

DETERMINACIONES CUANTITATIVAS POR RMN, UNA OPCION VALIDA
ANTE LA AUSENCIA DE ESTANDARES DE REFERENCIA.
Ing. Leandro Santos, Farm. Bioq. Marcelo Feltrinelli, Farm. María A. Pereyro, Téc. Ivana Innecco, Farm. Bioq. Ramón A. Nuñez Cantelli
INTI Química
santos@inti.gob.ar
OBJETIVO
Desarrollar métodos de análisis cuantitativos por resonancia magnética nuclear (RMN) que permitan determinar pureza en principios activos
farmacéuticos (o API´s por sus siglas en inglés), de los que se carece de material de referencia.
DESCRIPCIÓN
Parámetro
Valor
(relajación longitudinal)
3.2 s
Actualmente, la ausencia de estándares de muchos principios activos
utilizados obliga a los laboratorios nacionales a confiar en los
certificados emitidos por proveedores (mayormente laboratorios de
China e India) y/o desarrollar y modificar técnicas de análisis clásicas
que no siempre aportan los resultados esperados.
T1
Las determinaciones cuantitativas por RMN, conocidas como qNMR,
se empezaron a desarrollar hace algunos años, con el desarrollo de
instrumentos de alta resolución.
Parámetros más relevantes para la determinación de pureza por RMN.
d1
(tiempo de espera)
p1
(duración del pulso de 90º)
sw
(ancho espectral)
snr
(relación señal/ruido)
20 s
10,5 µs
3000 Hz
>2500
Estas técnicas implican varias modificaciones de las condiciones
instrumentales típicas, ya que se debe poner especial énfasis en
minimizar las fuentes de error de origen instrumental, en particular es
requisito medir con presición el tiempo de relajación longitudinal (T1),
duración y potencia del pulso, homogeneidad de campo, etc.
Una vez evaluados estos parámetros, la pureza de la muestra se
obtiene mediante una sencilla ecuación:
Px =
Ix Nstd Mx mstd
×
×
×
× Pstd
Istd Nx Mstd m
I son las intensidades de las señales, N la cantidad de núcleos
involucrados, M las masas moleculares relativas, m las masas y P la
pureza del estándar interno empleado.
La ventaja sustancial de la qNMR sobre otros métodos instrumentales
cuantitativos es que, por tratarse de una propiedad nuclear, un mismo
estándar puede ser utilizado para una gran variedad de analitos
diferentes.
Figura 2: Integración de las señales en el espectro de RMN 19F de la muestra con
el agregado del estándar interno. Las señales con δ:-113 ppm corresponde al flúor
benceno, mientras que las de δ:-116 y -118 a la muestra por RMN.
RESULTADOS
Si bien la determinación puede realizarse por RMN de 1H o 19F (la
estructura química del principio activo se esquematiza en la figura 1);
debido a una mejor selectividad, se decidió emplear RMN 19F como Los valores obtenidos de pureza a través de esta técnica se
corresponden con los valores declarados por el proveedor, con
método primario y RMN 1H como complementario (figura 2).
valores de incertidumbres adecuados (<1%) y tiempos de análisis
similares a los de una técnica cromatográfica, por lo que este
F
desarrollo se implementó como control de calidad de materia prima
Figura 1: Esquema de
y para generar estándares de trabajo.
la estructura química
del API a cuantificar
F
CONCLUSIONES
R
OH
OH
Los espectros se registraron en un equipo Bruker Avance DPX400, a 376
MHz para 19F. La relajación longitudinal se midió a 25ºC empleando una
secuencia de recuperación de la inversión (inversion recovery sequence)
con una regresión exponencial de los datos. Luego del procesamiento de
datos, se llegó a los siguientes valores óptimos (en términos
cuantitativos) para la adquisición de los espectros:
Esta metodología analítica es aplicable, en principio, a cualquier
sustancia que pueda disolverse en un solvente adecuado y presente
uno o más núcleos con propiedades magnéticas apropiadas,
habitualmente 1H, 31P o 19F, y poseen elevada selectividad, por lo
que es prácticamente independiente de la matriz del analito.
El Laboratorio de Fármacos del INTI-Química logró diseñar e
implementar con éxito varias determinaciones cuantitativas mediante
RMN. Teniendo en cuenta el incremento en la demanda de este tipo
de análisis registrado en los últimos dos años, se espera que este
tipo de desarrollos continúen y aumenten sustancialmente durante
los próximos años.