FOSFORO INORGANICO abc UV Method Manual PARA SU USO Para la determinación cuantitativa in vitro de Fosforo Inorganico en suero. Este producto es adecuado para su utilización en Manual. Cat. No. PH 1016 300 ml 1. Reactivo Blanco 2. Molibdato 3. Patrón 210 ml 90 ml 1 x 5 ml SIGNIFICADO CLINICO El cuerpo humano contiene aproximadamente un kilo de fósforo. La parte inorgánica del hueso comprende sales de fosfato cálcico que representan el 80% del contenido de fósforo total. El resto se distribuye a traves de otras células del cuerpo en forma de fósforo orgánico en fosfolípidos y fosfoproteínas. En el suero la mayoría del fósforo inorgánico existe en una forma libre, con un 15% aproximadamente . Los fosfatos anormales en suero se encuentran comunmente en enfermedades hepáticas, oseas y paratiroideas. El fosfato se mide junto con el calcio en suero, dado que cada medida es útil para la intrepretación de la otra. (1) PRINCIPIO El fósforo inorgánico reacciona con ell molibdato amónico en presencia de ácido sulfúrico para formar un complejo fosfomolibdato que se mide a 340 nm. (2) TOMA Y PREPARACION DE LA MUESTRA Se recomienda utilizar suero como muestra. El suero es estable durante 5 días cuando se conserva entre +2 y +8°C. Estable durante 3 meses si se conserva a -20°C. Evitar muestras hemolíticas ya que la hemólisis interfiere con el ensayo. COMPOSICIÓN DEL REACTIVO Componentes 1. Reactivo blanco Acido sulfúrico Cloruro Sódico Detergente 2. Reactivo Molibdato Molibdato amónico Acido sulfúrico Cloruro sódico 3. Patrón Fósforo potásico Concentración inicial de las soluciones 0,36 mol/l 154 mmol/l 3,5 mmol/l 0,36 mol/l 154 mmol/l 1,61 mmol/l (5 mg/dl) PRECAUCIONES DE SEGURIDAD Unicamente para diagnóstico in vitro. No pipetear con la boca. Respetar las precauciones normales necesarias, que se requieren al manejar reactivos de laboratorio. Las soluciones 1 y 2 contienen ácido sulfúrico. Evitar la ingestión así como el contacto con piel y mucosas. La solución 3 contiene azida sódica. Evitar su ingestión o el contacto con la piel y mucosas. En caso de contacto con la piel, lavar inmediatamente el área afectada con agua abundante. En caso de ingestión o contacto con los ojos llamar inmediatamente a un médico. La azida sódica reacciona con el cobre y plomo de las tuberías, lo que podría producir azidas explosivas. Cuando se desheche este reactivo enjuagar abundantemente con agua para evitar la formación de estas azidas. Las superficies metálicas que hayan sido puestas en contacto con la azida sódica deben ser lavadas con hidróxido sódico al 10%. Hojas informativas sobre Salud y Seguridad están disponibles si se desean. Los reactivos deben ser utilizados solo para los propósitos indicados por personal adecuado cualificado de laboratorio bajo condiciones apropiadas de laboratorio. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Todos los reactivos están listos para su uso. Estables hasta la fecha de caducidad cuando se conservan entre +15 y +25°C. ESTABILIDAD Y PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS DE TRABAJO Mezclar una botella de Reactivo Blanco 1 con una botella de Molibdato 2 (300 ml de reactivo de trabajo ). Para volúmenes más pequeños preparar el reactivo para el análisis según la tabla siguiente: Reactivo Blanco Molibdato 7,0 ml 14,0 ml 28,0 ml 3,0 ml 6,0 ml 12,0 ml Estable durante 8 semanas entre +15 y +25°C. MATERIALES SUMINISTRADOS Reactivo blanco Reactivo Molibdato Patrón MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS Pipetas apropiadas para dispensar de 10 Hl and 1 ml. Cronómetro. Bloque de calentamiento o baño de agua para mantener 25, 30 ó 37°C. Un espectrofotómetro con longitud de onda de 340 nm. Multisueros Valorados Randox Nivel 2 (No. Cat. HN 1530) y Nivel 3 (No. Cat. HE 1532) PROCEDIMIENTO Longitud de onda: Cubeta: Temperatura: Medida: 340 nm 1 cm de espesor 20°C-25°C/37°C frente al reactivo blanco Pipetear en la cubeta: Agua destilada Muestra Patrón Reactivo de trabajo Blanco Patrón Muestra 10 Hl ----1 ml ----10 Hl 1 ml --10 Hl --1 ml Mezclar e incubar durante 10 min a 20-25°C ó 5 min a 37°C. Leer la absorbancia de la muestra (Amuestra) y del patrón (Apatrón) frente al reactivo blanco. MANUAL - FOSFORO INORGANICO - PH 1016 PAGE 2 OF 2 NOTA Muestras ictéricas y ligeramente lipémicas requieren un blanco de muestra. Usando el mismo esquema, pipetear 10 Hl de Muestra con 1000 Hl de Reactivo Blanco y mezclar. En este caso debe restarse la absorbancia Blanco de Muestra (Ablanco muestra) de la absorbancia de Muestra (Amuestra). PRECISION (Suero) Intra Serie Muestra 1 Media 0,96 SD 0,023 CV (%) 2,38 n 20 2 4,35 0,092 2,1 20 CALCULOS Concentración de fósforo inorgánico Entre series Muestra Media SD CV (%) n 2 4,32 0,106 2,44 20 Amuestra = Concentración del patrón x Apatrón CONTROL DE CALIDAD Se recomiendan los Multisueros Valorados Randox, Nivel 2 y Nivel 3 para el control de calidad diario. Analizar dos niveles distintos de controles al menos una vez al día. Los valores obtenidos deberán encontrarse dentro del rango especificado. Si los valores se encuentran fuera del rango y su repetición excluye error, se deberán seguir los siguientes pasos: 1. Comprobar la programación del instrumento y la lámpara. 2. Comprobar que todo material está limpio. 3. Comprobar el agua, contaminación ej. el crecimiento bacteriano puede contribuir a la inexactitud de los resultados. 4. Comprobar la temperatura de reacción 5. Comprobar la fecha de caducidad del kit y sus componentes. 6. Ponerse en contacto con el Soporte Técnico al Cliente de los Laboratorios Randox, Irlanda del Norte +00 44 28 94422413. 1 0,97 0,031 3,21 20 COMPARACION DE METODO (Suero) El método Randox (Y) se comparó con otro método comercial (X). Se analizaron 40 muestras de pacientes, con un rango de 0,87 a 6,94 mmol/l. El análisis de regresión linear de estos datos resultó en la ecuación Y = 0,996 X + 0,04 con un coeficiente de correlación de r =0,999. REFERENCIAS 1. Henry, R.J., Clinical Chemistry, Principles and nd Techniques, 2 Edition, Harper and Row, p. 525, 1974. 2. Tietz, N., Clinical Guide to Laboratory Tests, W.B. Saunders Company, Philadelphia 1983; 5: 384. INTERFERENCIA Los siguientes analitos se analizaron hasta los siguientes niveles y se encontró que no interfieren: Bilirrubina 500 Hmol/l Intralipid® 0,4% Triglicérido 4,05 mmol/l Hemoglobina 7 g/l VALORES NORMALES Suero: (2) 0,87 - 1,45 mmol/l (2,68 - 4,5 mg/dl) Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango que refleje la edad, sexo, dieta y localidad geográfica de la población. CARACTERISTICAS ESPECIFICAS DE FUNCIONAMIENTO Los datos siguientes se obtuvieron utilizando un analizador Cobas Mira a 37°C. Se pueden solicitar a Randox Laboratories protocolos de funcionamiento y aplicacion para analizadores automaticos. SENSIBILIDAD El nivel mínimo perceptible es 0,325 mmol/l. LINEALIDAD El método es lineal hasta una concentración de 6,5 mmol/l (20 mg/dl). Las muestras con concentraciones superiores deberán diluirse 1+4 con NaCl al 0,9 % y repetir la prueba. Multiplicar el resultado por 5. Revisado 20/08/03 wpt RANDOX Laboratories Ltd., Ardmore, Diamond Road, Crumlin, Co. Antrim, United Kingdom, BT29 4QY Tel:CRUMLIN (028)94422413 Fax.No.INT.44 Fax.No.INT.44 (028)94452912 UK (028)94452912 Email: Email: applications@randox.com Website: www.randox.com ABC A A