XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario Características espectrofotométricas del fluido vaginal de perras y de ovejas con y sin aporte de Metronidazol Coletti Zabala, T.; Pidello, A Laboratorio de Química Biológica, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Rosario tamara_coletti@hotmail.com Las secreciones del tracto genital femenino mantienen la humedad del epitelio vaginal. El fluido vaginal está compuesto por transudado plasmático, secreciones glandulares vestibulares, mucus cervical, secreciones 3 endometriales, además de urea y células epiteliales . Las características y composición de este fluido determinarán en gran medida las interacciones 2 entre la microbiota nativa y las especies patógenas . El reconocimiento de algunas características fisicoquímicas en los fluidos vaginales normales es de fundamental importancia para disponer de herramientas analíticas que permitan detectar las alteraciones que se producen en estados patológicos. El Metronidazol es un antibiótico y antiprotozoaricida que tiene un amplio espectro de acción que incluye la mayoría de las bacterias anaeróbicas gram positivas y gram negativas. Ejerce su actividad bactericida cuando dentro de la célula bacteriana su grupo nitro es reducido. Fue demostrado que la eficacia de los compuestos 5-nitroimidazoles depende de su grado de reducción. Si son solo parcialmente reducidos, el potencial de reducción es 1 mayor y la eficacia del compuesto es menor . Si bien a nivel intracelular este mecanismo es bien conocido, es escaso el conocimiento de la interacción entre el profármaco Metronidazol y los componentes moleculares presentes en el espacio extracelular dentro del ambiente vaginal, que produzca cambios que potencialmente sean efectores del estado redox en términos de factor de capacidad. En este trabajo se decidió utilizar fluido vaginal de perras (como modelo de gran importancia en la clínica de pequeños animales) y de ovejas (sugerida como modelo extrapolable al humano para 4 evaluar la seguridad de potenciales microbiocidas) . En este estudio se planteó: (1) caracterizar espectrofotométricamente el comportamiento de cada uno de los fluidos utilizados como modelo; y (2) suplementar los mismos fluidos vaginales con Metronidazol, y someter la mezcla al análisis espectrofotométrico, con el objetivo de determinar si aparecían cambios en la absorbancia de los compuestos preexistentes y si aparecían compuestos neoformados. Para obtener fluido vaginal se realizó un hisopado del la región caudal de la vagina. El hisopo se introdujo en 4ml de solución fisiológica, se agitó en Vortex y se filtró con Millipore® de 0,2 micras. Se sembraron alícuotas de 0,4ml de fluido vaginal sin suplementar y 0,4ml de fluido vaginal suplementado con 0,1ml de Metronidazol 0,14 mM en una matriz de gel Sephadex G25® (Pharmacia). Mediante un colector de fracciones se recuperaron 26 fracciones (2,8ml cada una) a las cuáles se les midió la absorbancia a 200 nm. En el caso de los fluidos vaginales de XIV Jornadas de Divulgación Técnico-Científicas 2013. Jornada Latinoamericana Facultad de Ciencias Veterinarias – Universidad Nacional de Rosario Absorbancia (200 nm) perras sin suplementar (Figura) se observó que en todas las muestras se presentó un grupo de moléculas de bajo peso molecular (similar a la talla molecular del Azul de Bromofenol; 699 daltons) y una elevada concentración de compuestos insaturados que corresponden a la fracción excluida cuando se utiliza este tamiz molecular (n=11). En el caso de los fluidos vaginales de perras suplementados con Metronidazol se observa un aumento de la cantidad de compuestos insaturados y por lo tanto de la cantidad de compuestos oxidables del sistema (n=11). En el caso de los fluidos 0.5 vaginales de ovejas sin suplementar (Figura) la absorbancia correspondiente a la fracción excluida se comporta de manera similar que en perras, es decir, siempre se encuentra en el 0.25 mismo volumen de elución aunque con variada intensidad (n=4). En el caso de los fluidos vaginales de ovejas suplementados con Metronidazol se observa que la 0 absorbancia correspondiente a 0 40 80 la fracción excluida disminuye Volúmen (ml) (n=4). Este resultado sugiere Caninos Ovinos que la estabilidad del grupo funcional –NO2 fuera de la célula microbiana podría ser afectada. Por lo tanto estos resultados son relevantes en dos aspectos: (i) existió una diferencia en el comportamiento de los dos fluidos vaginales; (ii) que el metronidazol podría modificar su especiación y a través de este tipo de cambio, su mecanismo de pasaje al interior de la célula microbiana y aún en el caso de que el pasaje no sea afectado, la especie que ingrese tenga modificada su capacidad de reducción intracelular, proceso que está a la base de su acción antibiótica. BIBLIOGRAFÍA 1. Castelli, M.; Malagoli, M.; Lupo, L.; Roffia, S.; Paolucci, F.; Cermelli Zanca, A.; Baggio, G.J. Antimicrob.Chemother 46: 541 – 550. 2000 2. Geshnizgani, A.M.; Onderdonk, A.B. 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