BBL? Mycoslide? 4373157

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN
LAMINOCULTIVOS LISTOS
PARA USAR
DA-273157.00
Rev.: Junio de 2003
BD BBL Mycoslide
USO PREVISTO
BBL Mycoslide es un laminocultivo de tres lados con medios para la detección de hongos,
incluidas levaduras, a partir de orina, esputo, lavados faríngeos, muestras fecales y diversas
muestras recogidas con torundas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Los hongos filamentosos y las levaduras son patógenos frecuentes que causan muchos tipos
de infecciones locales y sistémicas en personas inmunocompetentes e inmunodeprimidas1. Uno
de los patógenos fúngicos más frecuentes es Candida albicans. En pacientes
inmunodeprimidos, C. albicans y la C. dubliniensis recientemente descrita, son los organismos
que con más frecuencia causan infecciones localizadas y sistémicas. Las tres zonas corporales
principales en las que se producen infecciones locales son las vías respiratorias, el sistema
genitourinario y los intestinos. La determinación cuantitativa de las levaduras aisladas a partir
de estas zonas corporales es importante, dado que pueden estar presentes en pequeñas
cantidades en la flora normal pero aumentan significativamente durante las infecciones1-5.
BBL Mycoslide está formado por un soporte de agar de tres lados, cubierto por dos medios
fúngicos y un medio para la detección de bacterias presentes en la muestra. Todo el soporte de
agar se sumerge en muestras líquidas o se inocula mediante la extensión de las muestras a
partir de torundas. Después de la incubación, los aislados pueden someterse a recuentos y ser
utilizados para pruebas de diferenciación e identificación adicionales y pruebas de sensibilidad.
El medio 1 es el agar malta, para la detección de todo tipo de hongos, incluidos los hongos y
levaduras. El extracto de malta contiene todos los nutrientes necesarios para favorecer el
crecimiento de hongos. El bajo pH del medio produce una inhibición parcial o completa de las
bacterias contaminantes, pero es bien tolerado por los hongos. Este medio se utiliza para la
determinación cuantitativa de los patógenos fúngicos.
El medio 2 es el agar malta suplementado con cicloheximida que es un inhibidor de mohos
saprofitos y determinadas levaduras. La mayoría de los hongos patógenos, incluida la Candida
albicans, no es inhibida en este medio. Sin embargo, Cryptococcus neoformans y determinadas
especies de Candida diferentes de C. albicans que también pueden desempeñar un papel como
agentes infecciosos, son inhibidas por la cicloheximida.
El medio 3 es el agar CLED (Agar cistina-lactosa deficiente en electrolitos), un medio de cultivo
diferencial para el aislamiento y el recuento de bacterias presentes en la orina. También puede
ser utilizado para aislar bacterias a partir de otras muestras si dichos organismos no son muy
exigentes. En BBL Mycoslide, el medio se utiliza principalmente para determinar la flora
bacteriana acompañante.
BBL Mycoslide se utiliza para la detección, el aislamiento y el recuento de hongos a partir de
una variedad de zonas corporales y tipos de muestras. También puede ser utilizado como
medio de transporte de la consulta del médico a los laboratorios de análisis.
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REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
BBL Mycoslide
Medio 1: Agar malta
Extracto de malta
Agar
pH 4,1 ± 0,2
30,0 g
15,0
Medio 2: Agar malta con
cicloheximida
Extracto de malta
30,0 g
Agar
15,0
Cicloheximida
1,0
Medio 3: Agar CLED
Peptona de gelatina
Peptona de caseína
Extracto de carne
bovina
pH 4,1 ± 0,2
Lactosa
L-cistina
Azul de bromotimol
Agar
pH 7,3 ± 0,3
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
4,0 g
4,0
3,0
10,0
0,128
0,02
15,0
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar los laminocultivos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Emplear técnicas asépticas y medidas de protección contra peligros biológicos durante todo el
procedimiento. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y
desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
Cuando se utilice BBL Mycoslide como medio de transporte desde la consulta del médico al
laboratorio de diagnóstico, cumplir las normas locales para el envío de muestras infecciosas.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir BBL Mycoslide almacenarlo en un lugar oscuro a 15 – 20 °C en el envase original
hasta momentos antes de su utilización. No congelar, sobrecalentar, deshidratar ni someter a
fluctuaciones de temperatura.
Los portaobjetos pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del envase)
e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Los portaobjetos sin abrir de envases abiertos almacenados en un lugar limpio a 15 – 20 °C
pueden ser utilizados hasta la fecha de caducidad. Una vez abiertos, deben utilizarse de
inmediato.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Preparar suspensiones equivalentes al patrón N° 0,5 de McFarland de las cepas mencionadas
a continuación. Para cada organismo, preparar un tubo (lo suficientemente ancho para permitir
la inserción de un soporte de agar BBL Mycoslide) con 20 – 25 mL de solución salina estéril y
añadir 1 mL de la suspensión anterior de la cepa. Abrir un BBL Mycoslide, quitar un soporte
de agar, sumergirlo brevemente en la suspensión de la cepa de prueba y continuar según lo
descrito en Procedimiento de análisis para las muestras líquidas. Incubar de 2 a 5 días a 35 ±
2 °C. Examinar si las superficies de agar presentan crecimiento, según lo descrito en
Resultados e Interpretación.
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Cepas
Candida albicans
ATCC 10231
Aspergillus niger
ATCC 16404
E. coli
ATCC 25922
Pseudomonas aeruginosa
ATCC 27853
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Sin inocular
Medio 1
Agar malta
Medio 2
Agar malta con
cicloheximida
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Ámbar claro
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Inhibición de parcial a
completa
Ámbar claro
Medio 3
Agar CLED
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Crecimiento
Amarillo
verdoso
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BBL Mycoslide. Con control microbiológico.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BBL Mycoslide es adecuado para el aislamiento y recuento de hongos a partir de orina (de la
parte media de la micción, de sonda o bien orina recogida mediante punción vesical
suprapúbica), esputo, lavados faríngeos y otras muestras diversas (por ej., torundas vaginales).
No utilizar para detectar infecciones bacterianas.
Recogida y preparación de las muestras
Emplear técnicas asépticas al recoger las muestras. Utilizar los procedimientos estándar para la
recogida1,6.
La orina debe ser de una muestra reciente y de no más de 2 h. También se pueden mantener
las muestras de orina refrigeradas (hasta 24 h) para evitar el crecimiento excesivo de los
agentes infecciosos o contaminantes antes de la inoculación.
Esputo: Una parte de un esputo expectorado o inducido reciente se añade a una parte de
solución de tripsina al 0,25% y se agita con microesferas de vidrio estériles durante 45 minutos
a 37 °C. También el esputo se puede homogeneizar en un homogeneizador Stomacher durante
1 minuto. Si sólo se dispone de una pequeña cantidad de esputo, se puede utilizar sin
tratamiento previo.
Lavados faríngeos: Centrifugar el líquido durante 10 minutos a 2000 x g. Desechar la fase
líquida, tomar el sedimento en 5 mL de solución de tripsina (0,25%) o solución salina estéril y
agitar con microesferas de vidrio estériles durante 15 minutos a 37 °C.
Muestras fecales, recientes o refrigeradas durante un máximo de 48 h. Homogeneizar una
muestra fecal en 100 ml de solución de tripsina al 0,25% o solución salina estéril con
microesferas de vidrio estériles durante 15 minutos a 37 °C.
Torundas: Recoger la muestra (por ej., de la faringe o la vagina) en una torunda y aplicar
directamente sin tratamiento previo según se describe a continuación. Si se produce una
demora entre la recogida y la inoculación, transportar la torunda en medios de transporte
adecuados1,6.
Procedimiento de análisis
1. Examinar a simple vista las superficies del agar con el tubo BBL Mycoslide cerrado.
Desechar los portaobjetos con reducción de los medios o contaminación.
2. Etiquetar el tubo con el nombre del paciente, el número de muestra y la fecha de inoculación.
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3. Desenroscar la tapa y retirar el portaobjetos del tubo de plástico sin tocar las superficies del
agar.
Inoculación con muestras líquidas (por ej., orina o lavados faríngeos):
1. Sumergir brevemente el portaobjetos tres veces en las muestras líquidas (por ej., orina o
esputo pretratado, lavados faríngeos, etc.) de manera que las capas de agar sean
inoculadas completamente por el líquido. No dejar el portaobjetos en el líquido durante más
de 10 segundos, dado que así se podrían eliminar los ingredientes y/o soltarse el gel del
soporte de plástico.
2. Si se dispone solamente de un pequeño volumen de muestra, recogerlo con una pipeta
estéril o jeringa y enjuagar los tres medios completamente.
3. Dejar que el exceso de material se escurra, sosteniendo por la punta del portaobjetos contra
el borde interno del tubo.
4. Las últimas gotas pueden ser eliminadas de la punta del portaobjetos con un papel tisú.
Colocar con cuidado el portaobjetos nuevamente en el tubo de plástico y cerrar
completamente.
5. Incubar el portaobjetos durante 48 h a 30 ± 2 °C o enviar a un laboratorio especial después
de la inoculación. Es posible que se requiera una incubación más prolongada para el
crecimiento de hongos filamentosos, por ej., a partir de infecciones de las vías respiratorias
inferiores.
Inoculación con muestras de torundas:
Extender con cuidado la torunda sobre los tres medios de cultivo del portaobjetos.
Resultados e Interpretación
Después de la incubación, retirar con cuidado el portaobjetos del tubo para realizar la
interpretación. Emplear técnicas asépticas durante todo el procedimiento de examen. Se
recomienda utilizar guantes quirúrgicos durante el examen. ¡No tocar las superficies del agar!
Medio 1 (agar malta): Este medio permite la detección del recuento total de todos los hongos.
Los hongos filamentosos a veces producen colonias con una superficie rugosa (micelio aéreo).
Las colonias a menudo presentan pigmentación (negro, gris, azul verdoso, amarillento y otros).
Las especies de levadura producen colonias de color de blanco a crema, de brillantes a opacas,
que generalmente tienen una superficie lisa y se asemejan a las colonias bacterianas. Se
requieren más pruebas para lograr una identificación completa de los patógenos1.
Para una determinación cuantitativa, comparar el crecimiento real en el portaobjetos con las
imágenes de referencia suministradas en la Guía de interpretación al final de este documento.
En caso de crecimiento denso y grandes cantidades de colonias (≥105), las superficies de agar
pueden cubrirse por completo con la “capa” confluente de crecimiento.
Consultar en la tabla y las referencias la importancia clínica de los recuentos de patógenos para
las muestras de diversas zonas corporales1-5:
Tipo de muestra
Orina de la parte media de la micción o de
sonda
Orina recogida mediante punción vesical
suprapúbica
Esputo
Lavados faríngeos
Muestras fecales
Muestras vaginales
1)
Número de colonias de levaduras
Normal1)
Dudoso2)
Importancia
clínica
105/mL
104 – 105/mL
≤103/mL
La presencia de cualquier hongo tiene importancia clínica
105/mL
104 – 105/mL
≤103/mL
>104
103 – 104
≤102
4
5
3
>105/g 3)
10 – 10 /g
≤10 /g
La presencia de cualquier aspecto de hongos tiene
importancia clínica
Los recuentos bajos pueden ser significativos en pacientes tratados previamente o en pacientes con infecciones
crónicas.
2)
Volver a evaluar si es posible.
3)
Se debe evaluar con cuidado en pacientes con altos recuentos de lavaduras en las muestras fecales. Los
recuentos elevados se detectan a menudo en pacientes con tratamiento previo de antimicrobianos y antibacterianos.
Al final del tratamiento antibacteriano, el recuento de levaduras a menudo se reduce nuevamente hasta volver a su
1,3
valor normal. En los pacientes inmunodeprimidos, incluso los recuentos bajos pueden indicar una infección .
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Medio 2 (agar malta con cicloheximida): Este medio asegura la supresión de aquellos hongos
filamentosos sensibles a la cicloheximida (por ej., mohos como Aspergillus). Determinadas
levaduras también son inhibidas por este aditivo. La resistencia a la cicloheximida es una
característica importante para la diferenciación de hongos:
Resistente a la
cicloheximida
Sensible a la cicloheximida
Organismos1)
Candida albicans
C. dubliniensis
C. guilliermondii
C. kefyr (=C. pseudotropicalis)
Otras especies
Candida tropicalis
C. krusei
C. parapsilosis
C. (Torulopsis) glabrata
Cryptococcus neoformans
Aspergillus, Penicillium, y other fungi
1)
Importancia clínica y frecuencia
Patógeno importante, frecuente
A menudo detectado en pacientes
con HIV
Raro, bajo
Raro, bajo
Raro
Raro, bajo
Patógeno relativamente frecuente,
conocido
Patógeno raro, conocido
Patógeno relativamente frecuente,
conocido
Patógeno raro, importante
Aspergillus puede producir
infecciones en, por ejemplo, las
vías respiratorias inferiores. Estos
hongos también pueden aparecer
como contaminantes.
Se debe tener en cuenta que el crecimiento o la inhibición en este medio no se ven limitados a las especies
enumeradas en esta tabla. Los organismos mencionados ocurren muy frecuentemente en muestras clínicas. Para
obtener más información, consultar las referencias1,7.
Medio 3 (agar CLED) se utiliza para la determinación cuantitativa del recuento bacteriano
presente en la muestra. Los recuentos bacterianos pueden ser importantes en la evaluación de
la relación entre crecimiento bacteriano y hongos, por ej., en muestras fecales.
Tener en cuenta que son necesarias pruebas adicionales, tales como procedimientos
bioquímicos y/o al microscopio, para identificar por completo los patógenos aislados para este
laminocultivo1. La mayoría de estos métodos sólo están disponibles en los laboratorios de
diagnóstico y, por lo general, no pueden ser realizados en la consulta del médico. Por tanto,
todos los laminocultivos con resultados dudosos o claramente positivos deben ser enviados al
laboratorio de análisis que realiza las pruebas micológicas.
Después de su utilización y antes de desecharlos, todos los tubos usados y otros materiales
contaminados deben ser esterilizados en autoclave o incinerados. Para obtener detalles, véase
el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BBL Mycoslide se utiliza para la detección, el aislamiento y la detección de hongos, incluidas
las levaduras a partir de orina, esputo, lavados faríngeos, muestras fecales y otras muestras
numerosas. Los medios contenidos en este laminocultivo son medios estándar utilizados
comúnmente para el aislamiento de los grupos fúngicos y bacterianos respectivos1, 8-10.
De vez en cuando el crecimiento de bacterias en el medio de cultivo fúngico (medios 1 y 2) de
este laminocultivo no se suprime por completo. En los casos dudosos, se debe realizar una
tinción con azul de metileno o tinción de gram a partir de las colonias presuntivas.
La mayoría de las especies bacterianas menos exigentes crecerán en el medio 3 (agar CLED).
Sin embargo este medio no favorece el crecimiento de organismos tales como la especie
Neisseria, Haemophilus spp., y otros. Los estreptococos beta-hemolíticos no crecen bien en
este medio. Por tanto, se debe incluir agar sangre o agar chocolate si se sospecha infección
bacteriana con dichos organismos. En BBL Mycoslide, el agar CLED se utiliza principalmente
para determinar la flora bacteriana acompañante. Para obtener un diagnóstico exacto de las
infecciones bacterianas, se recomienda utilizar otros sistemas y medios. Los sistemas BBL
Urotube se deben utilizar para el diagnóstico de infecciones bacterianas a partir de muestras de
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orina. Las muestras para la detección de infecciones bacterianas de otras zonas corporales
deben ser procesadas en medios de cultivo en placas según lo apropiado para la muestra.
El número de especies que pueden crecer en los medios de este laminocultivo es elevado y no
se limita a las especies mencionadas en la sección Resultados e interpretación. La
identificación apropiada de muchos organismos puede ser realizada solamente por laboratorios
de análisis. Por tanto, los portaobjetos deben ser enviados a dichos laboratorios después de la
inoculación o después de la inoculación e incubación.
BBL Mycoslide es un sistema diseñado para ser utilizado para aislamiento primario y recuento.
Para las pruebas adicionales y, especialmente, si se producen cultivos mixtos en los medios de
este sistema, se deben realizar subcultivos en medios en placa apropiados para obtener
cultivos puros, lo que es preceptivo para obtener una identificación completa y pruebas de
sensibilidad1.
Los laminocultivos no deben utilizarse para realizar pruebas de sensibilidad en disco.
REFERENCIAS
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Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
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(eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 10 and 11.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
3. Kist, M., et al. 2000. Infektionen des Darmes. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S. Gatermann (eds.):
MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol. 9. Urban & Fischer,
Munich, Germany.
4. Podbielski, A., et al. 2000. Infektionen des Mundes und der oberen Atemwege. In: Mauch, H. and R.
Lüttiken (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol.13.
Urban & Fischer, Munich, Germany.
5. Mauch, H., et al. 2003. Infektionen der tiefen Atemwege Teil II. In: Mauch, H., Lüttiken, R., and S.
Gatermann (eds.): MiQ - Qualitätsstandards in der mikrobiologisch-infektiologischen Diagnostik, vol.
8. Urban & Fischer, Munich, Germany.
6. Sutton, D.A. 2003. Specimen collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed.
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7. Hazen, K.C. 1995. New and emerging yeast pathogens. Clin. Microbiol. Rev. 8: 462-478.
8. MacFaddin, J. D. 1985. Media for isolation-cultivation-identification- maintenance of medical bacteria,
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9. Larone, D.H. 1995: Medically important fungi - a guide to identification. 3rd edition. ASM Press,
Washington.
10. Atlas, R.M. 1993. Handbook of Microbiological media. CRC Press, Boca Raton, FL.
ENVASE Y DISPONIBILIDAD
BBL Mycoslide
N° de cat. 273157
10 portaobjetos
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D-69126 Heidelberg/Germany
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Urotube and Mycoslide are trademarks of Becton Dickinson GmbH.
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection.
 2003 Becton, Dickinson and Company
GUIA DE INTERPRETACION (agar malta, medio 1)
103
104
105
106
Para la determinación cuantitativa de recuentos de células (véase la sección Resultados e
interpretación para conocer los recuentos de importancia clínica)
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