TRANSFORMACIÓN GENÉTICA DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS (BEAUVERIA BASSIANA Y METHARIZIUM ANISOPLIAE) PARA EL CONTROL DE LA BROCA DEL CAFÉ (HYPOTHENEMUS HAMPEI) Y EL SALIVAZO DE LA CAÑA DE AZÚCAR (AENEOLAMIA POSTIOCA) Resumen ejecutivo El investigador colectó frutos de Coffea arabica infestados por Hypothenemus hampei y micosados por Beauvera bassiana a diferentes alturas de tres regiones cafetaleras de Veracruz. Los especímenes de broca colectados se conservaron a 6 °C hasta el aislamiento del hongo. Los aislamientos se caracterizaron genéticamente mediante una reacción de amplificación al azar de fragmentos polimórficos por reacción en cadena de la polimerasa (PCRRAPD). Los insectos micosados los obtuvo de la cereza perforada y los esterilizó con hipoclorito de sodio al 8% durante 10 segundos. Los sembró en medio Agar Dextrosa Sobourad, donde fueron incubados hasta el desarrollo del hongo. Obtuvo tres cepas de Metarhizium anisopliae previamente evaluadas en contra de Salivazo de los pastos. Las cepas bacterianas que usó para la replicación de los vectores diseñados y la transformación de hongo fueron: escherichia coli, cepa TOP 10, del CINVESTAV Irapuato, y Agrobacterium tumefasciens, cepa LBA 4404, del CINVESTAV Irapuato. Para seleccionar a las cepas con mayor agresividad y potencial de ser modificadas para mejorar su actividad, realizó bioensayos de susceptibilidad de B. bassiana sobre broca del café (Hypothenemus hampei) y Metarizhium anisopliae sobre mosca pinta (Aeneolamia postica) para determinar sus dosis letales medias y su tiempo letal medio (DL50 y TL50). Transformó a B. bassiana y M. anisopliae con el gen Belt y prb1 que codifican, respectivamente, para una toxina específica para insectos y un análogo de la proteasa PR de M anisopliae obtenido de Trichoderma harzanium. Los resultados indicaron que no hay diferencias significativas entre los valores de DL50 y TL50 en comparación con las cepas silvestres, lo cual sugiere al investigador que puede haber problemas de expresión de los genes insertados. Demanda o problemática que atiende Avanzar en el conocimiento del control de insectos plaga mediante el uso de herramientas de control biológico, tales como los patógenos o microparásitos con capacidad para regular poblaciones de insectos plaga. Otro problema es que los hongos entomopatógenos tienen una vida corta de anaquel (no mayor a tres meses) y tiempos largos de actividad en campo (7 a 21 días). En este estudio se plantea la opción de incorporar el gen Belt en el genoma de B. bassiana y M. anisopliae con el fin de reducir el tiempo de actividad en campo. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada Los resultados obtenidos fueron: a) un cepario de las cepas agresivas sin transformar de Beauvera bassiana y Metharizium anisopliae contra la broca del café (Hipotenumeus hampeii) y Salivazo de los pastos (Aneolamia sp) 12 y 7, respectivamente; b) los aislamientos de B. bassiana fueron ampliamente caracterizados, por lo que se les otorgó la categoría de cepas; c) seis cepas transformadas de B. bassiana con el gen Belt, y cinco con el gen PBR1. Pero además, se logró tener datos confiables de la suceptibilidad de B. bassiana y M. anisopliae en contra de H. hampei y A. postica a un nivel no reportado antes. Impactos Se generaron cepas transformadas mediante el sistema comprometido, que aunque no se alcanzó el objetivo de potenciar la agresividad en las transformantes, sí demostró tener la suficiente eficiencia (aunque baja) para ser un método económico de transformación. Sin embargo el autor señala que no hubo los elementos técnicos suficientes para realizar estudios que permitieran verificar eventos posibles que explicaran los resultados obtenidos. Asimismo, aun cuando hubo crecimiento en los medios de selección (resistencia a herbicida) y la amplificación del gen de interés por PCR fue positivo, la respuesta buscada de mejorar el tiempo de actividad medio no fue el esperado. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada No se pueden estimar costos de aplicación de la técnica desarrollada. Su verdadera contribución está en la información que se suma al conocimiento científico del biocontrol de la broca del café. Ámbito de aplicación Comunidad científica nacional, que puede aprovechar el cepario de 12 aislamientos de Beauveria bassiana con actividad en contra de Hypothenemus hampei, con potencial al desarrollo de nuevos bioinsecticidas. Información adicional o comentario Aun cuando se alcanzó el objetivo de lograr la transformación mediante esta técnica, no representó un logro esperado de alto impacto, porque la transformación de cepas de Beauveria utilizando esta técnica se reportó durante el tiempo en que fue realizado el proyecto. Clave del proyecto: SAGARPA 2002-C01-1446 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención: sanidad vegetal. Sistemas Producto Café y Caña de Azúcar. Investigador: doctor JOEL LARA REYNA. Institución: Colegio de Postgraduados.