Carolina Pérez Almendro –Laboratorío de Diagnóstico Clínico

Carolina Pérez Almendro –Laboratorío de Diagnóstico Clínico-Hospital Universitario
Doce de Octubre.
BIOLOGIA MOLECULAR .
La Biología Molecular es la ciencia que tiene como objetivo el estudio de los procesos
que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular. La biología
molecular se encarga principalmente del entendimiento de las interacciones de los
diferentes sistemas de la célula ,entre ellas las del DNA y el RNA, que son las que
vamos a estudiar, ya que el Hospital Universitario Doce de Octubre, se encargan del
estudio de diferentes mutaciones para el diagnostico de leucemias, enfermedades
trombóticas, como la trombofília, y cáncer de colon.
Por lo que podemos decir que la Biología Molecular de dicho hospital tiene su base en
la hematología.
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Para realizar estás técnicas en primer lugar tenemos que extraer el DNA o RNA,
de las diferentes muestras, como pueden ser sangre periférica, Medula Ósea, o
biopsias de colón. Dependiendo de la técnica que se necesite se va a usar DNA o
RNA.
La extracción del DNA es bastante sencilla, ya que se basa en una máquina que
con diferentes reactivos y tampones, los cuales están a diferente PH, van a
extraer el DNA, pero por lo contrario la extracción del RNA es bastante
compleja, ya que antes de su extracción hay que hacer un lavado y separar los
leucocitos, a continuación se le van echando diferentes reactivos, centrifugando
hasta su extracción.El RNA se deteriora en muy poco tiempo hay que hacer una
retrotranscripcion y transformarlo en DNA, y posteriormente realizar una PCR,
para ver de que calidad es el RNA extraído, ya que si es de mala calidad, se
comunica.
La mayoría de las técnicas se realizan mediante un PCR, excepto el cáncer de
colón que lo realizan por una secuenciación, por lo que la técnica elegida es la
SECUENCIACIÓN
o SECUENCIACIÓN DEL DNA
La secuenciación de ADN es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya
finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en un
oligonucleótido de ADN. La secuencia de ADN constituye la información genética
heredable del núcleo celular, los que forman la base de los programas de desarrollo de
los seres vivos. Así pues, determinar la secuencia de ADN es útil en el estudio de la
investigación básica de los procesos biológicos. El desarrollo de la secuenciación del
ADN ha acelerado significativamente la investigación y los descubrimientos en
biología. Las técnicas actuales permiten realizar esta secuenciación a gran velocidad, lo
cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciación a gran escala como el
Proyecto Genoma Humano.
Secuenciación por fluorescencia
En el Doce de Octubre realizan una secuenciación por fluorescencia que consiste en lo
siguiente en marcan cada uno de los cuatro didesoxinucleótidos que terminan la cadena
con un colorante fluorescente diferente, con fluorescencias a diferentes longitudes de
onda. Este método es atractivo por su gran capacidad y rapidez y actualmente es el
método de referencia en la secuenciación automatizada con analizadores de secuencia
controlados por computadora. Entre sus limitaciones potenciales están los efectos de los
terminadores fluorescentes en el fragmento de ADN, que produce alturas y formas de
picos desiguales en los registros de secuencia de ADN del cromatograma tras la
electroforesis capilar . El método de secuenciado por terminador fluorescente junto con
analizadores de secuencia de ADN de alto rendimiento se utiliza ahora para la inmensa
mayoría de los proyectos de secuenciación, puesto que es más fácil de llevar a cabo y
tiene un coste menor que los anteriores métodos de secuenciación, pero la mayor
ventaja de este método es que la secuenciación se puede llevar a cabo en una sola
reacción, en lugar de en cuatro reacciones como en el método del cebador marcado. En
una secuenciación por terminador fluorescente se
A continuación, una vez obtenida la gráfica, se miraba donde había una mutación y
comparando con unos patrones de mutaciones, se llegaba a saber cual era la mutación y
cual era el problema que acarreaba.