M MEEM MOORRIIAA PPRRIIM MEERR CCOONNGGRREESSOO EESSTTAATTAALL ““LLAA IINNVVEESSTTIIGGAACCIIÓÓNN EENN EELL PPOOSSGGRRAADDOO MICROPROPAGACIÓN DE SEIS ESPECIES DEL GÉNERO Turbinicarpus Y ANÁLISIS CON MARCADORES MOLECULARES DE LA VARIABILIDAD GENÉTICA DE ONCE ESPECIES DEL MISMO GÉNERO MANUEL SALVADOR DOMÍNGUEZ ROSALES1, EUGENIO PÉREZ MOLPHE-BALCH2 1. Egresado de la Maestría en Ciencias en Biotecnología Vegetal de la UAA. 2. Dpto. de Química. Centro de Ciencias Básicas. Universidad Autónoma de Aguascalientes. INTRODUCCIÓN La situación actual de las cactáceas mexicanas es grave, debido a lo cual se hacen esfuerzos en varios rubros con el fin de conservar y aprovechar racionalmente estas plantas. Las técnicas de propagación basadas en la biotecnología se ha convertido en una opción para su multiplicación, sobretodo en aquellas en las que los métodos tradicionales son poco eficientes y además se encuentran amenazadas. Este es el caso del género Turbinicarpus. Dado que el cultivo in vitro se trata de sistemas de propagación clonal, es importante conocer la variabilidad genética del material inicial con el fin de no permitir que esta se pierda en el proceso de multiplicación. Los marcadores moleculares pueden aportar información valiosa acerca del grado de variación genética presente en las plantas a micropropagar, así como de la posible variación adicional generada por los sistemas de cultivo in vitro. OBJETIVOS 1. Desarrollar sistemas para la generación in vitro de brotes a través de la activación de areolas de seis especies del género Turbinicarpus. 2. Determinar las condiciones óptimas para el crecimiento, enraizamiento in vitro de los brotes generados y adaptación a suelo de once especies seleccionadas del género Turbinicarpus. 3. Adecuar una técnica eficiente para la extracción de ADN y analizar la variabilidad genética de once especies del género Turbinicarpus usando las técnicas RAPD y AFLP. MATERIALES Y MÉTODOS Se establecieron 8 niveles de citocininas a probar para cada una de las especies a propagar: 0.5 mg∙L-1 de BA, 0.5 mg∙L-1 de 2iP, 0.75 mg∙L-1 de 2iP, 1.0 mg∙L-1 de 2iP, 2.0 mg∙L-1 de 2iP, 3.0 mg∙L-1 de 2iP, 4.0 mg∙L-1 de 2iP. Cada concentración se probó en los dos tipos de explante (apical y transversal). Los brotes obtenidos, fueron transferidos a medio MS sin reguladores de crecimiento vegetal, después de 45 días de mantenerlos en las condiciones de luz continua a 25C, se observó que la mayoría de los brotes formaron raíces. Cuando los brotes enraizados, adquirieron un tamaño adecuado para su manejo y raíces vigorosas, se sometieron a un proceso gradual de adaptación a suelo. Para realizar el análisis de la variabilidad genética en plantas micropropagadas de 11 especies del género Turbinicarpus haciendo uso de las técnicas de AFLP y RAPD. RESULTADOS De los tratamientos probados la respuesta más alta se observó en la especie T. schmiedickeanus var. schwarzii, con 11.86 brotes por explante en su tratamiento más eficiente, mientras que la respuesta menor fue para la especie T. schmiedickeanus var. schmiedickeanus sinónimo T. roseiflorus con 7.50 brotes por explante. El análisis de la variabilidad genética se realizó utilizando marcadores moleculares RAPD Y AFLP. Para los RAPD se ensayaron 20 iniciadores de los cuales se eligieron 2 para realizar el análisis con el ADN extraído de cada una de las especies antes y después de la propagación. El análisis de AFLP utilizó cuatro combinaciones de iniciadores, con lo cual se amplificaron 491 productos, de los que el 97% fueron polimórficos, lo que coincide con la diversidad de especies analizadas. Asimismo, se encontró que el proceso de cultivo in vitro si produjo algunos cambios, aunque mínimos, en los patrones de bandas obtenidos por RAPD y AFLP. CONCLUSIONES 1. Se desarrollaron sistemas de propagación in vitro a través de la activación de areolas para seis especies del género Turbinicarpus. En todos los casos se observaron mejores resultados con explantes transversales. 2. El enraizamiento de todas las especies se obtuvo en medio MS sin reguladores del crecimiento vegetal. Las eficiencias de enraizamiento oscilaron entre 56 a 92% 3. Se consiguió la adaptación a suelo de las plantas generadas in vitro, con eficiencias de 54 a 100% 4. Se adecuó una técnica eficiente para la extracción de ADN de las plantas estudiadas. 5. Se obtuvieron datos acerca de la variación genética en las plantas estudiadas usando para ello la técnica RAPD. Se observó que la propagación in vitro si es capaz de generar algunos cambios, aunque mínimos, en los patrones de bandas generados por estos marcadores moleculares. 6. Se obtuvieron datos acerca de la variación genética en las plantas estudiadas usando para ello la técnica AFLP. Se observó que la propagación in M MEEM MOORRIIAA PPRRIIM MEERR CCOONNGGRREESSOO EESSTTAATTAALL ““LLAA IINNVVEESSTTIIGGAACCIIÓÓNN EENN EELL PPOOSSGGRRAADDOO vitro si es capaz de generar algunos cambios, aunque mínimos, en los patrones de bandas generados por estos marcadores moleculares. Además, se generaron datos acerca de la relación filogenético existente entre las especies estudiadas, los cuales podrían resultar valiosos para hacer más clara la taxonomía en este género.