UNIDADE DE MASAS E PROTEÓMICA Edificio CACTUS Campus Vida 15782 Santiago de Compostela (España) Tel. 981563100 - ext. 16242 Fax.-981547077 E-mail: sxemasas@usc.es SOLICITUD PROTEÓMICA INFORMACIÓN DEL USUARIO: Nombre: Departamento: Teléfono: Universidad: Director de Investigación: E-mail: Fecha: / / INFORMACIÓN DE LA MUESTRA: Número de muestras Gel 1D-PAGE 2D-PAGE Adjunta imagen del gel Realizar Reducción-Alquilación Tinción Coomassie Plata Fluorescencia Concentración Proteína Total Taxonomía Muestra grado de tinción (1) Punto Isoeléctrico Peso Molecular aproximado (1)* tp: transparente, pt: poco teñido, tn: tinción normal, bt: bastante teñido, mt: muy teñido. (2) Máximo de banda de 1x3 mm para 1D y 1-2 mm de diámetro para bandas 2D. El procedimiento está optimizado para geles de 1-1.5 mm de grosor. *** Para realizar muestras urgentes contactar con la unidad. Técnica solicitada: PMF por MALDI TOF Fragmentación MSMS por MALDI TOF/TOF Digestión Tríptica nLC-ESI-Trampa ESPACIO A CUBRIR POR LA UNIDAD: Técnico: Técnica: Fecha en la que se recibe: Observaciones: / / Fecha de finalización: / / nLC-MALDI Desalado Zip-Tip NORMAS DE ENVÍO DE MUESTRAS: La unidad emplea el Kit, In-Gel DigestZp kit, de la casa Millipore, para digerir las proteínas. Las condiciones necesarias que tienen que cumplir las muestras, para que se adapten al kit de digestión y a las técnicas de análisis de la unidad son las siguientes: - Enviar las bandas recortadas ajustándose al contorno de la proteína, usando material limpio. Las bandas recortadas se deben enviar en tubos eppendorf cubiertas de agua milli-Q. Junto con las muestras enviar una banda del fondo y un marcador de peso molecular de ese mismo gel, que se usarán como controles del gel. Tamaño de las bandas del gel: 1x3 mm (1D) y 1-2 mm (2D). Enviar imagen del gel, señalando las bandas a analizar. Métodos de teñido: Coomasie normal, Coomasie coloidal, Plata (sin emplear Glutaraldehido), Fluorescencia. Tipos de geles compatibles: geles de poliacrilamida con un porcentaje de acrilamida del 4-20% y un grosor entre 1-1,5 mm. Concentración de proteína: la cantidad de proteína necesaria será de unos pocos femtomoles de proteína aislada en el gel. Se debe tener en cuenta que las proteínas de baja masa molecular (<20 KDa) pueden resultar difíciles de identificar debido al bajo número de péptidos que originan su digestión enzimática. Controless realizados por el laboratorio: Control de la digestión: - digestión de una banda de un marcador de peso del propio gel Control de contaminantes: - digestión de un fondo del propio gel - digestión en un pocillo del kit vacío, sin gel. Control de sensibilidad de los espectrómetros de masas: - Identificación de un Standard de BSA de baja concentración: 50 fmol Para más información podéis consultar nuestra página web. En caso de alguna duda o cualquier consulta, poneros en contacto con la Unidade de Espectrometría de Masas e Proteómica, en la extensión 16242 o por Email, sxemasas@usc.es.