Los verdaderos gatos usan rosa Información de fondo: Los científicos han trazado el mapa del genoma del camarón de agua salada, que es el alimento de los flamencos. Un gen del camarón de agua salada hace que las aves se vuelvan rosadas. El pigmento se llama carotinoide, el cual también se encuentra en zanahorias y otros organismos. Propósito: Los estudiantes simularán modificar genéticamente un organismo para crear el rasgo deseado. Objetivos: Que los estudiantes logren: Seguir las instrucciones para realizar una modificación genética simulada. Materiales: Foto en color del “Sr. Genes Verdes”, el gato que brilla en la oscuridad Baño de calor accesible a todos los grupos Pintura en polvo rosada como, por ejemplo, témpera 1 botella de jarabe de maíz Bolsita hermética etiquetada “Residuos con riesgo biológico” Se necesitarán los siguientes equipos para cada grupo de laboratorio: 1 placa para la formación de “bacterias” (esta placa, en realidad, solo contiene agaragar) 1 placa de agar-agar 3 tubos de ensayo pequeños Uno etiquetado “Muestra de ADN” Otro etiquetado “Solución de transformación” El tercero etiquetado “Plásmido carotinoideo” 1 soporte de tubos de ensayo 1 abrazadera para tubos de ensayo (opcional: los estudiantes pueden sostenerlo con las manos, ya que no hay elementos tóxicos ni peligrosos en los tubos de ensayo) 1 recipiente con agua helada 2 asas de inoculación 2 pipetas Gafas de seguridad y guantes para todos los estudiantes 1 temporizador Tiempo necesario: 1 clase de 60 minutos Normas: Naturaleza de la Ciencia, Tecnología y Sociedad: El Estudiante: o Argumenta en forma oral y escrita el impacto de las investigaciones, la ingeniería genética y la biotecnología sobre la humanidad. 1 o Prepara informes orales y escritos sobre temas relacionados. o Asume posiciones en relación al tema escogido. La Conservación y el Cambio: El Estudiante: o Analiza el impacto de la ingeniería genética y la biotecnología en la humanidad. o Define qué es la biotecnología y la ingeniería genética. Procedimiento: Preparación: Usted está simulando material genético. Nada en este laboratorio es tóxico ni tiene peligro biológico. 1. Prepare o compre las placas de agar-agar; 2. etiquete los tubos de cada grupo de estudiantes (ver materiales); 3. prepare la "Solución de transformación": coloque agua en cada tubo de ensayo con la etiqueta “Solución de transformación”; 4. prepare “Plásmido carotinoideo”: mezcle 1 taza de jarabe de maíz con ¼ de agua para crear una solución que tendrá la viscosidad suficiente para adherirse al asa; 5. llene cada tubo de ensayo de “Plásmido carotinoideo” con 25 ml de solución (alrededor de ¼ del tubo); 6. prepare baños de agua helada para cada grupo; 7. prepare baños de calor a aproximadamente 40 °C; 8. después de que los estudiantes se hayan ido, rocíe sus placas de agar-agar con pintura en polvo rosada y vuelva a sellar para simular que el gen carotinoideo ha sido implantado exitosamente en la bacteria. ¡Y listo! Durante la clase: muestre a los estudiantes la tira cómica de ingeniería genética; hágales las preguntas de la hoja; muestre a los estudiantes la foto del “Sr. Genes Verdes”; los estudiantes deberían discutir en parejas cómo piensan que los científicos hicieron un gato que brilla en la oscuridad; comunique a los estudiantes que hoy van a realizar un proceso similar: modificar bacterias genéticamente para que se vuelvan rosadas al agregar un gen con el pigmento carotinoideo; este es el pigmento que hace que los flamencos se vuelvan rosados, porque comen camarones de agua salada que contienen este gen; déles a los estudiantes la hoja de procedimiento de laboratorio y guíelos a través de los pasos. Actividades de enriquecimiento: Los estudiantes pueden leer la historia del “Sr. Genes Verdes”. 2 Los verdaderos gatos usan rosa: tira cómica de ingeniería genética ¿Qué le hicieron los ingenieros a la gallina? ¿Por qué buscaban este resultado? ¿Qué tuvieron que hacer los ingenieros genéticos para crear esta gallina? ¿Piensas que es posible crear esta gallina genéticamente modificada? ¿Piensas que es ético crear esta gallina genéticamente modificada? Si pudieses modificar genéticamente a organismos vivos, ¿qué te gustaría ver? 3 Los verdaderos gatos usan rosa: el gato que brilla en la oscuridad es un éxito genético ¿Cómo se modifican genéticamente las mascotas? Transgenia: a) Para una raza específica, se traza un mapa del genoma y se busca un rasgo (bueno o malo). Si el rasgo es indeseable y debería eliminarse, se busca el genoma responsable del rasgo. Mediante el uso de la información de la secuencia del genoma, los científicos determinan en qué raza no es fuerte el rasgo. Se aparean las razas sin el rasgo indeseable. b) Para una raza específica, se traza un mapa del genoma y se busca un rasgo (bueno o malo). Si el rasgo debe eliminarse, se manipula el genotipo para “sacarlo” a nivel celular. Si se busca añadir el rasgo, se manipula el genotipo para “incorporarlo” a nivel celular. 4 Los verdaderos gatos usan rosa: procedimiento de laboratorio 1. Ponte las gafas de seguridad y los guantes. 2. Reúne los materiales: 1 placa para la formación de “bacterias” 1 placa de agar-agar 3 tubos de ensayo pequeños 1. Uno etiquetado “Muestra de ADN” 2. Otro etiquetado “Solución de transformación” 3. El tercero etiquetado “Plásmido carotinoideo” 1 soporte de tubos de ensayo 1 abrazadera para tubos de ensayo 1 baño de hielo 2 asas de inoculación 2 pipetas 1 temporizador 3. Usa una pipeta para transferir 1 ml de solución de transformación al tubo con la etiqueta "Muestra de ADN". 4. Mediante el uso de una abrazadera para tubos de ensayo, un integrante de tu grupo debe llevar el “tubo de ensayo con muestra de ADN” al baño de agua caliente. Otro integrante del grupo debe llevar el temporizador. 5. Aplica un choque térmico de exactamente 50 segundos al “tubo de ensayo con muestra de ADN”. 6. Usa la abrazadera para tubos de ensayo para sostener el “tubo de ensayo con muestra de ADN” en el baño de hielo durante 1 minuto. 7. Transfiere las bacterias de la placa de agar-agar al “tubo de ensayo con muestra de ADN”. Utiliza un asa esterilizada para recoger varias colonias de bacterias de la placa de formación. Para hacerlo, se puede pasar el asa por la placa de manera que raspe suavemente las colonias de la superficie. Haz girar el asa rápidamente después de que se haya sumergido en el líquido, para transferir las bacterias al “tubo de ensayo con muestra de ADN”. Repite este procedimiento 4 veces. ¡Cada miembro de tu grupo debería transferir bacterias, por lo menos, una vez! 5 8. Agrega el plásmido carotinoideo al “tubo de ensayo con muestra de ADN”. a. Busca una nueva asa esterilizada. b. Sumerge el asa en el tubo de ensayo que contiene “plasma carotinoideo”. c. Cuando el centro del asa esté recubierto por una película, transfiérela al “tubo de ensayo con muestra de ADN”; ¡debería parecerse a una varita para hacer burbujas! (ver imagen) d. Realiza este procedimiento 2 veces. 9. Usa la abrazadera para tubos de ensayo para sostener el “tubo de ensayo con muestra de ADN” en el baño de hielo durante 2 minutos. 10. Regresa a tu lugar de trabajo. 11. Transfiere las bacterias a las placas de cultivo. a. Sumerge el asa en el “tubo de ensayo con muestra de ADN”. b. Esparce suavemente la solución en la placa de agar-agar. c. Repite este procedimiento 3 veces más. 12. Incuba las placas; para ello, déjalas reposar a temperatura ambiente durante la noche. 13. Desecho y limpieza a. Las asas y pipetas utilizadas deben desecharse en un recipiente para residuos con riesgo biológico. Pregúntale al docente en qué lugar del salón de clases se encuentra este recipiente. b. La placa de agar-agar con las bacterias que utilizaste para tu cultivo inicial también debe desecharse en un recipiente para residuos con riesgo biológico. c. Devuelve los tubos de ensayo al sector designado por el docente. d. Tu placa de agar-agar con las bacterias debe llevarse al sector que haya designado el docente para incubación. e. Se debe rociar la superficie de tu lugar de trabajo con desinfectante y limpiarla con toallas de papel. ¡No olvides lavar las manos! Dibuja y marca cómo crees que se verá mañana tu placa de agar-agar: 6 Los verdaderos gatos usan rosa: el gato que brilla en la oscuridad es un éxito genético Los científicos usan la fluorescencia como marcador genético, pero admiten haberlo hecho, en parte, por diversión Por JOHN POPE, Newhouse News Service, miércoles 22 de octubre de 2008 Nueva Orleáns — Todos saben que los gatos pueden ver en la oscuridad, pero eso no era suficiente para algunos científicos de Nueva Orleáns. Crearon al Sr. Genes Verdes, un gato que brilla en la oscuridad y está destinado a ser algo más que solamente una novedad para las fiestas de Noche de Brujas. Es un gato atigrado anaranjado de casi seis meses, pero, con luz ultravioleta, sus ojos, encías y lengua brillan en un verde lima intenso, como consecuencia de un experimento genético realizado en el Centro Audubon para la Investigación de Especies en Peligro de Extinción. Bajo luz ultravioleta, los ojos, encías y lengua del Sr. Genes Verdes brillan en un verde lima intenso, como consecuencia de un experimento genético realizado en el Centro Audubon para la Investigación de Especies en Peligro de Extinción. El Sr. Genes Verdes parece un gato normal cuando las luces están encendidas. Los científicos de Audubon quieren usar su técnica del gen que brilla para desarrollar un tratamiento de terapia génica para la fibrosis quística. RUSTY COSTANZA/Newhouse News Service “El Sr. Genes Verdes es el primer gato fluorescente de los Estados Unidos”, señaló Betsy Dresser, Directora del centro. Los investigadores lo crearon para saber si se podía introducir, sin causar daño, un gen en la secuencia genética del felino para crear lo que se conoce formalmente como gato transgénico. De poder hacerse, sería el primer paso de un proceso que podría conducir al desarrollo de métodos para combatir enfermedades por medio de terapia génica. “El gen, que se agregó al ADN del Sr. Genes Verdes cuando lo crearon a comienzos de este año en el laboratorio del centro Audubon, no afecta su salud”, aclaró Dresser. 7 “Los gatos son ideales para este proyecto, porque su estructura genética es similar a la de los seres humanos”, manifestó la Dra. Martha Gómez, veterinaria y científica titular del centro. ¿Por qué un gato que brilla? Para mostrar que el gen fuese adonde debía ir, los investigadores se decidieron por uno que brillara. “El gen es solo un marcador”, destacó Leslie Lyons, profesora adjunta de reproducción y salud poblacional de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad de California, Davis, quien está familiarizada con el trabajo del centro Audubon. “El brillo es lo divertido”, dijo. Las criaturas que brillan fueron noticia internacional a principios de este mes cuando entregaron el Premio Nobel de Química a tres científicos que habían descubierto el gen por medio de su trabajo con medusas. Usaron el gen, cuyo nombre formal es proteína fluorescente verde mejorada, para ver cómo es el funcionamiento dentro de los animales e incluso dentro de las células. El Sr. Genes Verdes (su nombre proviene del Sr. Vaqueros Verdes, un personaje del antiguo programa de televisión “Capitán Canguro”) es muy desconfiado con los desconocidos. Pasa la mayor parte del día durmiendo y no le gusta que lo sostengan cuando no quiere que lo acurruquen. Con luz normal, el gato, que pesa 3,2 kg (7 libras) y vive en el centro, se ve y actúa como cualquier otro felino. Pero apague las luces de la habitación y encienda una luz ultravioleta, y podrá ver que sus orejas, ojos, encías y las ventanas de su nariz brillan. “Estas partes del cuerpo se iluminan, porque la proteína tiene más probabilidades de expresarse en las membranas mucosas”, aportó Lyons. “No puede extraviar ese gato de noche”, bromeó C. Earle Pope, el científico principal del centro. “El zoológico congelado” “En teoría, el cajón de arena del gato también debería brillar, porque sus excrementos contienen células epiteliales, en las cuales puede encontrarse el gen. Pero hay demasiadas otras cosas a su alrededor para que se pueda ver el brillo a simple vista sin complicados trabajos de laboratorio”, afirmó Gómez. El centro Audubon comenzó con sus experimentos de clonación de animales en 2001. Dos años después, nació allí Ditteaux, un gato montés africano. Fue el primer carnívoro salvaje clonado del mundo. 8 La clonación comienza con células (generalmente de la piel, aclaró Gómez, porque la extracción no es demasiado invasiva). El material genético se almacena en un tanque de nitrógeno líquido en el cual la temperatura es de -316°. El centro Audubon tiene 12 tanques como ese de especímenes genéticos en espera; Dresser los llama “el zoológico congelado”. Para trabajar con felinos, se extraen óvulos de un felino donante (generalmente un gato doméstico), se les quita el ADN y se lo reemplaza. Para crear al Sr. Genes Verdes, el ADN nuevo incluía el gen fluorescente. Luego se inserta el óvulo fertilizado en una gata madre sustituta, que tendrá una preñez de entre 65 y 70 días. Después de la llegada al mundo de Ditteaux, invitaron a Gómez a discutir el caso ante un grupo de especialistas en terapia génica, quienes, según señaló, estaban interesados en la posibilidad de crear un modelo genético para combatir enfermedades. Una herramienta para detectar la fibrosis quística Los científicos de Audubon desean utilizar su técnica para desarrollar un tratamiento de terapia génica para la fibrosis quística, una enfermedad hereditaria incurable para la cual no hay modelos de terapia génica, según destacó Gómez. El gen de la fluorescencia irá al lado del gen de la fibrosis quística y lo hará fácil de detectar. La meta a largo plazo de este proceso, para el cual no hay fechas establecidas, es producir lo que Gómez denomina un “gen de expulsión forzada”. “El trabajo para este proyecto ya se ha puesto en marcha”, afirmó. “Estamos recopilando datos preliminares, pero no tenemos todos los fondos para hacerlo”. El próximo papel del Sr. Genes Verdes para el centro combinará la ciencia y el sexo. Se convertirá en semental para que el equipo de Audubon pueda determinar si el gen de la fluorescencia puede transmitirse. “No debería llevar más de dos ciclos de reproducción”, destacó Gómez. “Si él es fértil y la hembra es fértil, debería llevar poco tiempo”, dijo. “La idea no es generar un montón de gatos verdes, sino demostrar que el gen puede transmitirse”. Después, se jubilará e irá a vivir a la casa de Gómez, donde ya viven dos gatos. “Siento que es mi bebé”, manifestó Gómez, quien dirigió al equipo que lo creó. “Deben entender que es nuestro primer gato transgénico”, señaló. “No quiero que vaya con cualquiera. Siento que es mío”. http://www.ajc.com/services/content/pets/stories/2008/10/22/glowing_cat_green_genes.html 9