UNIVERSIDAD NACIONAL DEL LITORAL FACULTAD DE Cs. VETERINARIAS CÁTEDRA DE FISIOLOGÍATRABAJO PRÁCTICO N° 11 TEMA: APARATO REPRODUCTOR FEMENINO. Introducción: Durante los ciclos reproductivos en los animales, las gónadas femeninas proporcionan la maduración de los gametos (oocitos), para el crecimiento de células foliculares y para la secreción regular de varias hormonas, con el fin de llegar a uno de los acontecimientos más importante en dicho ciclo, la ovulación. La identificación del momento de la ovulación de manera precisa no es posible, pero debemos reconocer los cambios anatomofisiológicos y etológicos que se producen en las distintas especies para poder determinar el momento adecuado de la copula ya que el tiempo de vida de los gametos tanto femenino como masculino es limitado, variando de acuerdo a la especie. La interacción de los gametos producidos por ambos sexos constituye la base del proceso reproductor. En el macho la gametogénesis se produce de forma continua, en la hembra, la formación y liberación de las células germinales es un proceso cíclico debido a las interacciones endocrinas que se producen entre el hipotálamo, la hipófisis y los ovarios. Para el reconocimiento de la anatomía funcional del aparato reproductor femenino es necesario un estudio exhaustivo y ordenado de las distintas partes que conforman dicho sistema, como así mismo es importante observar cuidadosamente los cambios de comportamiento que se producen en las distintas especies para reconocer en que fase del ciclo reproductivo se encuentran. En este trabajo práctico se observaran las distintas partes del aparato reproductor femenino, se palparán las distintas estructuras y se analizarán algunas de las técnicas para la identificación de las etapas del ciclo estral. Descripción anatómica del aparato reproductor femenino. El aparato reproductor de las hembras consta de gónadas (ovarios), aparato genital interno o tubular compuesto por oviductos, útero, cuello uterino o cérvix y vagina, genitales externos vestíbulo, vulva, clítoris, y glándulas vestibulares. Genitales externos En un trayecto desde posterior hacia anterior encontramos: Vulva: formada por dos labios mayores y menores, muy desarrollados en los animales domésticos, los labios mayores poseen gran cantidad de glándulas sebáceas y tubulares, depósitos de grasa, tejido elástico y una capa de músculo liso; en la superficie externa tiene la misma estructura que la piel. Los labios menores poseen tejido conjuntivo esponjoso y glándulas sebáceas Vestíbulo vaginal: la unión de vagina y vestíbulo es marcada por el orificio uretral externo y a menudo por un borde (el himen vestigial). En la vaca se extiende hacia el interior unos 10 cm, hasta el sitio donde el orificio uretral externo se abre en su superficie ventral. Detrás de esta abertura se encuentra el divertículo suburetral, que es un saco ciego, en la especie canina es muy importante reconocer este divertículo tambíen llamado fosa clitoriana cuando se realizan maniobras de inseminación artificial o citología vaginal. En este diverticulo desembocan las glándulas de Bartholin, que secretan un líquido viscoso más activamente en el estro. Clítoris: la comisura ventral del vestíbulo oculta el clítoris, compuesto de tejido eréctil y abundantes terminaciones nerviosas sensoriales. La estructura anatómica varía con las distintas especies. Vagina: la vagina es un conducto músculo-membranoso con estructura trilaminar, conectado cranealmente con el cervix o cuello uterino. El revestimiento epitelial sufre cambios cíclicos paralelos a los cambios hormonales, variando de escamoso estratificado influencia de los estrógenos, a cuboide de células planas por la acción de la progesterona. Estos cambios cumplen distintas funciones de acuerdo a la etapa del ciclo que se encuentra el animal y son claramente diferenciados con las técnicas citológicas. Utero : es un órgano músculo-membranoso, cuyas paredes están formadas por una membrana serosa externa, una capa intermedia de músculo liso llamada miometrio y una capa interna mucosa llamada endometrio rica en glándulas cuya secreción es particularmente importante para la supervivencia del embrión en el primer momento de la gravidez. Estas estructuras durante cada ciclo sufren diferentes cambios al igual que durante la gestación, dichos cambios son claramente palpables en las grandes especies. Estas modificaciones comprenden:variación en el riego sanguíneo, excitabilidad miometrial y desarrollo de las glándulas endometriales. El utero consta de tres partes: cuernos, cuerpo y cérvix . El tamaño y la forma varían en las distintas especies por tratarse de una adaptación anatómica para el número de fetos que tiene que alojar. Cérvix o cuello uterino: estructura cilíndrica en forma de esfínter con una pared muscular gruesa que le permite contraerse o relajarse durante el estro para permitir el paso del semen o la expulsión del feto durante el parto, presenta pliegues prominentes con numerosas células secretoras que originan el moco cervical. La cantidad, viscosidad y color de este moco varía dependiendo del momento del ciclo estral y de la especie. Se sitúa medialmente en la cavidad pelviana. El largo y el diámetro depende de la especie, en una vaca vacía son de 8-12 cm y 4-6 cm respectivamente y en vaquillonas de 5 -8 cm y 3 - 4 cm. Cuernos uterinos: Ligamento intercornual: Hay dos porciones de este ligamento, una dorsal que es fina y una ventral, mas gruesa y fuerte. La porción ventral se usa para retraer y volver hacia arriba el útero, pero puede ser necesario tirar cuidadosamente de la porción superior para poder alcanzar la inferior, volviendo hacia arriba los cuernos . Ovarios, se encuentran laterales y caudales a la punta de los cuernos, son estructuras redondeadas o cilíndricas donde la longitud a lo largo del borde fijo, es de 2 - 5 cm, la altura desde el borde fijo al libre es de 1,5 - 4 cm y el grosor desde el lado anterior al posterior es de 1,5 - 3 cm. Las estructuras normales que se encuentran en los ovarios son folículos y cuerpos lúteos. Los folículos normales son estructuras redondeadas, lisas con buena tensión. La fluctuación puede percibirse por palpación. Los folículos palpables más pequeños son de 5 - 6 mm de diámetro y el diámetro máximo normal es de 20 mm. Los folículos próximos a ovular son suaves y aplanados. Después de la ovulación el folículo colapsado es más chico que el folículo preovulatorio. Este se denomina con frecuencia, cuerpo hemorrágico pero contiene muy poca sangre comparado con otras especies que presentan cuerpos hemorrágicos reales. A partir de esta estructura se desarrolla el cuerpo lúteo y alcanza un tamaño máximo de 20 30 mm en la mitad del ciclo. La consistencia es fluctuante has la regresión que comienza alrededor del día 17 del ciclo, cuando éste se vuelve más firme. El cuerpo lúteo de la preñez es redondeado, más edematoso que el cuerpo lúteo cíclico, especialmente a los 3 - 5 meses de preñez. Cambios en los órganos sexuales durante el ciclo estral normal. Durante el proestro el tono del útero está aumentado y los cuernos se vuelven enrollados. En uno de los ovarios puede palparse un folículo relativamente grande con consistencia tensa. El cuerpo lúteo es pequeño, firme y generalmente de forma triangular. Puede observarse con frecuencia una descarga vulvar acuosa clara. En el estro, el folículo crece rápidamente en tamaño y se vuelve blando antes de la ovulación. El útero está contraído, firme con una superficie irregular, preparado para contracciones de la capa muscular. Hay una descarga por la vulva de un moco claro con alta viscosidad. Durante el metaestro, el folículo ha ovulado y el nuevo cuerpo lúteo se está formando. Este es pequeño, y difícil de palpar los primeros días después de la ovulación. A veces se siente como que hubiese sangre coagulado a la palpación. Inmediatamente ocurrida la ovulación, el útero todavía está contraído, con una estructura más lisa que antes. También es común encontrar en este momento al cérvix en una posición casi vertical. Mas tarde el útero se vuelve laxo. En muchas vacas se observa una descarga de moco sanguinolento, especialmente durante el invierno. Días 6 al 11 del ciclo: El cuerpo lúteo ahora se puede palpar bien y aumenta de tamaño hasta los días 8 - 10. Al mismo tiempo éste adquiere su consistencia hipotéticamente tipo hígado y de forma redondeada. Todos los folículos del ciclo anterior, de 5 mm de diámetro, han sufrido atresia una nueva ola de folículos comienza a crecer desde el tercer o cuarto día del ciclo. El folículo más grande crece hasta el día 11 donde se vuelve atrésico, después de que pudo palparse blando y aplanado. Días 12 - 19 del ciclo: Una nueva ola de folículos ha comenzado a crecer. El mas grande siempre se puede palpar y generalmente es preovulatorio. El cuerpo lúteo mantiene su tamaño hasta el día 16 o 17 y frecuentemente tiene una corona. Cuando el cuerpo lúteo se reduce en tamaño, habitualmente comienza en la parte periférica, con lo cual se vuelve triangular y al mismo tiempo mas firme que antes. Tema: CITOLOGIA VAGINAL EN LA PERRA. Clasificación de células vaginales. Los cambios en la cavidad vaginal durante el proestro y el estro se reflejan en la aparición de células epiteliales vaginales exfoliadas (se piensa que estos se deben a los niveles de estrógenos circulantes). Los estrógenos ocasionan espesamiento del epitelio vaginal por lo que la citología vaginal también es un indicador indirecto de la presencia de estrógenos. La perra no exhibe, como en otras especies, un epitelio vaginal cornificado. Los diferentes tipos celulares representan estadíos de muerte celular. Cuando las células vaginales redondas normales mueren, se vuelven mas grandes, de formas más regulares, de tinción más pálidas, núcleos más pequeños, picnóticos, quedando una célula anuclear. Células parabasales: más sanas y pequeñas, redondas o ligeramente ovales, de núcleos grandes y citoplasma pequeño. Estas son exfoliadas desde casi la capa germinal, cercana al suministro sanguíneo subyacente Células intermedias: el tamaño varía desde apenas más grandes que las parabasales hasta un volumen del doble del tamaño. Son redondas, ovales de márgenes irregulares y los núcleos suelen ser más pequeños que los de las células parabasales. El primer paso en la muerte celular, es el cambio en la morfología, pues las células se vuelven más grandes y parecen tener cantidades relativamente mayores de citoplasma y núcleos más pequeños. Se clasifican en células intermedias, pequeñas y células intermedias grandes Células superficiales: son las más grandes, tienen márgenes angulosos, planos y agudos, su tinción es exigua. Sus núcleos son picnóticos, o con pérdida gradual de la coloración. Escamas anucleares: son células irregulares, grandes, muertas que prepresentan el final de un proceso iniciado con las células parabasales redondas y sanas. Estas células mueren por el distanciamiento de su irrigación sanguínea (por el espesamiento vaginal). A éstas también se las denomina queratinizadas o cornificadas. No poseen núcleo. Citología vaginal en las distintas fases del ciclo estral. Proestro: se divide en temprano medio y tardío. Temprano: el frotis es similar a una hembra en anestro, con una gran diferencia, el sangrado vaginal que representa la sangre derivada de un endometrio en rápido desarrollo. Además de los eritrocitos del frotis presenta numerosas células parabasales e intermedias; los neutrófilos son comunes pero generalmente no abundantes. El fondo de estos frotis es “sucio” de aspecto granular, debido a la presencia de secreciones vaginales y cervicales viscosas. Medio: el primer indicio de un efecto estrogénico continuo es la descamación de los neutrófilos, se piensa que estos entran al lumen vaginal a través del epitelio, pero ya no pueden atravesar la pared vaginal, por las múltiples capas inducidas por los estrógenos. Los neutrófilos no deberían verse hasta el diestro. el número de células parabasales intermedias disminuye, y son reemplazadas por células intermedias grandes y superficiales intermedias. Los eritrocitos pueden o no estar presentes. Tardío: no hay neutrófilos, los eritrocitos son variables y el fondo es claro. Mas del 80% de las células son superficiales con núcleo picnóticos y células superficiales anucleadas. Estro: durante el estro la citología permanece más o menos constante. No existen modificaciones que determinen el pico de LH u ovulación. Los cambios parecen ser debidos al hiperestrogenismo precio y no al desarrollo de los ovarios. El 80 % y casi el 100% con células superficiales y escamas anucleares. El fondo está libre de material granular. El porcentajes (%) de células epiteliales vaginales superficiales se han detallado en decreciente progresión durante el proestro, con las células intermedias parabasales que desapearecen en forma simultánea con el comienzo del pico de LH. El 100% de las células con superficiales anucleadas, estas se mantienen durante todo el celo. Diestro: La citología está claramente diferenciada del final del estro. Se sabe que en estro, los frotis contienen más del 80% de células superficiales, ningún neutrófilo y fondo claro. A las 24-48 horas de finalizado el estro, el % de células superficiales cae hasta casi el 20% y el resto de las células es de tipo intermedia. A veces se observan láminas o montones de células antecediendo al diestro. Estos conglomerados representan un desprendimiento abrupto de grandes cantidades de detritos. El cambio en la apariencia microscópica de las células epiteliales es la primera indicación de que el diestro ha comenzado, menos confiable es la conducta del macho o hembra. A veces se pueden detectar células “metaestrales” específicas. Estas fueron empleadas para diferenciar el proestro temprano del diestro. Supuestamente, las células metaestrales y espumosas sólo se observan en el diestro. Luego de los primeros días del diestro, la citología vaginal es similar a la existente en el anestro. Los leucocitos pueden estar presentes en pequeñas cantidades. Los eritrocitos están ausentes o presentes en pequeñas concentraciones; las células epiteliales son intermedias pequeñas y parabasales. Anestro: Es relativamente constante. Primero se observan células parabasales e intermedias pequeñas. Puede o so haber bacterias y neutrófilos, los eritrocitos suelen faltar. Técnica para la realización de los frotis vaginales. Existen varios métodos reconocidos para la obtención de frotis: 1) debe ser de ejecución sencilla y económica. 2) debe ser prescindiendo del tamaño y/o temperamento de la perra. 3) no debe ser doloroso. 4) debe ser satisfactorio independientemente de si es uno o una secuencia de frotis. El que más satisface los criterios requeridos es el método de hisopado vaginal. .Utilidad clínica de la citología vaginal Manejo de la reproducción. La observación de la conducta de una perra frente al macho es el método más confiable, cuando la hembra esté pronta para el servicio, ella lo aceptará. No obstante, numerosas excepciones a esta filosofía destacan el calor de la citología. Siempre es prudente recomendar dos o tres frotis, tomados en un lapso de 4 a 7 días. Siempre que el número de células superficiales constituya más del 80% la hembra y el macho deberán estar juntos. Si la cópula no acontece dentro de 1 a 2 días se deberá obtener un segundo frotis. Si este es igual al anterior y no sugiere un diestro, deberá intentarse otro apareamiento o la inseminación artificial (IA). El servicio o la IA debe ser intentado durante todo el período en que la citología esté compuesta por más de un 80% de células superficiales. La citología entonces, se puede utilizar de 3 a 6 antes que comience el apareamiento natural, a causa de la similitud en la apariencia de la s células que se observan al final del proestro y durante el estro, que pueden confundir el diagnóstico. Una vez comenzados los servicios se deberían permitir su continuidad hasta que la hembra rechace al macho. Problemas de infertilidad. La citología vaginal es un reflejo grosero del nivel plasmático de estrógenos y como tal, una prueba de la función folicular ovárica. Los casos de infertilidad deberán ser evaluados con la citología vaginal, para determinar se el problema es de mal manejo o niveles de estrógenos inadecuados (desarrollo folicular insuficiente). Predicción de la fecha de parición Esto se basa en que la parición ocurre cerca del día 57 del diestro. Obteniendo una serie de frotis vaginales todos los días se reconocerá al diestro.