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PROTEÓMICA
Número 8, Febrero 2012
Pósters
S4: Proteómica Biomédica
P38
Variación del proteoma de las micropartículas
plaquetarias dependiendo del estímulo: papel de las
proteínas de señalización
Isaac Rosa1,2, Andrés F. Parguiña1,2, Ela Shai3, David Varon3, Ángel García1,2
1.
Departmento de Farmacología, Universidade de Santiago de Compostela, Santiago de
Compostela, España; 2 Centro de Investigación en Medicina Molecular y Enfermedades Crónicas
(CIMUS), Universidade de Santiago de Compostela, Santiago de Compostela, España; 3
Coagulation Unit, Hadassah-Hebrew University Medical Center, Jerusalem, Israel
angel.garcia@usc.es
Las micropartículas derivadas de plaquetas (PMPs) están elevadas en
distintas patologías (ej. enfermedades cardiovasculares, diabetes, cáncer).
Estudios recientes sugieren que las PMPs son heterogéneas y muy
dependientes del mecanismo de activación. Para estudiar esta cuestión,
hemos llevado a cabo un análisis proteómico diferencial de PMPs
originadas tras activación plaquetaria con diferentes estímulos.
Las PMPs se obtuvieron por ultracentrifugación tras activación con
trombina (0.5 U/ml) o por estrés de tensión cortante (shear stress, 1800s-1).
Las PMPs se cuantificaron mediante citometría de flujo y su proteoma se
analizó utilizando electroforesis bidimensional de alta resolución y
espectrometría de masas. Los geles se tiñeron con Sypro Ruby. El análisis
de imagen se realizó con el software Ludesi REDFIN 3 y las proteínas
reguladas diferencialmente (cambios de expresión de al menos 1,5 y p <
0,05) fueron identificadas mediante espectrometría de masas. Las
validaciones se hicieron mediante western blot. Las potenciales
interacciones proteicas se analizaron mediante el software Ingenuity
Pathway Analysis (IPA).
Se detectaron sobre 2200 spots por gel de los cuales 30 estaban
expresados diferencialmente en la región de pI 4-7. Se identificaron 28 de
ellos correspondientes a 26 proteínas únicas. Las proteínas de señalización
constituyeron el grupo más importante, conteniendo receptores de
membrana y proteínas adaptadoras. El análisis mediante IPA reveló que 21
de las 26 proteínas formaban parte de una red relacionada con ensamblaje,
morfología y organización celular. Las validaciones confirmaron la
expresión diferencial de la proteína adaptadora Dok-2 y la integrina alpha-6,
ambas implicadas en la regulación de la angiogénesis, lo que podría indicar
que tuviesen un papel en la regulación de la función de las células
endoteliales llevada a cabo por las PMPs.
En conclusión, este estudio demuestra que las plaquetas liberan
micropartículas en diferente cantidad y con diferente proteoma
dependiendo del estímulo de activación.
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