protocolos en la produccion in vitro de 6 ecotipos de quinua real

UNIVERSIDAD TECNICA DE ORURO
FACULTAD DE CIENCIAS AGRICOLAS PECUARIAS Y VETERINARIAS
CARRERA DE FITOTECNIA
Titulo: “Protocolos en la producción invitro de 6 ecotipos de quinua real Chenopiun quinoa
.
Will en el Centro de Investigación en Biotecnología y Recursos Filogenéticos”
Autor: Mónica Rosa Copa Romero
Fecha de defensa: 15 de Agosto de 2008
Descriptores: Cultivo in vitro de la quinua
Asesores: Ing. Ermindo Barrientos, Ing. Ruth Espinoza, Ing. Vladimir Saavedra
No de páginas de tesis: 100
El Altiplano Sur es considerado como zona potencialmente productora de Quinua Real
en Bolivia, la producción se incrementó en los últimos años, debido a una demanda por sus
cualidades nutricionales, por el tamaño grande del grano y su valor estratégico para las
condiciones áridas del altiplano, destacándose su resistencia a heladas, salinidad y sequías
predominantes que son factores adversos de tipo abiótico en las zonas altas de Los Andes.
A pesar de ser Bolivia el centro de origen de la quinua y contar con gran variedad
genética y morfológica, no se cuenta con variedades que satisfagan las expectativas de los
agricultores. Los ecotípos de quinua real han sido domesticados y seleccionados por nuestros
antepasados, por lo que se encuentran adaptados a las condiciones adversas. Actualmente, para
la producción de quinua real se emplea la semilla local, de ahí la imperiosa necesidad de
continuar los trabajos destinados a seleccionar genotipos superiores a los actualmente
cultivados.
Como consecuencia del manejo tradicional de la semilla, junto a las características
genéticas y biología reproductiva de la quinua, los ecotípos de quinua real presentan una
variación en cuanto a pureza en color de planta, color de grano, forma de panoja, ciclo
productivo, etc. Esta situación conduce a cierta heterogeneidad que dificulta el manejo del
cultivo y pone en riesgo la identidad de los ecotípos. Por tanto, es necesario desarrollar pautas
técnicas para la producción de semilla de los ecotípos comerciales de quinua real y de esa
forma ayudar a mantener la pureza y aprovechar de sus bondades como cultivo y como
producto, para lo cual se recurre al cultivo in vitro, que es una herramienta que nos permite
obtener plantas saneadas, manteniendo la pureza varietal, las características morfológicas y
genéticas idénticas al de la planta madre en un corto tiempo; y como punto de partida es
necesario determinar un protocolo para la micropropagación de los ecotípos de quinua real.
Objetivo general: “Obtener un protocolo adecuado, para la producción “in vitro” de
seis ecotípos de quinua Real (Chenopodium quinoa Willd),”, Objetivos específicos 1)
Obtener el medio de cultivo adecuado para las tres fases de laboratorio, 2) Determinar el
estado físico del medio de cultivo, líquido o semisólido más adecuado para las tres fases del
cultivo “in vitro”, 3) Evaluar la influencia de los reguladores de crecimiento, en el cultivo “in
vitro”. Como hipótesis planteada se tiene:
 Ho = No existe diferencia estadísticamente significativa en la producción de
vitroplantas con la aplicación de diferentes medios de cultivo. µ1 = µ2 = µ3 = µ4
 Ha = La producción de vitroplantas es diferente con al menos una aplicación de los
medios de cultivo. µ1 = µ2 ≠ µ3 ≠ µ4
La investigación se realizó en el laboratorio de biotecnología, que tuvo 3 fases
fundamentales, la fase (I) Establecimiento, Fase(II) Multiplicación y fase (III) de
enraizamiento, para la iniciación del cultivo in vitro, se prepararon medios de cultivo según
composición química requerida, utilizando los equipos y materiales de laboratorio,
posteriormente en la cámara de flujo laminar se realizó la desinfección del material genético,
luego se sembraron en los medios de cultivo y después de un tiempo se realizaron 3
subcultivos o repiques.
Los resultados obtenidos en la fase(I) fueron: un 0% de contaminación, con una
concentración de hipoclorito de sodio al 2%, con el medio de MS al 50% de su
concentración,en estado líquido, durante 7 días, adecuado para el desarrollo de las semillas de
quinua, sobresaliendo los ecotipos: Pisankalla con los reguladores B+A(BAP 5ml/l+AIA
5ml/l), el testigo también es adecuado para obtener un buen porcentaje de sobrevivencia, y
longitud vitroplanta. En esta fase (II) de multiplicacion, se realizaron 3 repiques con intervalos
de: 30, 33 y 70 días. Se utilizó cantidades equilibradas entre auxinas y citoquininas, para la
multiplicación de los propágulos. La combinación de KIN+AIA a una concentración de 150
ppm, (6-furfuril ademina 7.5 ml/l + Acido indol-3-acético 7.5ml/l) estimuló la proliferación de
brotes, el alargamiento de los propágulos y el rompimiento de la dominancia apical.
Obteniéndose mayor número de brotes con los ecotipos, Real Blanco Punta (4) con 2.38
brotes/VTP. y una media de 1.55 cm longitud/VTP`s con el ecotipo Real Blanco. La fase (III)
de enraizamiento tiene por finalidad el enraizamiento de las VTP`s, se utilizó el medio MS y
los reguladores (auxinas): IBA, ANA y la mezcla de ambos. donde el regulador IBA a una
concentración de 100 ppm/l (ácido indolbutírico 10ml/l) fue efectivo para la inducción de
raíces.
Se concluye que el medio adecuado es el propuesto por MS al 50% de su
concentración para la fase I sin ningún regulador y 100% de su concentración en las fases II y
III, el mejor estado es líquido en las fases I y III, y semisólido para la fase II, los reguladores
mas adecuados son: KIN+AIA, BAP+AIA e IBA. Se recomienda trabajar con el medio MS
(1962) al 50% de su concentración, para las tres fases de laboratorio, y trabajar en la etapa de
multiplicación en estado sólido, es necesario experimentar para ajustar las concentraciones de
reguladores de crecimiento, de manera que se mejore la tasa de multiplicación y la producción
de vitroplantas uniformes, y trabajar con los ecotipos: Real Blanco Punta, Kellu, Toledo, Real
Blanco.