Código: LAB-PO-01-01 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS Revisión: 1 Página: PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS 1 de 5 CICLO ESCOLAR: 2014-2015 P NOMBRE DEL DOCENTE: Dr. Luis Humberto May Hernández CARRERA(S): Ingeniería de Materiales SEMESTRE: 4 ASIGNATURA: Caracterización Estructural PARCIAL: GRUPO(S): A 2o Parcial NOMBRE DE LABORATORIO O DE LA INSTITUCIÓN EN CASO DE PRÁCTICA EXTERNA: NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA: # 02 – Preparación de muestras para microscopio. FECHA Y HORA PROPUESTA DE LA PRÁCTICA: 21 de Mayo de 16 a 18 PM MATERIALES REQUERIDOS: Regla milimétrica Pinzas Bisturí, gotero, 4 porta y 4 cubre objetos. Colorante Wright o Giemsa (diluido con PBS en proporción 1G:9PBS) Muestras varias proporcionado por el profesor EQUIPO REQUERIDO: Microscopio óptico y objetivos de 10x-100x y 1000x c Cámara digital (Profesor). SE DEBE ANEXAR LA DESCRIPCIÓN DEL DESARROLLO DE LA PRÁCTICA. ______________________ Dr. Luis Humberto May Hernández 23 de Febrero de 2015 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 2 de 5 PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA MICROSCOPIO A. Objetivos El objetivo de la preparación de muestras para microscopía óptica es permitir que las estructuras de los materiales se revelen con suficiente contraste de modo que las características de interés sean descritas, grabadas y caracterizadas en detalles visibles a una escala menor que la agudeza visual del ojo humano. La escala última de observación estará limitada por la resolución del sistema de imagen del microscopio. Para este caso se realizara un recuento de glóbulos blancos, lo que se denomina Fórmula Leucocitaria. En general, los estudios de sangre se hacen en extensiones (preparaciones obtenidas por la expansión de un líquido biológico, en este caso la sangre). B. Introducción Las muestras biológicas pueden ser examinadas en muchos estados como combinación de los siguientes: Vivas o muertas Frescas o preservadas/fijadas Enteras o en secciones Teñidas o sin teñir hidratadas o deshidratadas Opacas o aclaradas Las muestras lo suficientemente pequeñas como para ser observadas enteras pueden también ser observadas vivas, obteniéndose el contraste mediante dispositivos ópticos tales como contraste de fases o contraste interferencial u, ocasionalmente, por medio de tintes vivos (tinciones no tóxicas que tienen afinidad por ciertos componentes celulares). Por ello no pueden ser observados vivos sino que hay que matarlos y entonces (generalmente) deben ser deshidratados, incluidos, cortados, teñidos y montados antes de su examen al microscopio. ERITROCITOS (Glóbulos rojos) : Los Glóbulos rojos son las células que contienen en su interior la hemoglobina. Son los principales portadores de oxígeno a las células y tejidos del cuerpo. Tiene forma bicóncava para adaptarse a una mayor superficie de intercambio de oxígeno por dióxido de carbono en los tejidos. En los mamíferos, no poseen núcleo. PLAQUETAS: Las plaquetas son células de la sangre producidas por los megacariocitos en la médula ósea mediante el proceso de fragmentación citoplasmática, circulan por la sangre y tienen un papel muy importante en la coagulación. Son los componentes celulares mas pequeños de la sangre. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 3 de 5 LEUCOCITOS (Glóbulos Blancos): . NEUTRÓFILOS: Células de 7-9 um con granulación menos evidente que la de los eosinófilos, presentan núcleos polilobulados, contienen proteínas de propiedades bactericidas (fagocitan y destruyen células bacterianas). También denominados polimorfonucleares, de núcleo arriñonado, formando cuatro o cinco lóbulos; reciben por ello, el nombre de polimorfonucleares o, simplemente "polis". EOSINÓFILOS: Su nivel aumenta en las infestaciones por parásitos, en reacciones alérgicas, en el asma y en alguna patología del miocardio. Tienen el Núcleo bilobulado y granulación de tamaño medio, con fuerte apetencia por la eosina. Núcleo bilobulado y granulación de tamaño medio y fuerte apetencia por la eosina BASÓFILOS: Los gránulos de los basófilos son gruesos pero escasos. Son células de unas 10 micras de diámetro y su núcleo tiene una forma que recuerda a un 5. Se originan en el mismo lugar que el resto de los granulocitos, y son los menos numerosos, ya que constituyen sólo el 0,5% del total. Tienen una activa participación en la respuesta alérgica a través de la liberación de histamina y otras sustancias químicas. LINFOCITOS: Los linfocitos son las células responsables de las respuestas inmunitarias. Se dividen en dos grandes grupos, linfocitos B y linfocitos T, según que estos progenitores linfoides maduren en la médula ósea (B) o en el timo (T), respectivamente. No existe diferencia morfológica , observable a Microscopio óptico, entre ambos tipos de linfocitos. Son los glóbulos blancos más pequeños, con núcleo que ocupa casi la totalidad del volumen celular y no presentan granulación específica. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 4 de 5 MONOCITOS: Al igual que otros glóbulos blancos, los monocitos se originan en la médula ósea y luego entran en el flujo sanguíneo. En unas horas, emigran a los tejidos donde se convierten en macrófagos, y constituyen las células defensivas (fagocitos). Son de mayor tamaño C. Parte Exprimental Frotis sanguíneo 1. Preparamos el material que vamos a utilizar y nos colocamos los guantes. 2. Procedemos a desinfectar el dedo del cual extraeremos el frotis sanguíneo (por lo general el dedo índice o el anular). 3. Pinchamos con aguja en el pulpejo del dedo, sobre la zona anterior o lateral. Una vez hecho, apretamos el dedo para bombear sangre hacía afuera. Una vez se haya formado una gota la acercamos al portaobjetos poco a poco hasta que pase a éste. 4. Limpiaremos el dedo y curamos la zona lesionada, tiraremos la aguja y gazas utilizadas al contenedor de residuos biológicos. 5. Realizamos la extensión del frotis sanguíneo: Tras realizar la extensión, se obtienen tres partes de la muestra: Cabeza (con demasiados eritrocitos). Cuerpo (zona óptima para la observación, existe un reparto equilibrado de células). Cola (eritrocitos en escaso número). 6. Tras dejar secar el frotis durante un par de minutos, aplicaremos el metanol sobre la muestra que actuará como fijador, lo dejamos reposar durante tres minutos 7. Teñimos la muestra con el colorante Giemsa(diluido con PBS en proporción 1G:9PBS). Las partes ácidas de la muestra (como por ejemplo el DNA del núcleo) se teñirán de un color azulado mientras que las básicas se teñirán de un color rosado. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 5 de 5 8. Limpiamos la muestra con agua destilada para sacar el colorante tras haberlo dejado sobre la muestra unos diez minutos. 9. Aplicamos el cubreobjetos sobre el cuerpo del frotis, ya está listo para la visualización en el microscopio D. Resultados Anota todas tus observaciones en la bitacora, así como realiza bosquejos de las imágenes observadas. Responde a las siguientes preguntas: ¿Por qué se debía esperar a que se seque la muestra a temperatura ambiente?¿por que no utilizar vacio o temperaturas mas elevadas? ¿Por qué no se utilizó un cubreobjetos? ¿Cuál era la finalidad del colorante?¿Se pudo utilizar otro? ¿Por qué te resulto fácil identificar los tipos de estructuras en la sangre? De la metodología propuesta ¿Qué le cambiarias?