INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA FISIOLOGÍA DE LA NUTRICIÓN PRÁCTICA 5 PARATION EN FORMULACIÓN DE PESTICIDAS (Método colorimétrico solo aplicable a polvos) 1. OBJETIVOS a) El alumno determinará el contenido de paration en diferentes alimentos por un método colorimétrico. 2. INTRODUCCIÓN Los pesticidas son sustancias toxicas, cuyo uso excesivo e inapropiado puede causar contaminación, en el ambiente y alimentos y, en algunos casos, daños en la salud de agricultores o de otras personas. Ayudan a combatir danos causados por las plagas; sin ellos no se habría dado el gran aumento de producción de alimentos de la llamada “revolución verde” que ha permitido alimentar, cada vez mejor, a una población mundial que crece continuamente. Un pesticida ideal es aquel que mata al organismo que forma la plaga sin dañar a otras especies, tiene una rápida descomposición química o biológica y además permanece en el sitio que se aplica, sin desplazarse a otros lugares. MANUAL DE PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA NUTRICIÓN Tipos de pesticidas 1a generación a) Insecticidas, etc. 2a generación b) Herbicidas Organoclorados: DDT, aldrin, endrin, lindano, Organofosfatos: malation, paration, etc. Carbamatos: carbaril, propoxur, etc. Selectivos: 2,4 diclorofenoxiacético y el ácido 2,4,5 triclorofenoxiacético No selectivos Es normal que cuando comienza a usarse un nuevo pesticida los resultados que se obtienen sean buenos y se consiga controlar las plagas con poca cantidad de productos. Pero al cabo de cierto tiempo suelen surgir problemas que disminuyen la utilidad de ese producto y hacen necesario buscar nuevos plaguicidas; estos problemas se deben principalmente a que entre los individuos de una población que conforman la plaga se crea resistencia genética, ocasionan alteraciones en el ecosistema, provocan la aparición de nuevas plagas, algunos son bio acumulables, es decir, tardan anos en descomponerse a formas menos toxicas; Se esparcen a través del agua, aire y suelo y pueden provocar desde enfermedades en los humanos expuestos a dosis bajas del pesticida por largos periodos de contacto hasta la muerte de individuos que están en contacto con altas dosis del pesticida. 3. INVESTIGACIÓN PRELIMINAR a) b) c) d) e) ¿Qué es un pesticida? ¿Qué alimentos pueden estar expuestos a pesticidas? ¿Diga el papel de los pesticidas y sus efectos colaterales en los humanos? ¿Investigar el fundamento de la técnica aplicada? ¿Qué es el paration, el para nitro fenol y el k-para nitro fenato y sus respectiva formula química? 43 PRACTICA 5 MANUAL DE PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA NUTRICIÓN 4. MATERIALES Y REACTIVOS Balaza analítica Espectrofotómetro Alcohol etílico Hidróxido de potasio Solución de alcohol al 50% Cacahuate entero Agua destilada 5. DESARROLLO EXPERIMENTAL El paration es extraído con alcohol e hidrolizado con KOH a la forma K para-nitro fenato, y es detectado colorimetricamente. 5.1. PREPARACIÓN DE LA CURVA ESTÁNDAR a) Pesar 60 mg de para-nitro fenol grado reactivo en un matraz volumétrico de 100 ml disolverlo en alcohol y aforar al volumen con alcohol. b) Pipetear 10 ml y colocarlo en matraz aforado de 100 ml y aforar con alcohol. c) Preparar una solución estándar de para nitro fenol que contenga 0.3, 0.18 y 0.06 mg/100ml por pipeteo de 5, 3 y 1 ml de alícuotas respectivamente y enseguida colocar en matraz aforado de 100 ml, adicionar 5 ml de KOH 1N disuelto en alcohol al 50% y aforar con alcohol al 50%. d) Medir la absorbancia a 405 nm en una celda corex de 1cm, conteniendo una solución de alcohol al 50% y graficar absorbancia vs. Concentraciones. 5.2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA a) Pesar la cantidad de muestra que contenga 10 mg de paration en un matraz de 250ml. b) Pipetear en 100 ml de alcohol y agitar ocasionalmente durante 10 minutos. Filtrar 25 ml a un matraz. 5.3. a) DETERMINACIÓN DEL PARA NITRO FENOL LIBRE Pipetear 10 ml de la muestra en solución en un matraz aforado de 100 ml y aforar al volumen con alcohol al 50%. 44 PRACTICA 5 MANUAL DE PRÁCTICAS DE FISIOLOGÍA DE LA NUTRICIÓN b) 5.4. Adicionar 5 gotas de KOH disuelto en alcohol al 50% y medir la absorbancia a 405 nm en menos de 2 min. De haber adicionado el alcohol. Calcular el para-nitro fenol libre. DETERMINACIÓN DEL PARATION a) Pipetear 5ml de la solución filtrada a un matraz de 125 ml, adicionar 5 ml de KOH 1N disuelto en alcohol al 50% y adicionar perlas de vidrio para controlar la ebullición. Reflujar por lo menos 30 min. b) Enfriar y transferir a un matraz volumétrico de 100 ml. Aforar al volumen con alcohol al 50% y medir la absorbancia como en la preparación de la curva estándar, calcular el paration, usando la curva estándar, la dilución y el factor: Paration = p nitro fenol/0.478 Hacer la corrección para el para-nitro fenol libre. 6. INFORME DE RESULTADOS a) Presentar en forma de tabla, con unidades, los resultados de las determinaciones hechas a los alimentos analizados, incluyendo en esta tabla los valores establecidos para cada determinación en las Normas Oficiales y en la bibliografía consultada. b) Discutir, de manera integral, los resultados obtenidos, tomando en cuenta los siguientes aspectos: Composición general respecto a lo reportado en la bibliografía. Puntos críticos en cada una de las determinaciones. Fuentes de error en las determinaciones. c) Elaborar sus conclusiones de la práctica en base al análisis y discusión de resultados y a los objetivos planteados, tomando en cuenta el procedimiento empleado para precisar las posibles desviaciones y lo que se indica en la sección de análisis de resultados. 7. BIBLIOGRAFÍA a) Kennes C. Lema J. Y Veyga. M. 1994. “Biodegradacion de Compuestos Organicos Toxicos”. Vol. 26, No. 7, pp. 1460-1462 b) Faust S. D. Gommaa H. M. 1972. Environ. Lett., Vol. 3, No. 171. 45 PRACTICA 5