HIDROCORTISONA, ACETATO DE principal en el cromatograma obtenido a partir de la Preparación muestra se debe corresponder con el de la Preparación estándar. UNGÜENTO OFTÁLMICO Determinación del contenido neto del envase <220> Debe cumplir con los requisitos. Definición - El Ungüento Oftálmico de Acetato de Hidrocortisona debe contener no menos de 90,0 por ciento y no más de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de esteroides totales, calculada como C23H32O6. Debe ser estéril y debe cumplir con las siguientes especificaciones. Sustancia de referencia Hidrocortisona SR-FA. Acetato de CONSERVACIÓN En envases de cierre perfecto. ENSAYOS Identificación A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Fase estacionaria - Emplear una placa para cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) recubierta con gel de sílice para cromatografía, de 0,25 mm de espesor. Fase móvil - Cloroformo, metanol y agua (180:15:1). Solución muestra - Transferir una cantidad del Ungüento Oftálmico de Acetato de Hidrocortisona, equivalente 5 mg de acetato de hidrocortisona, a un erlenmeyer, agregar 5 ml de metanol y calentar en baño de vapor durante 5 minutos con agitación. Dejar enfriar hasta que se solidifique el ungüento base y filtrar. Solución estándar - Preparar una solución de Acetato de Hidrocortisona SR-FA en las mismas condiciones que la Solución muestra. Revelador - Preparar una solución metanólica de ácido sulfúrico al 70 %. Procedimiento - Aplicar sobre la placa 10 l de la Solución muestra y 10 l de Solución estándar. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la longitud de la placa. Retirar la placa de la cámara, marcar el frente del solvente y dejar que el solvente se evapore. Pulverizar sobre la placa con Revelador, calentar a 90 °C durante 20 o 30 minutos, dejar enfriar y examinar los cromatogramas bajo luz ultravioleta, a 366 nm: el valor de Rf de la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra se debe corresponder con el de la Solución estándar. B - Examinar los cromatogramas obtenidos en Valoración. El tiempo de retención del pico Ensayos de esterilidad <370> Debe cumplir con los requisitos. Partículas metálicas en ungüentos oftálmicos <660> Debe cumplir con los requisitos. VALORACIÓN Sistema cromatográfico, Fase móvil y Aptitud del sistema Proceder según se indica en Valoración en Acetato de Hidrocortisona. Preparación estándar - Disolver una cantidad exactamente pesada de Acetato de Hidrocortisona SR-FA con cloroformo saturado con agua para obtener una solución de aproximadamente 0,10 mg por ml. Preparación muestra - Transferir una cantidad exactamente pesada del Ungüento Oftálmico de Acetato de Hidrocortisona, equivalente a 2,5 mg de acetato de hidrocortisona, a un recipiente con tapa, agregar 25 ml de cloroformo saturado con agua y diez perlas de vidrio. Tapar el recipiente y agitar vigorosamente durante aproximadamente 15 minutos. Centrifugar y emplear la fase clorofórmica. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo volúmenes iguales de la Preparación estándar y la Preparación muestra, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad de C23H32O6 en el Ungüento Oftálmico de Acetato de Hidrocortisona, en base a la cantidad declarada.