VITAMINA A

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VITAMINA A
H3C
CH3
CH3
CH3
R
O
CH3
R=H
R=CO-CH3
R=CO-C2H5
R=CO-C15H31
C20H30O
C22H32O2
C23H34O2
C36H60O2
PM: 286,5
PM: 328,5
PM: 342,5
PM: 524,9
Sinonimia - Palmitato de Retinol.
Definición - La Vitamina A refiere a un número de sustancias de estructura muy similar (incluyendo los isómeros (Z), que se encuentran en tejidos animales y que poseen actividad semejante).
La sustancia principal y biológicamente más activa
es aquella que posee todos sus enlaces en posición
(E): todo-(E)-3,7-dimetil-9-(2,6,6-trimetilciclohex1-enil)nona-2,4,6,8-tetra-en-1-ol (C20H30O).
La
vitamina A se emplea en forma de ésteres tales
como acetato, propionato y palmitato. La expresión
éster de retinol sintético se refiere a un éster de
retinol sintético (acetato, propionato o palmitato) o
una mezcla de ésteres de retinol sintético.
La actividad de la Vitamina A se debe expresar
en equivalentes de retinol (ER). 1 mg de ER corresponde a la actividad de 1 mg de todo-(E)retinol. La actividad de los otros ésteres de retinol
se calcula estequiométricamente, de modo que 1 mg
de ER de Vitamina A equivale a la actividad de:
1,147 mg de acetato de todo-(E)-retinol,
1,195 mg de propionato de todo-(E)-retinol,
1,832 mg de palmitato de todo-(E)-retinol.
Se emplean también las Unidades Internacionales (UI) para expresar la actividad de la Vitamina A.
1 UI de Vitamina A equivale a la actividad de
0,300 g de todo-(E)-retinol . La actividad de los
otros ésteres de retinol se calcula estequiométricamente, de modo que 1 UI de Vitamina A equivale a
la actividad de:
0,344 g de acetato de todo-(E)-retinol,
0,359 g de propionato de todo-(E)-retinol,
0,550 g de palmitato de todo-(E)-retinol,
1 mg de equivalente de retinol corresponde a
3333 UI.
Caracteres generales - El acetato de retinol se
presenta como cristales de color amarillo pálido,
con un punto de fusión de aproximadamente 60 °C.
Cuando funde, el acetato de retinol, tiende a formar
una masa sobreenfriada.
El propionato de retinol se presenta como un líquido oleoso pardo rojizo.
El palmitato de retinol es un sólido lipoideo
amarillo claro, o si se funde, un líquido oleoso amarillo, con un punto de fusión de aproximadamente
26 ºC.
Todos los ésteres de retinol son solubles o parcialmente solubles en etanol, miscibles con solventes orgánicos y prácticamente insolubles en agua.
La Vitamina A y sus ésteres son muy sensibles a la
acción del aire, luz, calor y los agentes oxidantes y
ácidos.
Sustancia de referencia tinol SR-FA.
Ésteres de re-
CONSERVACIÓN
En envases inactínicos de cierre perfecto.
ENSAYOS
[NOTA: efectuar la valoración y todos los ensayos tan rápidamente como sea posible, evitando la
exposición a la luz actínica y al aire, a los agentes
oxidantes, a los catalizadores de oxidación, como
por ej., cobre, hierro), a los ácidos y al calor.
Identificación
Emplear la siguiente técnica cromatográfica:
Fase estacionaria - Emplear una placa para
cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) recubierta con gel de sílice para cromatografía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de
espesor.
Fase móvil - Ciclohexano y éter (80:20).
Solución estándar - Preparar una solución de
aproximadamente 0,01 mg de Ésteres de retinol SR-FA por l (3,3 UI de cada éster por l) en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Solución muestra - Preparar una solución de
aproximadamente 3,3 UI de Vitamina A por l en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 3 l de Solución muestra y 3 l de Solución
estándar. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: el cromatograma obtenido a partir de la
Solución estándar debe presentar las manchas individuales de los ésteres correspondientes. El orden
de migración debe ser: acetato, propionato y palmitato de retinol. La composición de la Solución
muestra se debe confirmar por la correspondencia
de la o las manchas principales obtenidas a partir de
la Solución estándar.
Límite de retinol
Fase estacionaria y Fase móvil - Proceder según se indica en Identificación.
Solución muestra - Preparar una solución de
aproximadamente 330 UI de Vitamina A por l en
ciclohexano. Estabilizar con una solución de butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Solución estándar - Agitar 1 ml de la Solución
muestra con 20 ml de solución de hidróxido de
tetrabutilamonio 0,1 M en alcohol isopropílico,
durante 2 minutos y diluir a 100 ml con ciclohexano. Estabilizar con una solución de butilhidroxitolueno al 0,1 %.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa 3 µl de Solución muestra y 3 µl de Solución
estándar. Dejar secal las aplicaciones y desarrollar
los cromatogramas hasta que el frente del solvente
haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes
de la longitud de la placa. Retirar la placa de la
cámara, marcar el frente del solvente y dejar secar
al aire. Examinar la placa bajo luz ultravioleta a
254 nm: a excepción de la mancha principal en el
cromatograma obtenido a partir de la Solución
muestra, ninguna mancha debe ser más intensa que
la mancha principal obtenida con la Solución estándar (1 %). [NOTA: en el cromatograma obtenido a
partir de la Solución estándar se debe observar sólo
trazas o no se debe observar ninguna mancha correspondiente al éster de retinol.]
Sustancias relacionadas
Determinar el máximo de absorción de la solución empleada en el ensayo Actividad (ver 470.
Espectrofotometría ultravioleta y visible). La solución debe presentar un máximo de absorción entre
325 y 327 nm. Medir las absorbancias A a 300,
350 y 370 nm y calcular la relación A/A326 para
cada longitud de onda: ninguna de las relaciones
A/A326 debe ser mayor de:
0,593 a 300 nm.
0,537 a 350 nm,
0,142 a 370 nm.
ACTIVIDAD
Examinar por espectrofotometría de absorción
ultravioleta (ver 470. Espectrofotometría ultravioleta y visible). Pesar exactamente entre 25 y 100 mg
de Vitamina A, disolver en 5 ml de pentano y diluir
con alcohol isopropílico hasta una concentración de
10 a 15 UI por ml. Determinar la absorbancia a la
longitud de onda de máxima absorción, aproximadamente 326 nm. Calcular la actividad de la Vitamina A en Unidades Internacionales por g por la
fórmula siguiente:
A326V 1.900
100 P
en la cual A326 es la absorbancia a 326 nm, P es el
peso de Vitamina A en g, V es el volumen total al
que ha sido diluida la Vitamina A para dar una
concentración de 10 a 15 UI por ml y 1.900 es el
factor de conversión de la absorbancia específica de
los ésteres de retinol en Unidades Internacionales
por g.
ROTULADO
En el rótulo se debe indicar el número de Unidades Internacionales por g y el nombre del éster o
ésteres.
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