"Diagnóstico de enfermedades virales en bovinos. Herramientas disponibles y qué utilidad brindan al veterinario de campo".
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Diagnóstico de enfermedades virales en bovinos. Herramientas disponibles y que utilidad brindan al veterinario de campo. Rodrigo Puentes Área de Inmunología – Dpto. Ciencias Microbiológicas Facultad de Veterinaria – UdelaR 2013 Analogía del Sistema Inmune con las defensas de un país Escuela Militar = Timo Cuarteles = ganglios linfáticos Rutas = vasos sanguíneos y linfáticos Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Analogía del Sistema Inmune con las defensas de un país tanques = células Misiles = Anticuerpos Mensajeros = citoquinas Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Secuencia de acontecimientos en una Respuesta Inmune Sistema Inmune innato Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Sistema Inmune adaptativo ¿Qué técnica diagnóstica solicito al laboratorio? Inmunofluorescencia Inmunohistoquímica Aislamiento ELISA Histopatología Radioinmunoanálisis IDGA Seroneutralización Western blot PCR Real time PCR Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Si bien el veterinario clínico no necesita poseer un conocimiento profundo sobre las técnicas diagnósticas, consideramos que sí debe saber qué resultados puede esperar de cada una de ellas. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay ¿A quien estamos buscando? patógeno “huella” Tipo de infecciones y momento adecuado para la toma de muestra en los animales Animal enfermo Animal luego de la enfermedad Signos clínicos Acs y células tiempo Infección Producción de anticuerpos patógeno Tipo de infecciones y momento adecuado para la toma de muestra en los animales Animal luego de la enfermedad patógeno Acs y células Límite detección Acs tiempo Infección Producción de anticuerpos Signos clínicos Animal enfermo Inmunodifusión doble en gel agar (IDGA) Placa de petri Agar Rosetas Inmunodifusión doble en gel agar (IDGA) Inmunodifusión doble en Gel Agar Acs Ags Inmunodifusión doble en Gel Agar Acs Ag Línea de precipitación Sensibilidad 45% Especificidad 100% Rama et al., 2010 Detección de anticuerpos por la técnica de ELISA Antígeno del virus de la LBE Anticuerpos de los animales contra LBE (suero problema) Sensibilidad 61% Especificidad 97% Rama et al., 2010 E Conjugado: Anti IgG bovino ligado a enzima ANIMAL POSITIVO E Técnicas de Inmunofluorescencia Conjugado anti virus Rábico Presencia del virus en el cerebro del bovino Sensibilidad 100% Especificidad 94,3% Ribas et al., 2005 Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) Reacción en cadena de la Polimerasa (PCR) PCR en tiempo real Cuidados al interpretar un resultado de una técnica diagnóstica Una buena técnica inmunodiagnóstica nos debería dar pocos o nulos resultados falsos positivos o falsos negativos. VERDADERO POSITIVO – implicaría una infección real FALSO POSITIVO – atribuidos a interacciones cruzadas entre distintos microorganismos. VERDADERO NEGATIVO – indicaría una ausencia de infección FALSO NEGATIVO – toma de la muestra en etapas muy tempranas de la infección por ejemplo o técnicas poco sensibles. Diagnóstico de BVDV mediante detección del agente Histopatología Aislamiento ELISA – ag + Aborto por BVD RT-PCR IHC ¿otras causas? Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de BVDV mediante pruebas serológicas Títulos de anticuerpos Rodeo positivo con animales PI Fallas reproductivas o abortos Rodeo positivo con riesgo PI o rodeo negativo Lanyon et al., 2013 (in press) Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante detección del agente Tejidos fetales Contenido estomacal Cotiledones Descarga vaginal Histopatología Aislamiento ELISA – ag + Aborto por IBR PCR Hisopados oculares y/o nasales IHC Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay ¿otras causas? Diagnóstico de IBR mediante detección del agente Concordancia entre las distintas pruebas diagnósticas para detectar el virus HISTOPATOLOGÍA* vs INMUNOHISTOQUÍMICA = valor kappa 0.80 PCR vs INMUNOHISTOQUÍMICA = valor kappa 0.90 HISTOPATOLOGÍA* vs PCR = valor kappa 0.91 PCR vs AISLAMIENTO VIRAL = valor kappa 0.49 Mahajan et al., 2013 * Cuerpos de inclusión intranucleares acidófilos en varios órganos incluyendo placenta y presencia de encefalitis no supurativa. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante pruebas serológicas Tesis Maestría Dr. Pablo Alonzo – Facultad de Veterinaria – 2010 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante pruebas serológicas Puentes, R.; Campos, F.; Furtado, A.; Llambí, S.; Franco, AC.; Maisonnave, J.; Roehe, P. (2013) 1º Congreso Internacional de Veterinaria - Uruguay Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de Leucosis bovina IDGA ELISA PCR Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Variaciones en los títulos de anticuerpos anti Leucosis bovina en vacas en el período de transición Tesis Maestría Lic. Gonzalo Rama – Facultad de Ciencias – 2013 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Inmunización vs protección en un animal Concentración de anticuerpos PROTEGIDO INMUNIZADO Límite de protección + Límite de detección de anticuerpos – tiempo Que el animal tenga anticuerpos, no siempre significa que esté protegido contra la enfermedad!! Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Inmunización vs protección en un rodeo Límite de protección Límite de detección de anticuerpos Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Abortos: Clasificación de los principales agentes etiológicos Período 1996-2002 (Fuente: DILAVE, MGAP. La Paloma – Rocha año 2003) 37% ? 42% 2% 1% 2% Bacterias Hongos 16% Virus Parasitos Distocia Sin diagnóstico
