Universidad privada Antonio Guillermo urrelo ADN EN LA CIENCIA FORENCE: GENES EN TELA DE JUICI0 INTRODUCCION Con la denominación de genética forense se define el uso de ciertas técnicas empleadas en genética para la identificación de los individuos en base al análisis del ADN. El hecho de utilizar el análisis de ADN para identificar a una persona sigue un razonamiento sencillo, cada ser humano es diferente; dos personas pueden ser más o menos parecidas, sobre todo entre familiares cercanos, pero nunca son idénticos, salvo en el caso de los gemelos univitelinos. ORIGEN • El objetivo de esta ciencia era la identificación genética en crímenes y casos de paternidad. • A mediados de siglo xx cuando gracias al descubrimiento del ADN y de su estructura y al posterior avance en las técnicas de análisis de dicha molécula la Hemogenética Forense evolucionó considerablemente hasta el punto de que hoy en día puede hablarse de una nueva subespecialidad dentro de la Medicina Forense. EL ADN • Es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria. FUNCIONES BIOLOGICAS: • El almacenamiento de información (genes y genoma). • La codificación de proteínas (transcripción y traducción) . • La auto duplicación (replicación del ADN) para asegurar la transmisión de la información a las células hijas durante la división celular. EL ADN EN LA CIENCIA FORENSE DEFINICIÓN DE CIENCIA FORENSE • Es la aplicación de prácticas científicas dentro del proceso legal. • La ciencia forense ahora usa de manera rutinaria ADN en delitos seriamente complejos, solucionando muertes a partir de estos bloques estructurales de la vida. IMPORTANCIA DEL ADN EN LA INVESTIGACIÓN FORENSE • El ADN se ha convertido en una de las herramientas más precisas para la identificación de individuos y es utilizado por miles de laboratorios fundamentalmente en: • La identificación de vestigios biológicos de interés en la investigación criminal de muy diversos delitos. • La identificación de restos humanos y personas desaparecidas. • La investigación biológica de la paternidad y otras relaciones de parentesco. PERFIL GENÉTICO • Es un patrón de fragmentos cortos de ADN ordenados de acuerdo a su tamaño que son característicos de cada individuo. • La mayoría de los perfiles de ADN que se obtienen en los laboratorios forenses se basan en el estudio simultáneo de un conjunto de 10 a 17 regiones cortas del ADN nuclear, denominadas Short Tándem Repeats (STRs), los distintos cromosomas humanos y que presentan una alta variabilidad de tamaño entre los distintos individuos. ANÁLISIS FORENSE DE ADN • el trabajo en el laboratorio de ADN es algo misterioso o mágico, rodeado de complejas reacciones químicas y de sofisticada tecnología, donde a partir del análisis de mínimos restos biológicos se obtiene el perfil genético o el DNI biológico que establece la identidad de un individuo. CLASES DE ADN QUE SE UTILIZAN EN EL ÁMBITO FORENSE ADN NUCLEAR • Siempre que sea posible se realizará el análisis de polimorfismos de este ADN, pues son los que más información nos darán en cuanto a la identidad de la muestra. Se encuentra en el núcleo, y se hereda mitad de la madre y mitad del padre, con excepción del ADN presente en el cromosoma Y masculino, que sólo se hereda por línea paterna. CARACTERÍSTICAS: • Es único para cada persona, excepto en el caso de los gemelos univitelinos. • Permite establecer relaciones entre hermanos, primos, abuelos nietos, y otro grados de parentesco, porque como veremos, otros tipos de ADN sólo nos permitirán establecer relaciones de paternidad (cromosoma Y) y de maternidad (ADN mitocondrial). • Sirve para determinar el sexo de la persona de la que proviene una muestra porque se puede establecer la presencia de XX o XY en el par 23. • Posee un enorme potencial de estudio, por la gran cantidad de ADN no codificante y las regiones tipo STR y SNP. ADN MITOCONDRIAL • Existen numerosas mitocondrias en cada célula (entre 250 y 1000 según el tipo celular, las necesidades metabólicas y el tipo funcional) y varias copias de ADN mitocondrial en cada mitocondria, es decir, existen mayor cantidad de copias de ADNmt que de ADN nuclear por célula, de forma que hay una sola copia de ADN nuclear en una célula mientras que puede haber miles de copias de ADNmt. CARACTERISTICAS • El elevado número de copias por célula que hace alguna de ellas resista las condiciones adversas sin ser degradada. • Su pequeño tamaño. Esto facilita la conservación en el tiempo a pesar de que las condiciones no sean apropiadas: al ser más pequeño que el ADN nuclear la probabilidad de verse afectado es menor. • Este tipo de ADN se utiliza sobre todo en los casos siguientes: • Cuando existe una gran degradación de las muestras por las malas condiciones de conservación en que permanecieron hasta que fueron encontradas en lugar del crimen o por la antigüedad que tienen. En este caso el ADN mitocondrial se encontrará en mejor estado que el nuclear debido a su mayor número de copias por célula. Tal es el caso de restos óseos y dientes antiguos o sometidos a condiciones extremas. BASES DE DATOS DE ADN FORENSE son las bases de datos de ADN con fines de investigación criminal, en las que los perfiles de ADN anónimos obtenidos de vestigios biológicos de la escena del delito pueden ser comparados de forma sistemática entre sí, así como con los obtenidos de individuos que son sospechosos o condenados en una causa penal La utilización de estas bases de datos cobra también una vital importancia en los procesos de identificación de desaparecidos en conflictos bélicos o en grandes catástrofes que afectan a un gran número de víctimas cuyo estado de conservación puede limitar, o incluso imposibilitar, la identificación de los cuerpos por los métodos forenses convencionales. FUENTES DE ADN Las fuentes de ADN, restos o indicios biológicos susceptibles de análisis, pueden ser clasificadas en categorías de acuerdo con su cantidad relativa de ADN: a. Los restos de tejidos o el semen: son fuentes con gran cantidad relativa de ADN, por lo que se encontrarían dentro de la “Categoría I. b. La sangre: Es una excelente fuente de ADN, asociada a muchos casos de crímenes violentos, coloca la sangre en el segundo nivel de fuentes de ADN o “Categoría II. c. La saliva y los objetos: En contacto con la boca y la nariz, analizados rutinariamente en la casuística de laboratorio, son excelentes fuentes potenciales de ADN. Por ello, la saliva y zonas de contacto con la boca y nariz, estarían en la “Categoría III”. TÉCNICAS PARA ESTUDIAR EL ADN EN LA CIENCIA FORENSE a)Polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción (RFLP): Digestión del ADN con enzimas de restricción tras conseguir extraer un ADN de alta molecularidad. Separación de los fragmentos obtenidos por medio de una electroforesis en gel de agarosa. Desnaturalización de los fragmentos separados y cortados. Transferencia de las cadenas simples a una membrana de nitrocelulosa o nylon y fijación de las mismas por medio de calor (80ºC). Pre hibridación con sondas de ADN inespecífico para bloquear los lugares de unión inespecíficos que pudiera haber en la membrana. Marcaje de la sonda con nucleótidos radioactivos (32 P normalmente). Hibridación de la sonda marcada y desnaturalizada con los fragmentos de ADN fijados a la membrana, y lavado de la membrana para eliminar el exceso de sonda o aquellas que hayan hibridado mal. Revelado en placa radiográfica e interpretación de los resultados. b. Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Desnaturalización: la plantilla o fragmento original de DNA se calienta hasta una temperatura de 90º a 95 ºC durante 30 segundos; esto provoca la separación de las dos cadenas. Templado: la temperatura de la mezcla se rebaja hasta 55 ºC durante 20 segundos para que los cebadores oligonucleotídicos se enlacen con el DNA escindido. MEDICINA FORENSE (IDENTIFICACION DE CADÁVERES) Dactiloscopía. Huellas latentes recogidas de la escena del crimen, consiste en extraer la información genética de las mitocondrias que contiene el citoplasma de la célula. Odontología. Se utiliza en la identificación de cadáveres en situaciones desastres. Consiste en la comparación de las fichas dentarias conocidas de una persona con los dientes recuperados o hallados en restos óseos de origen desconocido. Osteología. La protección del medio externo que la matriz ósea brinda al ADN, hace del hueso el último recurso para obtener información genética. Es verdaderamente complicado extraer el ADN del hueso. La estimación de la estatura a partir de los huesos largos de las extremidades, así como la estimación de sexo, edad y afinidad biológica en series esqueléticas, son fundamentales en toda investigación. Para estimar la estatura en restos óseos humanos se miden las longitudes máximas de los huesos largos (húmero, radio, fémur, tibia y fíbula) Manchas de sangre. El análisis del ADN ha dotado a la criminalística de la posibilidad de estudiar indicios mínimos que, con otros métodos, sería imposible analizar. Este tipo de muestra plantea una mayor dificultad en la detección de la mancha. El líquido que se utiliza para encontrar estas manchas, en ocasiones, no visibles a la vista, es Luminol.