MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 1 de 5 CICLO ESCOLAR: 2014-2015P NOMBRE DEL DOCENTE: Ing. José Dolores Lira Maas CARRERA(S): Ingeniería en Materiales ASIGNATURA: Técnicas de Análisis SEMESTRE: Cuarto GRUPO(S): A PARCIAL: Primero NOMBRE DE LABORATORIO : Laboratorio de Biotecnología NÚMERO Y NOMBRE DE LA PRÁCTICA: Elaboración de una curva de calibrado FECHA Y HORA PROPUESTA DE LA PRÁCTICA: 6 de Marzo del 2015 de 14 a 17 hrs Introducción. Un procedimiento analítico muy utilizado en análisis cuantitativo es el llamado de calibración que implica la construcción de una “curva de calibración”. Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide en función de la concentración de un analito. La calibración incluye la selección de un modelo para estimar los parámetros que permitan determinar la linealidad de esa curva. y, en consecuencia, la capacidad de un método analítico para obtener resultados que sean directamente proporcionales a la concentración de un compuesto en una muestra, dentro de un determinado intervalo de trabajo. En el procedimiento se compara una propiedad del analito con la de estándares de concentración conocida del mismo analito (o de algún otro con propiedades muy similares a éste). Para realizar la comparación se requiere utilizar métodos y equipos apropiados para la resolución del problema de acuerdo al analito que se desee determinar. MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 2 de 5 La etapa de calibración analítica se realiza mediante un modelo de línea recta que consiste en encontrar la recta de calibrado que mejor ajuste a una serie de “n” puntos experimentales, donde cada punto se encuentra definido por una variable “x” (variable independiente, generalmente concentración del analito de interés) y una variable “y” (variable dependiente, generalmente respuesta instrumental). La recta de calibrado se encuentra definida por una ordenada al origen (b) y una pendiente (m), mediante la ecuación y = mx + b . Objetivo: Elaborar e interpretar una curva de calibración con diferentes concentraciones de glucosa. Materiales: Pipetas de 1, 5 y 10 mL Vasos precipitados de 50, 100 y 250 mL Matraces aforado de 50 a 100 mL Varilla de Vidrio Hielo Celdas cuarzo Agua destiladas Reloj Guantes Perillas Gradillos Tubos de ensayos Cinta para marcar y marcadores Espátula MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 3 de 5 Equipos Espectrofotómetro Balanza analítica Vortex Reactivos. Fenol Glucosa Ácido sulfúrico Procedimiento: Preparación de la solución madre Pesar 1 gr de glucosa diluir en un vaso precipitado con un poco de agua y aforarlo en un matraz de 100 ml. Mezclarlo bien y dejarlo reposar en baño de agua fría por diez minutos. Preparación de fenol al 5% Pesar 5 gr de Fenol, diluir en poco de agua en vaso precipitado y aforarlo en un matraz de 100 ml. Elaboración de las disoluciones a partir de la solución madre. Tomando en cuenta la siguiente tabla formar las disoluciones siguientes 20, 50, 70. 100 y 150 ppm respectivamente en matraz aforado de 50 ml. Matraz Concentración mL agua mL de Solución madre 1 20 ppm 1 49 2 50 ppm 2.5 47.5 3 70 ppm 3.5 46.5 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS 4 100 pm 5 45 5 150 ppm 7.5 42.5 Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 4 de 5 Agitar bien cada una de las disoluciones y dejarlos reposar por cinco minutos. Procedimientos para la elaboración de la curva calibrado. Etiquetar los tubos de acuerdo a la concentración 20, 50, 70, 100 y 150 ppm y añadir 1 mL de solución madre en cada tubo de acuerdo a su concentración respectivamente. Colocar 0.5 ml de Fenol al 5% en cada uno de los tubos. Adicionar con mucho cuidado 2.5 ml de H2SO4 concentrado en cada uno de los tubos. Agitar por cinco minutos en el vortex Dejar reposar por diez minutos Colocar lo tubos en un baño de hielo por 10 minutos Posteriormente transferir cada una de las disoluciones en una celda de cuarzo y realizar la lectura de cada una de ellas en un espectrofotómetro UV-Visible a 490 nm. Resultados Anotar en los resultados en la siguiente tabla: Concentración 20 ppm 50 ppm 70 ppm Absorbancia MANUAL DE PROCEDIMIENTOS UNIDAD DE ADMINISTRACIÓN TALLERES Y LABORATORIOS PROGRAMA INDIVIDUAL DE PRÁCTICAS Código: LAB-PO-01-01 Revisión: 1 Página: 100 ppm 150 ppm Realizar la curva de calibrado por Excel obtener la ecuación de la recta. Realizar el siguiente cuestionario. ¿Qué es una curva de calibración? ¿Para qué sirve una curva de calibración? ¿Cuál es aporte de conocimiento de esta práctica en tu carrera? 5 de 5