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UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA TRABAJO DE TITULACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE: MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA TEMA “DETERMINACIÓN DE LA PREVALENCIA DE LEUCEMIA E INMUNODEFICIENCIA FELINA MEDIANTE PRUEBAS INMUNOCROMATOGRÁFICAS (FASTest FeLVFIV) EN EL SECTOR DEL GUASMO OESTE” AUTORA SANDY VANESSA TORRES GONZÁLEZ TUTOR ACADÉMICO Dr. ÓSCAR ELICER MACÍAS PEÑA Guayaquil, Octubre 2014 74 CERTIFICACIÓN DE TUTORES En calidad de tutores del trabajo de titulación: CERTIFICAMOS Que hemos analizado el trabajo de Titulación como requisito previo para optar por el Título de Tercer Nivel de Médica Veterinaria Zootecnista. El trabajo de titulación se refiere a: “DETERMINACIÓN DE LA PREVALENCIA DE LEUCEMIA E INMUNODEFICIENCIA FELINA MEDIANTE PRUEBAS INMUNOCROMATOGRÁFICAS (FASTest FeLVFIV) EN EL SECTOR DEL GUASMO OESTE” Presentado por: Sandy Vanessa Torres González Cédula # 1310917263 TUTORES _________________________ __________________________ Dr. Óscar Elicer Macías Peña Blgo. Cristóbal Antonio Freire Lascano TUTOR ACADÉMICO TUTOR METODOLÓGICO _______________________________ Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD. TUTOR DE ESTADÍSTICA Guayaquil, Octubre 2014 II La responsabilidad por las ideas, investigaciones, resultados y conclusiones sustentadas en éste trabajo de titulación, corresponden exclusivamente a la autora. SANDY VANESSA TORRES GONZÁLEZ III Dr. Roberto Cassís Martínez, PhD. RECTOR. Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD. DECANA Abgdo. Evert Vidal Arteaga Ramírez SECRETARIO Dr. Óscar Elicer Macías Peña TUTOR DE PROCESO DE TITULACIÓN IV “DETERMINACIÓN LA PREVALENCIA DE LEUCEMIA E INMUNODEFICIENCIA FELINA MEDIANTE PRUEBAS INMUNOCROMATOGRÁFICAS (FASTestFeLV-FIV) EN EL SECTOR DEL GUASMO OESTE” SANDY VANESSA TORRES GONZÁLEZ TRABAJO DE TITULACIÓN PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO: MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA Los miembros del Tribunal de Sustentación designados por la Comisión Interna de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, damos por Aprobada la presente propuesta de investigación con la Nota de 9 Equivalente a EXCELENTE Dra. Lucila María Sylva Morán PRESIDENTE Dr. Santiago A. Rangel Bajaña, MSc. EXAMINADOR PRINCIPAL Dr. Ángel Mauricio Valle Garay EXAMINADOR PRINCIPAL Abgdo. Ever Vidal Arteaga Ramírez SECRETARIO V “Nunca consideres el estudio como una obligación, sino como una oportunidad para penetrar en el bello y maravilloso mundo del saber”. Albert Einstein VI DEDICATORIA Dedico este trabajo de investigación a DIOS nuestro padre celestial por todas sus bendiciones derramadas en mí todo los días de mi vida, a la mujer más importante de mi vida: mi MADRE Mercy Araceli González Pincay que me dio todo su esfuerzo y dedicación para poder culminar mi carrera profesional. A mi familia: de quienes siempre tuve su apoyo incondicional y consejos que me brindaron, a mi mami Petita Pincay que continuamente estuvo ahí con sus iluminaciones y bendiciones. A todas esas personas que me dieron la mano para poder llegar a la meta propuesta ser una profesional de bien. Sandy Vanessa Torres González VII AGRADECIMIENTO A Dios por su fidelidad y sus bendiciones derramadas todos los días de mi vida. A mi familia que gracias a su gran sacrificio, me dio todo para seguir adelante y poder alcanzar mi meta profesional. Al Dr. Óscar Macías Peña tutor de mi investigación, a la Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD in Animal Science, y al Blgo. Cristóbal Antonio Freire Lascano, que por su paciencia y dedicación pude llevar acabo mi tema de investigación. A la Universidad de Guayaquil en especial a la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia y a mis queridos profesores que supieron compartir incondicionalmente sus conocimientos para poder recibir la envestidura a Médica Veterinaria Zootecnista Sandy Vanessa Torres González VIII ÍNDICE DE CONTENIDO CAPÍTULOS PÁGINAS INTRODUCCIÓN 1.1. Problema 1.2. Objeto 1.3. Campo de acción 1.4. Objetivos 1.5. Variables 1.6. Hipótesis 1 3 3 3 3 3 4 II MARCO TEÓRICO 5 2.1. VIRUS DE LA LEUCEMIA FELINA 5 2.1.1. Etiología 2.1.2. Transmisión 2.1.3. Patogenia 2.1.4. Signos Clínicos 2.1.5. Diagnóstico 2.1.5.1 Método serológico 2.1.5.2. Técnicas Virológicas 2.1.6. Diagnóstico Diferencial 2.1.7. Tratamiento 2.1.8. Prevención 5 6 7 9 11 11 12 12 13 14 2.2. VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA FELINA 15 2.2.1. Etiopatogenia 2.2.2. Cuadro Clínico 2.2.3. Diagnóstico 2.2.4.Diagnóstico Diferencial 2.2.5. Tratamiento 2.2.6. Prevención 2.2.6. Importancia con respecto a la zoonosis 15 16 17 18 18 18 19 III. MATERIALES Y MÉTODOS 20 3.1. Características del área de estudio 3.1.1. Localización del ensayo 20 20 IX 3.1.2. Climatología 3.2. Materiales 3.2.1. Materiales de campo 3.2.1.1. Biológicos 3.2.1.2. Físicos 3.2.1.3. Químicos 3.2.2. Materiales de laboratorio 3.2.2.1. Biológicos 3.2.2.2. Físicos 3.2.3. Equipos de laboratorios 3.2.4. Materiales de oficina 3.2.5. Personal 3.3. Metodología de trabajo 3.3.1. Métodos de trabajo de campo 3.3.2. De laboratorio 3.3.3. Procedimiento de diagnóstico del test. 3.3.4. Tipo de muestras 3.3.5. Casuística 3.3.6. Factor de Estudio 3.3.7. Datos a evaluar 3.3.8. Evaluación Estadística 20 21 21 21 21 21 21 21 21 22 22 22 23 23 23 24 24 25 25 25 25 IV. RESULTADOS EXPERIMENTALES 28 4.1. Presencia de la leucemia y la inmunodeficiencia felina 4.2. Presencia de la enfermedad de acuerdo a pacientes asintomáticos y sintomáticos 4.3. Presencia de la enfermedad de acuerdo con la edad de los felinos 4.4. Presencia de la enfermedad de acuerdo con las edades positivas a ViLeF 4.5. Presencia de la enfermedad de acuerdo con las edades positivas a VIF 4.6. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo 4.7. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo a ViLeF 4.8. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo a VIF 28 V. DISCUSIÓN VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES VII. RESUMEN VIII. BIBLIOGRAFÍA IX. ANEXOS 36 38 40 42 46 X 29 30 31 32 33 34 35 ÍNDICE DE CUADROS CUADRO TÍTULO PÁGINA # # 1 Determinación del porcentaje de Leucemia e Inmunodeficiencia felina 28 2 Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes con y sin sintomatologías 29 3 Determinación de felinos domésticos de acuerdo a la edad 30 4 Determinación de porcentaje de pacientes positivos a ViLef de acuerdo a la edad 31 5 Determinación de porcentaje de pacientes positivos a VIF de acuerdo a la edad 32 6 Determinación de la enfermedad de acuerdo al sexo de los felinos domésticos tanto ViLeF y VIF 33 7 Determinación de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo al sexo 34 8 Determinación de pacientes positivos a VIF de acuerdo al sexo 35 XI ÍNDICE DE FIGURA FIGURAS TÍTULO # PÁGINAS # 1 Determinación del porcentaje de Leucemia e Inmunodeficiencia felina 28 2 Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes con y sin sintomatologías 29 3 Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes por edad. 30 4 Determinación de porcentaje de pacientes positivos a ViLef de acuerdo a la edad 31 5 Determinación de porcentaje de pacientes positivos a VIF de acuerdo a la edad 32 6 Determinación de la enfermedad de acuerdo al sexo de los felinos domésticos tanto ViLeF y VIF 33 7 Determinación de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo al sexo 34 8 Determinación de pacientes positivos a VIF de acuerdo al sexo 35 XII ÍNDICE DE GRÁFICOS GRÁFICO # TÍTULO PÁGINA # 1 Estructura molecular de Leucemia Felina 63 2 Diagrama de la transmisión de la Leucemia Felina 62 3 Estructura del Virus de Inmunodeficiencia felina 63 4 Ubicación de la zona del muestreo 63 5 Plano del Guasmo Oeste 64 6 Eppendoff 2 ml 64 7 Pipetas Pasteur de 2 ml 65 XIII ÍNDICE DE ANEXOS ANEXOS TÍTULO PÁGINAS # # 1 Cronograma de actividades 46 2 Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para felinos Sintomáticos y asintomáticos 47 3 Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la edad. 48 4 Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para el sexo. 49 5 Tabla de χ2 (Chi cuadrado). 50 6 Ficha de datos. 51 7 Gráficos. 62 8 Certificado del Laboratorio de la Facultad donde se llevó a cabo diagnóstico 66 9 Fotos 67 10 Tabla de Felinos muestreados 74 XIV 74 I INTRODUCCIÓN El virus de la leucemia felina (ViLeF) y la inmunodeficiencia felina (VIF) son agentes patógenos que ocasionan enfermedades muy infecciosas, que se encuentran en diferentes partes del mundo, afectando con mayor frecuencia a los gatos que viven en conjunto. El (ViLeF) fue descubierto por primera vez por William Jarrett en Escocia en 1964 en un gato que presentó linfosarcoma. Caracterizándose, como un virus oncogénico asociado a enfermedades neoplásicas e inmunodeficiencia. La causa de estas enfermedades patógenas, de los gatos domésticos es un retrovirus. El (ViLeF) está disminuyendo debido a las medidas de prevención que existen actualmente. (Gómez, N. 2011). El virus afecta a los gatos domésticos en aspectos muy variados; a su vez provoca inmunosupresión e inducen al desarrollo de tumores. Detectando categorías a pacientes según la ubicación viral, desarrollándose los cuadros clínicos y diagnosticando los resultados de pruebas rápidas para poder así detectar la enfermedad, lo que resulta desconcertante para el clínico. (Cano, J., Gallelli, M.F. & Gómez, V. 2011). Las células encargadas de proteger al organismo frente a las infecciones, son los leucocitos en el caso de ViLeF, y VIF actúa destruyendo a los leucocitos lentamente que son las células de defensas del afectado (los linfocitos T) provocando así una inmunodeficiencia que culmina en complicaciones crónicas terminando con la muerte del animal. (Anibarro. G, 2014). La transmisión de estas enfermedades es por contacto directo (el acicalado mutuo, la saliva, los recipientes para la comida, las heces, las lágrimas, la orina, los mordiscos y las transfusiones sanguíneas). (Zoetis, 2013-2014). 74 Por otra parte el virus de la inmunodeficiencia felina (VIF) fue descubierta en el año de 1986 por el veterinario Niels Pedersen de la Universidad de California en Davis, desde entonces, casos de VIF han sido diagnosticados por todo el mundo. (Ayala. M, 1998). El virus está presente en la saliva de los gatos y se infectan a través de mordiscos. El VIF no afecta a gatitos mientras están en el útero pero, si pueden infectarse cuando están lactando, a través de la leche de una madre enferma. No todos los gatitos llegan a infectarse, lo más común es que se infecten a través de peleas entre machos. Son enfermedades mortales para los gatos y no existe tratamiento, por lo que se hace presente la prevención necesaria. (Ayala. M, 1998). En esta investigación trataremos de detectar la presencia de estas patologías con la finalidad de que en el futuro se tomen las medidas preventivas, beneficiando de esta manera tanto a las mascotas como a sus propietarios. 2 1.1. PROBLEMA La leucemia y la inmunodeficiencia felina son enfermedades virales contagiosas transmitidas por la saliva y fómites. 1.2. OBJETO Células encargadas de proteger al organismo frente a las infecciones, los leucocitos. 1.3. CAMPO DE ACCIÓN Sistema inmune de los gatos procedentes del Guasmo Oeste-Guayaquil. 1.4. OBJETIVOS 1.4.1. Objetivo General Determinar la prevalencia de Leucemia e Inmunodeficiencia Felina mediante pruebas inmunocromatográficas (FASTest FeLV-FIV) en el sector del Guasmo Oeste. 1.4.2. Objetivos Específicos 1.4.2.1. Evaluar la relación de la presencia de la enfermedad en gatos domésticos asintomáticos y sintomáticos. 1.4.2.2. Establecer la presencia de la enfermedad por edad de los felinos. 1.4.2.3. Identificar la presencia de la enfermedad por sexo de los felinos. 1.5. VARIABLES 1.5.1. Variable Dependiente Pruebas inmunocromatográficas (FASTest FeLV-FIV). 1.5.2. Variable Independiente Gatos asintomáticos y sintomáticos. Edad de los felinos. Sexo de los felinos. 3 1.6. HIPÓTESIS 1.6.1. Hipótesis de Investigación (Hi): En la zona Guasmo Oeste-Guayaquil hay la presencia de Inmunodeficiencia y Leucemia felina. 1.6.2. Hipótesis Nula (Ho): En la zona Guasmo Oeste-Guayaquil no hay la presencia de Inmunodeficiencia y Leucemia felina. 4 II. MARCO TEÓRICO 2.1. VIRUS DE LA LEUCEMIA FELINA. 2.1.1. Etiología. Familia: RETROVIRIDAE Subfamilia: ONCORNAVIRINAE. Género: Gammaretrovirus. Nombre vulgar: Virus de la leucemia felina. Los viriones poseen un diámetro de 105-125nm y constan de envoltura, core y nucleocápside. El genoma de ViLeF es una doble molécula de ARN de aproximadamente 8kb que, al igual que el resto de los retrovirus, posee los tres genes esenciales, gag, pol y env. (Ver anexo gráfico 1). Se trata de virus con envoltura, formada por una membrana de origen celular constituida por una doble capa de composición lipídica, con proyecciones poco definidas. (Gómez. N, 2010). Como lo menciona Gómez. N & Guida. N, (2010) Este retrovirus presenta tres categorías de antígenos: 1. Antígenos de la envoltura: glucoproteína gp70, que se corresponde con la proteína “SU” (envoltura), responsable de la estimulación de anticuerpos protectores y la proteína p15e (la proteína transmembrana “TM”) relacionada con la inmunosupresión. 2. Antígenos del core o internos: p10 (proteína de la nucleocápside “NC”), p12 (de función desconocida), p15 (proteína de la matriz “MA”) y p27 (proteína de la cápside “CA”). Este último es el que emplea para identificar el virus. 5 3. Enzima transcriptasa inversa, que es la que posibilita la replicación viral. Existe además un antígeno denominado FOCMA (Antígeno de membrana asociado con el Oncornavirus felino). Es un antígeno tumoral específico hallado en la superficie de las células infectadas por ViLeF, que han sufrido transformación maligna. Los anticuerpos que induce previenen las neoplasias linfoides y mieloproliferativas inducidas por el virus. Se han descrito cuatro subgrupos de ViLeF: ViLeF-A, ViLeF-B, ViLeF-C y ViLeF-T, que poseen una gran homología genómica entre ellos. El subgrupo ViLeF-A es contagioso y se pasa en forma horizontal entre gatos. Los subgrupo B y C, evolucionan de novo en un gato infectado con ViLeF-A mediante mutación y recombinación entre este último virus y secuencias retrovirales endógenas o celulares contenidas en el ADN felino normal. La replicación de ViLeF-B y C sólo es posible con la ayuda de ViLeF-A, porque se remplazan importantes secuencias genómicas en estos virus recombinantes. El subgrupo ViLeF-T, resulta altamente citolítico para los linfocitos T y provoca inmunosupresión grave. (Greene. C, 2006). 2.1.2 Transmisión. La saliva es generalmente la forma de transmisión, en especial de los animales que presentan viremias persistentes. Hay otras secreciones infectantes en menor medida como son: las respiratorias, sangre, leche, heces y orina. La transmisión, por lo tanto, puede ocurrir por contacto directo, generalmente a través de la saliva. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre con el virus de la inmunodeficiencia felina, no se requiere el paso de esa saliva a la sangre sino que la penetración del virus suele ser por vía oronasal. Para ello, se necesita un contacto estrecho, tal como el que se da cuando los gatos se 6 acicalan mutuamente. Por dicho motivo, esta virosis se conoce como ¨la enfermedad de los gatos amigos¨. (Gómez. N, 2010). Otras vías son la transplacentaria y la indirecta siendo esta última de escasa importancia. La hembra preñada y virémicas puede padecer: muerte embrionaria, crías muertas al nacer o bien gatitos virémicos que mueren rápidamente. En las hembras con infección latente no se produce la transmisión a la cría (Greene, C. 2007). 2.1.3. Patogenia. Rojko, J. (2009) menciona que la patogenia de la leucemia felina es muy compleja y aún no se conoce totalmente. Se trata de una infección persistente (como casi todas las retrovirosis) y se acompaña de alteraciones o desequilibrios en el sistema inmunitario. Esta enfermedad está muy influenciada por la capacidad de respuesta inmune que tenga el gato expuesto al virus. Existen otros factores que influyen dentro de la patogenia y estos son: la edad del animal, la carga vírica inicial y la duración y frecuencia de la exposición al virus. Así, como también tras la exposición que existe las posibles evoluciones que se identifican como: (Ver anexo gráfico 2). Infección aguda Infección latente Infecciones atípicas Viremia persistente Infección aguda.- En esta fase el virus no se elimina inmediatamente, y llega a infectar a linfocitos y monocitos circulantes. Después de la infección inicial, que ocurre principalmente por la vía oronasal, el virus se replica en el tejido linfoide local de la orofaringe; infecta principalmente los tejidos diana, timo, bazo, glándulas salivares, y nódulos linfáticos, replicándose en sus centros 7 germinales. La diseminación del virus depende de la respuesta inmune que pueda desarrollar el animal, la viremia será más o menos larga. (Greene. C, 2006). Infección latente.- En esta fase de infección la médula ósea se infecta pero no libera antígeno p27 o células infectada para provocar una transmisión, no se conoce un porcentaje estadístico conocido en gatos. El gato permanece aparentemente sano porque el provirus permanece en la célula, por lo tanto no producen nuevos virus. El virus en esta fase puede reactivarse espontáneamente o en respuesta a una inmunosupresión, así como por la administración de altas dosis de glucocorticoides, donde los gatos pueden aparecer nuevamente virémicos. Con respecto a las gatas infectadas el virus permanece en las glándulas mamarias y pueden ser infectivos para sus crías (Greene. C , 2006). Infección atípica.- En esta fase el virus no siguen el patrón general de la patogenia de ViLeF. Se incluyen aquellas que mantienen la replicación vírica en ciertas localizaciones diferentes a la médula ósea y que desarrollan un síndrome de inmunodeficiencia. Se caracterizan por ser infecciones secuestradas en diversas localizaciones (tejidos epiteliales, como la vejiga y ojos, y glandulares como la glándula mamaria) por una respuesta inmune parcialmente eficaz. Los gatos domésticos pueden sufrir periodos alternantes de viremia y en algunos casos progresar a viremia persistente. (Anibarro. G, 2014). Viremia persistente.- Se da cuando la médula ósea está infectada, es aquí donde el sistema inmune falla o puede ser que la respuesta no es lo más fuerte posible (tienen bajos o nulos niveles de anticuerpos neutralizantes y de linfocitos T citotóxicos), para lo cual producirá una replicación masiva de virus desarrollando así una viremia persistente; el virus se encuentra en la sangre tanto libre como asociado a células, diseminándose a múltiples tejidos 8 epiteliales y glandulares, favoreciendo así la transmisión. En esta fase el virus se disemina a gatos sanos dando lugar a una infección persistente o progresiva donde se infectan los gatos. El pronóstico de estos gatos es confidencial, tras un periodo sin presentar síntomas, la mayoría de los gatos mueren en dos o tres años por cualquier otra enfermedad que se encuentre vinculada con ViLeF. Los riesgos durante el desarrollo de la viremia depende fundamentalmente de la aparición de una viremia persistente fatal también depende del estado inmunitario y la edad del animal, aun así de la duración de la exposición y la carga vírica infectiva. Los gatos jóvenes o inmunodeprimidos tienen mayor riesgo de desarrollar esta viremia ( Anibarro. G, 2014) 2.1.4. Signos clínicos. Este virus produce dos tipos de enfermedades: neoplásica y no neoplásica. A su vez, la forma neoplásica puede ser linfoproliferativa y mieloproliferativa. Enfermedad Neoplásica. Enfermedad linfoproliferativa. Linfoma mediastínico.- Es el síndrome más común en gatos jóvenes. Las masas tumorales se originan en el tejido linfático mediastínico. Producen compresión de la tráquea, con lo que ocasionan disnea y disfagia, a su vez tos. Linfoma alimentario.- Se observan en gatos de alrededor de 8 años. El tejido tumoral se desarrolla a partir de ganglios linfáticos mesentéricos o en el parénquima de los órganos abdominales, y puede tener distribución focal difusa. Los signos clínicos son vagos: pérdida de peso, fiebre, enteropatías perdedoras de proteína, vómito. Forma variada (multicéntrica).- Las neoplasia se manifiestan en otros órganos, como piel, cavidad nasal, ojo, hígado y sistema nervioso central. Enfermedad mieloproliferativa. 9 Mielosis eritroide.- Consiste en la proliferación de las células precursoras de eritrocitos en la médula ósea. Se observa asincronismo en la maduración del núcleo y el citoplasma de mucho de los rubricitos afectados. El hematócrito es bajo y se detectan eritrocitos nucleados, anisocitosis, policromatosis, reticulocitosis. Leucemia eritroide.- Afecta tanto a la línea mielocítica como la eritrocítica. Leucemia mielogénica.- Es una proliferación de los promielocitos (Gómez. N, 2010). Enfermedad No Neoplásica. Anemia no regenerativa: Como consecuencia de mielosupresión, mielodestrucción o enfermedades mieloproliferativa. Anemia hemolítica: Puede ser inmunomedida o secundaria a Mycoplasma haemofelis. Pancitopenia: Aparece en casos avanzados de mielosupresión. Inmunosupresión: Se la asocia con la infección viral de las plaquetas y de los neutrófilos, esto a su vez conduce a alteraciones en la quimiotaxis y en la fagocitosis. Predispone a enfermedades secundarias tales como: estomatitis, abscesos, piotórax, dermatitis, peritonitis infecciosa felina (PIF), toxoplasmosis y cryptococcosis (Greene C. , 2007). A nivel reproductivo ViLeF puede causar infertilidad y abortos. En los neonatos puede inducir un síndrome de apagamiento, caracterizado por falta de reflejo de succión, Desórdenes deshidratación, inmunomediados: hipotermia y Glomerulonefritis atrofia del autoinmune, timo. uveítis, poliartritis neutrofílica, el ojo se puede observar anisocoria como consecuencias de la acción del virus en Sistema Neurovegetativo la cual muchas veces se asocia con incontinencia urinaria (Stephen, C & Dwight, D. 2007). 10 2.1.5 Diagnóstico. Existen métodos que son serológicos (permiten el diagnóstico a través de reacciones antígeno-anticuerpo) o virológicos (el diagnóstico se basa en la evidenciación de la presencia del virus o de su ácido nucleico). 2.1.5.1. Métodos serológicos. Dentro de este tipo de métodos los mas comerciales son la pruebas inmunocromatográficas basados en la técnica de ELISA. Este método se caracteriza porque son rápidos, sencillos y bastante fiables. Algunos de estos sistemas permiten la detección conjunta de VIF-ViLeF. Hay que tener en cuenta que la baja presencia de p27 en saliva o lágrimas implica que los resultados del diagnóstico de ViLeF sean intermitentes, por lo que son menos precisos y están más sujetos a errores técnicos que al emplear sangre o plasma, llegando al 30% de resultados falsos negativos en gatos virémicos, y el RT-PCR de 98,1% y 99,2%, respectivamente. (Gomes-Keller, 2006). Se sugiere que las muestras de suero si no pueden ser testeadas inmediatamente, pueden ser conservadas a temperatura de refrigeración entre 2–8 °C por el término de 2 ó 3 días. Después de este período las pruebas deben ser congeladas a -20 °C. “Algunas muestras tendrán que ser centrifugadas antes del ensayo. Debe evitarse el uso de muestras hemolizadas, lipémicas, ictéricas o con contaminación bacteriana ya que pueden inducir resultados erróneos” (Corp, 2008). La Inmunofluorescencia directa detecta células tales como: (linfocitos, neutrófilos o plaquetas) infectadas por ViLeF. Las muestras de sangre (completa no coagulada), cuando son extraídas máximo 1-2 días antes, deben remitirse refrigeradas, o en forma de frotis de sangre entera, capa flogística o médula ósea. En el laboratorio, se observan usando anticuerpos monoclonales 11 anti-p27 de ViLeF marcados con fluoresceína, esto permite la detección del antígeno p27 de células infectadas. La prueba tiene un 99% de especificidad, da positivo siempre y cuando el virus haya afectado la médula ósea (Barneto. A, 2008) 2.1.5.2. Técnicas virológicas. Las técnicas virológicas, también llamadas directas, se refieren a poner en evidencia la presencia del virus por medio de cultivo. Sin embargo, se emplea más la técnica como la reacción en cadena de la polimerasa o PCR. Es una técnica que permite detectar ViLeF en los linfocitos periféricos como también en muestras de tejidos conservados en formol. Posee una gran sensibilidad, detectando 100 células infectadas por ViLeF en un total de 106 células. Como también existen diferentes técnicas que amplifican regiones genómicas variadas, incluyendo gag (Gómez. N, 2010). 2.1.6. Diagnóstico diferencial. Otras causas de anemia como Mycoplasma haemofelis y anemias hemolíticas autoinmune, panleucopenia y síndromes similares, e infecciones por el virus de la inmunodeficiencia felina, otras infecciones tales como bacterianas, parasitarias, virales, fúngicas. (Barrera M, 2012). 2.1.7. Tratamiento. El tratamiento de esta virosis es atenuante y sintomático. Existe un tratamiento específico para desordenes neoplásico o degenerativo, los gatos virémicos que su diagnóstico sale positivo a ELISA debe recibir un tratamiento cáustico contra las infecciones oportunistas. Deben preferirse los antibióticos bactericidas (Muñóz. L, 2001). 12 Cuando hay gatos que suelen tener el virus pero no presenta neoplasia se ha empleado terapia antiviral, como es la Zidovudina (5mg/kg/c 12h), obteniéndose una prolongación notable de la vida y de su calidad. En cambio los pacientes con ambas manifestaciones (neoplásicas y no-neoplásicas) se requieren tratamiento con Zidovudina y con quimioterapia (Cano, J, et al. 2011). Otro antiviral que ha sido probado el Interferón Omega (106 IU/kg/c24 h) obteniéndose una mejoría en la tasa de supervivencia de los pacientes que posee esta patología (Gómez. N, 2006). También se propone el empleo de inmuno-estimulantes tales como proteína A del Estafilococos (10 ug/kg 2 veces/día), en gatos virémicos persistentes. Es frecuente encontrar gatos infectados por VIF y ViLeF simultáneamente. El pronóstico, en estos casos es grave, a pesar de que se intente la terapia antirretroviral. Cuando hay gatos infectados por ViLeF y presentan tumores se indica la quimioterapia. Las drogas de elección son: ciclofosfamida, vincristina y prednisona combinadas y luego se agrega la doxorrubicina obteniéndose una mejoría en cuanto a la cantidad y calidad de vida de los pacientes (Greene, C, 2006). 2.1.8. Prevención. Existe una vacuna que ha sido desarrollada. Esta en prueba pero no disponible en el mercado. Pero si existen pasos para prevenir la diseminación de la enfermedad en criadero o colonias de felinos domésticos. Realizar pruebas más sensibles al virus (ELISA). Aislar a gatos que sean positivos al virus. Eliminar todos los comederos u objetos que estén en contacto con gatos positivos a leucemia felina (Stephen, C & Dwight, D. 2007). 13 2.2. VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA FELINA. 2.2.1. Etiopatogenia. Familia: RETROVIRIDAE Subfamilia: LENTIVIRUS. Nombre vulgar: Virus de la Inmunodeficiencia felina. El virus de inmunodeficiencia felino (VIF) pertenece a la familia de los virus conocidos como retrovirus, 14 subfamilia lentivirus, que ocasiona inmunodeficiencia en los gatos domésticos. El virus más famoso es el Virus de la inmunodeficiencia adquirida en los humanos (Ayala, 1998). Esta enfermedad puede estar latente durante años, sin presentar signos clínicos o desencadenarse del todo y, en cambio, es causa de infecciones continuas y crónicas que incluso pueden llevar al animal a la muerte (Gómez N, 2010). (Ver anexo gráfico 3). La forma más probable de transmisión es a través de la saliva, por mordedura o lamido de un gato infectado a un gato sano, esto posibilita el contacto sangre-sangre. Aunque también se plantea una transmisión perinatal (Valenzuela, 2011). Según Cornell Veterinary Medicine y la Cornell Feline Health Center (1999), Una vez que el virus penetra en el cuerpo, después de la infección inicial, llega a los nódulos linfáticos donde puede reproducirse en los leucocitos llamados linfocitos-T, el virus tiene un específico tropismo por los linfocitos T, lo cual trae como consecuencia una serie de desórdenes en el sistema inmunitario de carácter progresivo. Esto predispone a los animales infectados a un estado progresivo de inmunosupresión. En consecuencia, se produce un engrosamiento generalizado de los nódulos linfáticos, aunque este estado de la enfermedad generalmente pasa desapercibido para el propietario del animal, a no ser que dicho engrosamiento sea muy visible y evidente. Algún tiempo después quizá días, pero por lo general semanas o meses el gato muestra síntomas como fiebre y un considerable descenso de leucocitos. Esta leucopenia se debe, fundamentalmente, a la falta de neutrófilos, los leucocitos que protegen al gato contra las infecciones bacterianas, y también a la pérdida de esos linfocitos-T o células de ayuda que juegan un importante papel en la 15 protección inmunológica. La anemia también puede manifestarse, especialmente cuando la enfermedad ya está muy avanzada. Los gatos infectados pueden parecer normales durante años. Pero de pronto, cuando comience a mostrar signos de inmunodeficiencia, la capacidad del gato para auto protegerse contra las infecciones se verá comprometida. 2.2.2. Cuadro clínico. Hay varios autores que se refieren a la sintomatología de esta enfermedad, cursa por tres fases: Fase aguda: En esta fase la enfermedad puede pasar desapercibida o presentar algunos signos tales como: hipertermia, linfoadenopatía generalizada, depresión, infecciones superficiales de piel, uveítis, signos neurológicos variables y neutropenia. Inclusive puede existir diarrea y anemia y dura 4 a 6 semanas. (Lloret, 2008). Fase de portador asintomático o de latencia: Por lo general no se detectan signos clínicos severos, pero puede producir alteraciones del sistema inmunológico, hay depleción de la relación de linfocitos CD4/CD8 e hipergamaglobulinemia. Dura de meses a años. (Lloret, 2008; Romairone, 2001). Fase crónica o Síndrome de Inmunodeficiencia adquirida: En esta etapa se producen infecciones crónicas no oportunistas, tales como gingivitis, enfermedades respiratorias, infecciones crónicas de piel, neurológica, renales, oftalmológica, etc. También pueden aparecer otras infecciones tales como: Toxoplasmosis, Mycoplasma haemofelis, Calicivirosis, Leucemia, Sarna, Tuberculosis, etc. Otra posibilidad es la aparición de tumores (Lloret, 2008). 16 Sin embargo una vez que se empiezan a desarrollar enfermedades asociadas a la inmunodeficiencia el proceso es irreversible (Valenzuela, 2005). 2.2.3. Diagnóstico. Para realizar un diagnóstico certero es necesario realizar un test a base de sangre, debido a que la sintomatología es muy variable y no se especifica la enfermedad. La European Advisory Board on Cat Diseases (2012), sugiere una serie de pruebas que pueden emplearse para el diagnóstico de este virus. Cuando los resultados positivos se los obtiene mediante pruebas de ELISA hechas en la clínica, y existe una baja prevalencia, se los deben confirmar en un laboratorio. La prueba analítica de referencia para la serología del VIF se los obtiene mediante inmunotransferencia. Los análisis basados en la PCR (para ADN proviral) tienen resultados variable que pueden ser incluso inferiores a los sexológicos. Los neonatos de gatas infectadas con el VIF pueden ser seropositivos ya que pueden conservar anticuerpos maternos: por lo que se deben volver a analizar a las 16 semanas de edad. Excepcionalmente los gatitos pueden seguir siendo seropositivos hasta los 6 meses de edad. 2.2.4. Diagnóstico diferencial. Para poder tener un diagnóstico diferencial tanto el virus de la leucemia felina y virus inmunodeficiencia felina, se debe considerar un apoyo clínico mediante la referencia de varios factores como la edad, debido a que la mayoría de gatos infectados por ViLeF se da cuando son jóvenes pero presentan los signos clínicos cuando son adultos. El VIF se infecta cuando es más adulto. Por lo tanto en su mayoría se observan entre los 5 y 8 años. Referente al sexo a ViLeF no hay predilección de sexo. El VIF se infectan 17 más machos que hembras. No se transmite de forma venérea. Se puede prevenir el ViLeF mediante vacuna o evitando contactos con gatos enfermos, en cuanto a VIF no existe vacuna y hay que evitar las peleas (Valenzuela, C. 2005). Anemia, leucemia felina, leucopenia, panleucopenia, infecciones primarias bacteriana, parasitarias, virales o fungicas (Barrera, M. 2012). 2.2.5. Tratamiento. No existe un tratamiento específico en cuanto a esta infección. 2.2.6. Prevención. Actualmente no existe ninguna vacuna efectiva frente a este proceso. Se están procesando vacunas eficaces contra esta patología pero aún no se encuentran en el mercado, se están haciendo estudios. La primera medida a tomar es aislar el gato de otros animales para evitar la exposición a otros agentes infecciosos. Los cual evita el contagio frente a otros gatos sanos. Así mismo, hay que evitar situaciones de estrés de cualquier tipo. Es conveniente la castración para evitar agresividad entre ellos. Es recomendable una buena dieta de alta calidad, el control de parásitos externos e internos, mantener una higiene adecuada en el entorno del animal (Stephen, C & Dwight, D. 2007). 2.2.7. Importancia con respecto a la zoonosis. No existe prueba de que el virus de la Leucemia e Inmunodeficiencia felina infecten al hombre o a cualquiera otra especie. Las características antigénicas y genéticas del virus de inmunodeficiencia felina son diferentes con respecto a otros lentivirus, incluidos al VIH. 18 No se encuentran evidencias que demuestren que puede infectar personas, ni siquiera los veterinarios, que son los que corren mayor riesgo de exposición (Muñoz, L. 2001) III. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1. CARACTERÍSTICAS DEL ÁREA DE ESTUDIO. 3.1.1. Localización del ensayo. El presente trabajo de investigación se realizó en el sector del Guasmo Oeste, en la Ciudad de Guayaquil, Provincia de Guayas, República del Ecuador, Sur – América; sus coordenadas son: Latitud: 5°, 5' S Longitud: 80°, 2' O con 4 m.s.n.m. (Ver anexo gráfico 4). 19 El respectivo diagnóstico se realizó en el laboratorio clínico de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de Guayaquil, El Rosario Km 27 de la vía a Daule de la Provincia del Guayas. 3.1.2. Cli matología. El clima de la ciudad es de tipo tropical seco con una temperatura media de 25°C y una precipitación media anual que oscila alrededor de 500 mm. El muestreo se realizó en JUNIO y JULIO del presente año, en que las características climáticas fueron: La ciudad de Guayaquil está ubicada en la parte sur occidental de la provincia del Guayas y está en los 2º 3' y 2º 17' de longitud Sur y son los 70º 49' de longitud Oeste. Tiene una superficie de 5190,5 Km2. Su temperatura promedio es de 25,5º C con variación anual en la estación lluviosa, la seca registrándose una temperatura máxima absoluta promedio anual de 33,5º C (Google Earth, 2014). 3.2. MATERIALES. 3.2.1. Materiales de campo 3.2.1.1. Biológicos Sangre de gatos domésticos procedentes de la zona del Guasmo Oeste. 3.2.1.2. Físicos Mandil. 100 tubos descartables sin aditivos. 100 jeringuillas de 3 cc con agujas #23. Termómetro rectal. 20 Algodón. Torniquete. Guantes de examinación. Cámara digital. Caja de herramientas. Termo para transportar las muestras. Gel refrigerante. Plano de la zona del Guasmo Oeste. Esferos. Hojas de registros. 3.2.1.3. Químicos. Alcohol de 70º 3.2.2. Materiales de laboratorio. 3.2.2.1. Biológico. Sangre de gatos domésticos procedentes de la zona del Oeste. 3.2.2.2. Físicos Pipetas semiautomáticas de 20-40 µl. Papel toalla. Tubos de Eppendorf 2 ml. Pipetas Pasteur de 2 ml. Cronómetro. Gradilla. Marcador. Mandil. Kit para el diagnóstico (FASTest FeLV-FIV). 3.2.3. Equipos de laboratorios. 21 Guasmo Centrífuga. Baño María. 3.2.4. Materiales de oficina. Calculadora. Laptop Impresora. Cuaderno. Memoria Flash (Pendrive) Escritorio. Esfero. Hojas de papel tamaño A4. Hoja de registro. 3.2.5. Personal. Investigadora. Auxiliar. Dueños de las mascotas. 3.3. METODOLOGÍA DE TRABAJO. 3.3.1. Métodos de trabajo de campo. - Se realizó la investigación en gatos domésticos de la zona sur de Guayaquil (Guasmo Oeste), obteniéndose muestras sanguíneas de gatos que se encontraban en los diferentes domicilios de la zona antes mencionada. -Se realizó la sujeción del gato, desinfección del área para la extracción de sangre fresca, mediante la punción de la vena radial o la cefálica o la vena 22 safena lateral con jeringuilla de 3cc aguja #23 y posteriormente depositarla en los tubos, los cuales fueron rotulados y se anotaron los datos en la hoja de registro. Una vez obtenida la muestra se esperó hasta la formación de coágulo y se refrigeró hasta su procesamiento. -Luego estos tubos se llevaron al laboratorio clínico de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de Guayaquil, donde se incubaron en baño María a 37º C por 20 minutos. -Una vez transcurrido este tiempo, los tubos de sangre coagulada se llevaron a la centrífuga a 3300 RPM por 10 minutos, donde se separó el coágulo del suero, posteriormente el suero se colocó en los Eppendorf de 2 ml, (Anexo gráfico 5), para su respetivo diagnóstico. 3.3.2. De laboratorio. Se sugirió el método de CORP, 2008 que consiste en el uso del Kit FASTest® FeLV–FIV, que es una prueba rápida basada en el análisis inmunocromatográficas para la detección cualitativa del FeLV y para la detección de anticuerpos anti-FIV. Como material de prueba puede ser usado el suero, el plasma o la sangre entera de gato. En el presente trabajo solo se usó el suero sanguíneo. El método usa una combinación única de anticuerpos monoclonales específicos FeLV y proteínas FIV recombinantes conjugados con partículas colorantes Estos anticuerpos/proteínas están inmovilizados en una membrana en la fase sólida. La muestra fluye a través de la membrana. El anticuerpo/antígeno específico se acopla con el antígeno FeLV o anticuerpos anti- FIV de la muestra. Si la muestra contiene antígeno del FeLV o anticuerpos anti-FIV específicos, el complejo se une con el anticuerpo/antígeno en la fase sólida en la zona prueba “T” del test produciendo una línea rosada-púrpura. 23 En ausencia del antígeno del FeLV o anticuerpos del FIV no hay presencia de una línea en la zona de prueba “T”. El líquido sigue migrando a lo largo de la membrana produciendo una línea rosada-púrpura en la zona control “C” demostrando que la prueba ha funcionado apropiadamente. 3.3.3. Procedimiento de diagnóstico del test. Procedimos a extraer el suero con una pipeta Pasteur, (Ver anexo gráfico 6), para luego poner el suero en un Eppendorf, y así realizar el muestreo. Sacamos el test del tubo de protección. Identificamos los tubos con el nombre del paciente o número de identificación. Aseguramos de colocar el tubo sobre una superficie plana. Se colocó 2 gotas (40 µl) de suero del paciente, luego colocamos 3 gotas (160 µl) de buffer en el tubo de diagnóstico para la prueba de ViLeF. Y para la prueba de VIF colocamos una gota (20 µl) del suero del paciente y 3 gotas (160 µl) de solución buffer. Tras un período de incubación de 10 minutos, visualicé la formación del test de ambos tubos de prueba. 3.3.4. Tipo de muestra. Como material de prueba se usó suero sanguíneo de gatos domésticos. 3.3.5. Casuística. Se tomaron las 100 muestras de sangre entera de gatos domésticos procedente de la zona. 3.3.6. Factor de Estudio. La prevalencia de la enfermedad en la zona de estudio. 3.3.7. Datos a evaluar. Sintomatología. Edad 24 Sexo 3.3.8. Evaluación Estadística. Tamaño de la muestra. El tamaño de la muestra fue de 100 casos. Ver anexo X. Análisis de los datos Para el presente trabajo de investigación se utilizó para evaluar los datos, el Método Porcentual para determinar en porcentaje cuantos animales son positivos o negativos a leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la fórmula: # 𝑑𝑒 𝑐𝑎𝑠𝑜𝑠 𝑝𝑜𝑠𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜𝑠 % = 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑛𝑖𝑚𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑒𝑎𝑑𝑜𝑠 x 100 Los casos positivos fueron evaluados mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, cuya fórmula matemática es: 2 = (Fo – Fe)2/Fe En donde: 2 = Chi Cuadrado. Fo = Frecuencias observadas. Fe = Frecuencias esperadas. g.l. = grados de libertad. El valor calculado de 2 se comparó con el valor tabulado de 2 con k – r grados de libertad. La regla de decisión, entonces, es: rechazar Ho si 2 calculado es mayor o igual que el valor tabulado de 2 para el valor seleccionado de α. (Wayne, 2005). 25 Además se realizó el Análisis de sensibilidad, del método de diagnóstico utilizado mediante la fórmula: 𝑨 Sensibilidad = 𝑨+𝑪 x 100 Resultados Verdaderos Resultados de la Prueba Sintomáticos Asintomáticos Positivos (A) (B) Negativos (C) (D) Total (A + C) (B+D) Resultados Verdaderos Resultados de la Prueba (ViLeF) Casos o enfermos Sanos o controles Positivos 15 8 Negativos 26 51 Total 41 59 𝑨 Sensibilidad = 𝑨+𝑪 x 100 15 26 41 Sensibilidad = Sensibilidad= 36.58 Resultados Verdaderos Resultados de la Prueba (VIF) Casos o enfermos Sanos o controles Positivos 5 0 Negativos 36 59 Total 41 59 𝑨 Sensibilidad = 𝑨+𝑪 x 100 Sensibilidad: 12.19 IV. RESULTADOS EXPERIMENTALES La presente investigación consistió en determinar si en el Guasmo Oeste, zona sur de la cuidad Guayaquil, existen casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina, tomando en cuenta gatos domésticos que presentaron sintomatologías y gatos asintomáticos, edad y sexo obteniéndose los siguientes resultados. 4.1. Presencia de leucemia e inmunodeficiencia felina. De los 100 casos analizados se determinó 23 casos positivos a leucemia (23%) y 5 casos positivos a inmunodeficiencia felina (5%). 27 Cuadro 1: Determinación del porcentaje de Leucemia e Inmunodeficiencia felina. PORCENTAJE CASOS POSITIVOS VIF-ViLeF CASOS CASOS CASOS POSITIVOS POSITVOS TOTAL NEGATIVOS A ViLeF A VIF NÚMERO 23 5 72 100 PORCENTAJE 23% 5% 72% 100% Figura 1: Determinación del porcentaje de Leucemia e Inmunodeficiencia felina. PORCENTAJE CASOS POSITIVOS VIF-ViLeF 120% 100% 80% 60% PORCENTAJE 40% 20% 0% CASOS CASOS POSITIVOS A POSITVOS A ViLeF VIF CASOS NEGATIVOS TOTAL Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.2. Presencia de la enfermedad de acuerdo a pacientes asintomáticos y sintomáticos. De los 100 casos analizados se determinó 41 casos que presentaron síntomas con un 41%; 15 casos positivos a leucemia y 8 casos aparentemente sanos a leucemia, 59 casos que no presentaron síntomas con un 59 %; 5 casos que presentaron síntomas a Inmunodeficiencia felina con un porcentaje de 5%. 28 Cuadro 2: Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes con y sin sintomatologías. PORCENTAJE DE ACUERDO A PACIENTES CON Y SIN SINTOMATOLOGÍA SINTOMÁTICOS ASINTOMÁTICOS TOTAL NÚMERO 41 59 100 PORCENTAJE 41% 59% 100% Figura 2: Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes con y sin sintomatologías. PORCENTAJE DE ACUERDO A PACIENTES CON Y SIN SINTOMATOLOGÍA 120% 100% 80% 60% PORCENTAJE 40% 20% 0% SINTOMÁTICOS ASINTOMÁTICOS TOTAL Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.3. Presencia de la enfermedad de acuerdo con la edad de los felinos. Los pacientes que se analizaron fue a partir de 6 meses (0.5 años). Representando las edades en años: de 0,5-2 años con 59 casos (59%); de 2,1 - 4 años con 21 casos (21%); 4,1 - 6 años con 8 casos (8%); 6,1 - 8 años con 5 casos (5%); 8,1 - 10 años con 2 casos (2%); 10,1 - 12 años 1 caso (1%); 12,1 - 15 años con 1 caso (1%). 29 Cuadro 3: Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes por edad. FELINOS DOMÉSTICOS DE ACUERDO A LA EDAD DE DE DE DE 0.50-2 2,1-4 4,1- 6 6,1-8 DE 8,1-10 10,1-12 AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS CANTIDAD PORCENTAJE DE DE AÑOS 12,115 TOTAL AÑOS 59 21 8 5 2 1 4 100 59% 21% 8% 5% 2% 1% 4% 100% Figura 3: Determinación de porcentaje de acuerdo a pacientes por edad. FELINOS DOMÉSTICOS DE ACUERDO A LA EDAD 120% 100% 80% 60% 40% 20% 0% PORCENTAJE Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.4. Presencia de la enfermedad de acuerdo con las edades positivas a ViLeF. Se presentaron 23 casos positivos a ViLeF de acuerdo a las edades se estableció: De 0,5 - 2 años con 11 casos (47,8%); de 2,1 - 4 años con 7 casos (30,4%); de 4,1 6 años con 2 casos (8,7%); 6,1 - 8 años con 1 caso (4,3%); 8,1 - 10 años con 0 casos (0,0%); 10,1 - 12 años con 1 caso (4,3%); 12,1 - 15 años con 1 caso (4,3%). 30 Cuadro 4: Determinación de porcentaje de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo a la edad. CASOS POSITIVOS DE ACUERDO A LA EDAD A ViLeF DE DE DE DE DE 0,50-2 2,1-4 4,1- 6 6,1-8 8,1-10 AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS CANTIDAD 11 7 2 PORCENTAJE 47,8% 30,4% 8,7% DE DE 10,1- 12,1- 12 15 TOTAL AÑOS AÑOS 1 0 1 1 23 4,3% 0,0% 4,3% 4,3% 100% Figura 4: Determinación de porcentaje de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo a la edad. CASOS POSITIVOS DE ACUERDO A LA EDAD A ViLeF 120,00% 100,00% 80,00% 60,00% 40,00% 20,00% 0,00% PORCENTAJE Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.5. Presencia de la enfermedad de acuerdo con las edades positivas a VIF. Se presentaron 5 casos positivos a VIF de acuerdo a las edades se estableció: De 0,5 - 2 años con 2 casos (40,0%); de 2,1 - 4 años con 1 casos (20,0%); de 4,1 - 6 años con 2 casos (40,0%); 6,1 - 8 años con 0 casos (0,0%); 8,1 - 10 años con 0 casos (0,0%); 10,1 - 12 años con 0 caso (0,0%); 12,1 - 15 años con 0 casos (0,0%). 31 Cuadro 5: Determinación de porcentaje de pacientes positivos a VIF de acuerdo a la edad. CASOS POSITIVOS DE ACUERDO A LA EDAD A VIF DE DE 0,50-2 2,1-4 DE 4,1- 6 DE DE 6,1-8 8,1-10 AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS AÑOS CANTIDAD 2 1 2 0 PORCENTAJE 40,0% 20,0% 40,0% 0,0% DE DE 10,1- 12,1- 12 15 TOTAL AÑOS AÑOS 0 0 0 5 0,0% 0,0% 0,0% 100,0% Figura 5: Determinación de porcentaje de pacientes positivos a VIF de acuerdo a la edad. CASOS POSITIVOS DE ACUERDO A LA EDAD A VIF 120,00% 100,00% 80,00% 60,00% 40,00% 20,00% 0,00% PORCENTAJE Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.6. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo. Los 57 casos corresponden a machos con un 57% y el 43 a hembras con un 43% sumando un total de 100 casos. Cuadro 6: Determinación de la enfermedad de acuerdo al sexo de los felinos domésticos tanto ViLeF y VIF. 32 PORCENTAJE DE ACUERDO AL SEXO MACHOS HEMBRAS TOTAL 57 43 100 Figura: 6: Determinación de la enfermedad de acuerdo al sexo de los felinos domésticos tanto ViLeF y VIF. Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.7. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo a ViLeF. El número de casos positivos de acuerdo al sexo fueron: De los 23 casos positivo, 16 casos se presentaron en machos dando un porcentaje del 69.6% y 7 casos positivos en hembra correspondiendo al 30.4% a ViLeF. 33 Cuadro 7: Determinación de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo al sexo. CASOS POSITIVOS A VILEF POR SEXO CASOS CASOS POSITIVOS A POSITVOS A ViLeF ♂ ViLeF ♀ CANTIDAD 16 7 23 PORCENTAJE 69,6% 30,4% 100% TOTAL Figura 7: Determinación de pacientes positivos a ViLeF de acuerdo al sexo. CASOS POSITIVOS A VILEF POR SEXO 120,00% 100,00% 80,00% 60,00% PORCENTAJE 40,00% 20,00% 0,00% CASOS POSITIVOS A ViLeF ♂ CASOS POSITVOS A ViLeF ♀ TOTAL Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 4.8. Presencia de la enfermedad de acuerdo al sexo a VIF. De los 5 casos positivos, 4 casos se presentaron en machos dando un porcentaje del 80% y 1 casos positivos en hembra correspondiendo al 20% a VIF. Cuadro 8: Determinación de pacientes positivos a VIF de acuerdo al sexo. 34 CASOS POSITIVOS A VIF POR SEXO CASOS CASOS POSITIVOS A POSITVOS A VIF ♂ VIF ♀ CANTIDAD 4 1 5 PORCENTAJE 80% 20% 100% TOTAL Figura 8: Determinación de pacientes positivos a VIF de acuerdo al sexo. CASOS POSITIVOS A VIF POR SEXO 120% 100% 80% 60% PORCENTAJE 40% 20% 0% CASOS POSITIVOS A VIF ♂ CASOS POSITVOS A VIF ♀ TOTAL Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. V. DISCUSIÓN 5.1. De la presente investigación se examinaron 100 muestras con el método de pruebas inmunocromatográficas obteniéndose 23 casos positivos a ViLeF (23%) y 5 casos positivos a VIF (5%), en la zona sur de Guayaquil (Guasmo Oeste), a diferencia de lo expuesto por Barrera, M y Garcés, D. (2012), afirmó que hubo 7 casos positivos a ViLeF (7%) y 10 casos positivos a VIF (10%) en la zona del Cantón Tarifa Vía 35 Samborondón y zona Urbana de Pascuales (Parroquia Guayaquil) en 100 muestras realizadas, determinando así el mayor número de casos positivos a ViLeF por el poco conocimiento de estas patologías. 5.2. Referente a la sintomatología se registró en la presente investigación que existieron 15 casos positivos que presentaron síntomas y 8 casos que no presentaron síntomas (asintomáticos) a ViLeF y 5 casos que presentaron síntomas a VIF, Grenne. C, (2006), dice que existen felinos que padecen estas enfermedades y no manifiestan signos clínicos durante años. Aunque Valenzuela (2005), dice q es poco factible saber si un gato este infectado, sin antes de haber realizado una test de diagnóstico de sangre, ya que la sintomátologia es muy variable para especificar dichas enferemedades. 5.3. Siguiendo con la edad se estableció las edades en años a partir de 6 meses (0.5 años). En la investigación realizada se presentaron de 0,5-2 años 11 casos positivos a ViLeF (47,8); de 2,1-4 años 7 casos positivos (30,4%); de 4,1-6 años 2 casos positivos (8,7%); de 6,1-8 años 1 caso (4,3%); de 8,1-10 años 0 caso; 10,1-12 años 1 caso (4,3%); y de 12.1-15 años 1 caso positivo a ViLeF (4,3%), en cuanto a VIF de 0,5 - 2 años con 2 casos (40,0%); de 2,1 - 4 años con 1 casos (20,0%); de 4,1 - 6 años con 2 casos (40,0%). Según Valenzuela (2005), dice que la mayoría de felinos se infectan de ViLeF, cuando son jóvenes, pero no se manifiesta sus síntomas hasta que son adultos, y referente a VIF, dice que los felinos se infectan cuando son adultos, a partir de 5-8 años. La presente investigación realizada afirma que no existe una edad específica comparada con la investigación de Valenzuela (2005), el virus afecta a felinos de cualquier edad. También depende del estado inmunitario del animal y de la carga viral que pueda padecer. 36 5.4. Continuando con el sexo el presente trabajo de investigación estuvo conformado con 57 gatos y 43 gatas. Representando así que 16 gatos estuvieron expuestos a ViLeF, 7 gatas expuestas a ViLeF, y 4 gatos positivos a VIF y 1 gata positiva a VIF. Según Valenzuela (2005), dice que no hay predilección de sexo, pero los más propensos de contraer estas enfermedades son los machos. Concordando con lo expuesto por Valenzuela, en la presente investigación se concluye que en cuanto al sexo, los machos se infectan más que las hembras. 5.5. Referente a la metodología usada en la presente investigación, Gomes-Keller (2006), dice que todas la pruebas inmunocromatográficas en el mercado no son 100% confiables. Existen pruebas que son más específicas tales como la PCR, ELISA, IFI, Western blot. VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES De la presente propuesta de investigación se concluye y recomienda lo siguiente: 6.1. CONCLUSIONES 37 6.1.1. Según los resultados de esta investigación de las 100 muestras de la casuística se determinaron 23 casos positivos a leucemia y 5 casos positivos a inmunodeficiencia felina. 6.1.2. De acuerdo a la sintomatología a ViLeF obtuvimos una sensibilidad de 36.58% y 12.19% de sensibilidad a VIF, representando así un mayor porcentaje a ViLeF. 6.1.3. Con respecto a la edad el mayor número de casos positivos a ViLeF, se presentó entre 0,5 - 2 años con 11 casos, representando un porcentaje de 47,8% y de 2,1 - 4 años con 7 casos dando un 30,4%. 6.1.4. Además de acuerdo a la edad la presencia de la enfermedad a VIF se observó entre 0,5 - 2 años con 2 casos lo que representa un porcentaje de 40,0% y de 4,1 - 6 años con 2 casos que representan un 40,0%. 6.1.5. Y referente al sexo, el mayor número de casos positivos a ViLeF se presentó en machos con 16 casos que representan un porcentaje del 69.6% y 7 casos positivos en hembras que corresponden al 30.4%. 6.1.6. En el caso de VIF se determinaron 4 casos en machos lo que representa un porcentaje del 80,0% y 1 caso positivo en hembra correspondiendo al 20,0%. 6.2. RECOMENDACIONES 6.2.1. Se debe realizar exámenes complementarios de laboratorio a los gatos domésticos para poder llevar a cabo una buena anamnesis. 38 6.2.2. Es indicado realizar un examen serológico de VIF-ViLeF a partir de los 6 meses para poder llevar así un mejor control. 6.2.3. Se recomienda esterilizar a los gatos tanto hembras como machos para disminuir el vagabundeo. 6.2.4. Continuar con la investigación para establecer la prevalencia de estos virus en los distintos sectores de la ciudad de Guayaquil. VII. RESUMEN El virus de la leucemia y la inmunodeficiencia felina son los principales agentes patógenos representando enfermedades retrovirales de mayor morbilidad y mortalidad que afectan a 39 felinos domésticos, a la vez se requiere de un diagnóstico oportuno que permita prolongar la vida de estos animales. Se realizó un estudio donde se tomó muestras de 100 felinos domésticos del sector sur de la ciudad de Guayaquil (Guasmo Oeste). El diagnóstico simultáneo de leucemia e inmunodeficiencia felina se realizó con muestras de sangre entera extrayendo el suero para proceder con el diagnóstico definitivo, mediante el inmuno ensayo que son pruebas inmunocromatográficas (FASTest FeLV-FIV); estas pruebas de laboratorio fueron expuestas en el laboratorio de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de Guayaquil. La población estuvo conformada por 43 hembras y 57 machos en su mayoría a partir de 6 meses a 2 años. La prevalencia fue de 23 % para leucemia felina e inmunodeficiencia felina 5%; siendo los machos los que presentaron mayor positividad con relación a las hembras y el grupo de felinos con respecto a la edad fueron los mayores de 2,1 años, que mostraron un mayor porcentaje de infección. Los casos positivos fueron evaluados mediante la prueba de Chi cuadrado determinándose que si existe significancia estadística en cuanto a felinos asintomáticos, sintomáticos y sexo. Con respecto a la sintomatología se realizó el muestreo en felinos asintomáticos con un 59 % y 41 % con felinos que presentaron sintomatología. Representando así un mayor porcentaje de sensibilidad a Leucemia felina. Se recomienda la esterilización de los gatos, la que juega un papel importante en cuanto a evitar el mayor porcentaje de vagabundeo y de sobrepoblación felina, disminuyéndose también la diseminación de enfermedades. VII SUMMARY 40 Leukemia virus and feline immunodeficiency virus are major pathogens representing retroviral diseases increased morbidity and mortality affecting domestic cats, while it requires a timely diagnosis to prolong the life of these animals. A study sample of 100 domestic cats from southern Guayaquil (Guasmo West) sector took was performed. The simultaneous diagnosis of leukemia , and feline immunodeficiency virus was performed by extracting whole blood samples for serum proceed with diagnosis , by immunoassay which are immunochromatographic tests ( FASTest FeLV- FIV); these laboratory tests were exposed in the laboratory of the Faculty of Veterinary Medicine and Animal Science of the University of Guayaquil. The population consisted of 43 females and 57 males mostly from 6 months to 2 years. The prevalence was 23 % for feline leukemia and feline immunodeficiency to 5%; with males who had higher positivity compared to females and the group of cats with respect to age were 2.1 years older, which showed a higher rate of infection. Positive cases were evaluated by chi-square test determined if there is statistical significance as asymptomatic, symptomatic cats and sex. Symptomatology regarding sampling in asymptomatic cats with 59 % and 41% with that displayed symptoms cats was performed. Thus representing a higher percentage of susceptibility to feline leukemia. Sterilization of cats, which plays an important role in avoiding the highest percentage of wandering and feline overpopulation also decrease the spread of disease, is recommended. VIII. BIBLIOGRAFÍA 41 1. Anibarro, G. (2014). About.com.Gatos. España: 2014. Obtenido de gatos.about.com/od/enfermedades_comunes/a/virus-deInmunodeficiencia-felina-Fiv.htm [5-03-2014] 2. Ayala, M. (1998). El síndrome de inmunodeficiencia adquirida del gato. Lugo-España. Obtenido de http://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0301732X1998000100001&script=sci_arttext [8-03-2014] 3. Barneto,Alberto. (2008). Virus de la Leucemia Felina. Clínica Veterinaria Ayavet. Madrid. España. Obtenido de http://www.berkanocattery.es/salud/leucemia.html [11-05-2014] 4. Barrera, María. (2012) Prevalencia de Anticuerpo contra inmunodeficiencia felina y detección de Antígeno de Leucemia viral felina en la parroquia Tarifa de cantón Samborondón.Tesis de grado. 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Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para 46 una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para felinos Sintomáticos y asintomáticos. Casos positivos VILEF – VIF Fo Fe (Fo-Fe) (Fo-Fe) 2 (Fo-Fe) 2/Fe Sintomáticos 20 14 6 36 2,57 Asintomáticos 8 14 -6 -36 2,57 Total 28 28 0 5,14 28/2 =14 El resultado obtenido es: 5,14 Los g.l. = (r-1) g.l. = 2-1 g.l. = 1 Buscamos en la tabla 2 con un 0,05 y 1 g.l. = 3,84; por lo tanto se acepta la hipótesis de investigación porque el 2 calculado es superior al 2 de la tabla. Hay significancia estadística (P≤ 0,05), con respecto a felinos asintomáticos y sintomáticos. Anexo III. Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para la edad. 47 Casos positivos a VILEF – VIF Fo Fe (Fo-Fe) (Fo-Fe) 2 (Fo-Fe) 2/Fe 0.5 – 2 13 9,33 3,67 13,46 1,44 2.1 – 4 8 9,33 -1,33 1,77 0,19 Más de 4.1 7 9,33 -2,33 5,42 0,58 Total 28 28 0 2,21 28/3 = 9,33 El resultado obtenido es 2,21 Los g.l. = (r-1) g.l. = 3-1 g.l. = 2 Buscamos en la tabla 2 con un 0,05 y 2 g.l. =5,99; como el 2 no supera el valor al 2 tabla, concluimos que con respecto a la edad que no hay significancia estadística, (p≥ 0,05), por lo tanto no se acepta la hipótesis de investigación. Anexo IV. Evaluación estadística de los casos positivos de leucemia e inmunodeficiencia felina mediante la Prueba No Paramétrica para una sola muestra, Prueba de Chi Cuadrado, para el sexo. 48 Casos positivos VILEF – VIF Fo Fe ♀ 8 14 -6 -36 2,57 ♂ 20 14 6 36 2,57 Total 28 28 0 *** 5,14 (Fo-Fe) (Fo-Fe) 2 (Fo-Fe) 2/Fe 28/2 = 14 El resultado obtenido es 5,14 Los g.l. = (r-1) g.l. = 2-1 g.l. = 1 Buscamos en la tabla 2 con un 0,05 y 1 g.l. =3,84; por lo tanto se acepta la hipótesis de investigación porque el 2 calculado es superior al 2 de la tabla. Hay significancia estadística (P≤ 0,05), con respecto al sexo. Anexo V. TABLA DE χ2 (Chi cuadrado) Grados de 20 % 10 % 5 % 2% 1 % 0,1 % 5,41 7,82 6,64 10,83 9,21 13,82 Libertad. 1 2 1,64 3,22 2,71 4,60 3,84 5,99 49 3 4 5 4,64 5,99 7,29 6,25 7,82 9,84 11,34 16,27 7,78 9,49 11,67 13,28 18,46 9,24 11,07 13,39 15,09 20,52 6 7 8 9 10 8,56 9,80 11,03 12,24 13,44 10,64 12,02 13,36 14,68 15,99 12,59 14,07 15,51 16,92 18,31 15,03 16,62 18,17 19,68 21,16 16,81 18,48 20,09 21,67 23,21 22,46 24,32 26,12 27,88 29,59 11 12 13 14 15 14,63 15,81 16,98 18,15 19,31 17,28 18,55 19,81 21,06 22,31 19,68 21,03 22,36 23,68 25,00 22,62 24,05 25,47 26,87 28,26 24,72 26,22 27,69 29,14 30,58 31,26 32,91 34,53 36,12 37,70 16 17 18 19 20 20,46 21,62 22,76 23,90 25,04 23,54 24,77 25,99 27,20 28,41 26,30 27,59 28,87 30,14 31,41 29,63 31,00 32,35 33,69 35,02 32,00 33,41 34,80 36,19 37,57 39,25 40,79 42,31 43,82 45,32 21 22 23 24 25 26,17 27,30 28,43 29,55 30,68 29,62 30,81 32,01 33,20 34,38 32,67 33,92 35,17 36,42 37,65 36,34 37,66 38,97 40,27 41,57 38,93 40,29 41,64 42,98 44,31 46,80 48,27 49,73 51,18 52,62 26 27 28 29 30 31,80 32,91 34,03 35,14 36,25 35,56 36,74 37,92 39,09 40,26 38,88 40,11 41,34 42,56 43,77 42,86 44,14 45,42 46,69 47,96 45,64 46,96 48,28 49,59 50,89 54,05 55,48 56,89 58,30 59,70 VI. Ficha de datos Caso Nº 1 Paciente: Gringo Anamnesis: Sintomático (Inapetencia, Mucosas pálidas). 50 Caso Nº 2 Paciente: Yambo Anamnesis: Sintomático (Inapetencia, Gingivitis, Fiebre 40º). Caso Nº 3 Paciente: Manchas Anamnesis: Sintomático (Mucosas Ictéricas. Parasitado). Caso Nº 4 Paciente: Pocho Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 5 Paciente: Gris pequeño Anamnesis: Sintomático (Inapetente, presento hace un mes parásitos gastrointestinales, anorexia, decaimiento temperatura baja) Caso Nº 6 Paciente: Firulay Anamnesis: Sintomático (Se le cae el pelaje, temperatura normal). Caso Nº 7 Paciente: Tito Anamnesis: Sintomático (Deshidratado, linfoadenopatía, fiebre 41, decaimiento. Anoréxico, anémico). Caso Nº 8 Paciente: Tino Anamnesis: Asintomático (Castrado, parasitado). Caso Nº 9 Paciente: Mishi Anamnesis: Asintomático (Presento hace 3 meses Mycoplasma haemofelis). Caso Nº 10 Paciente: Fercho Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 11 51 Paciente: Micha Anamnesis: Sintomático (Caída del pelaje). Caso Nº 12 Paciente: Tricolor Anamnesis: Sintomático (Presento mordidas en las orejas y cuello (especie no especifica). Caso N 13 Paciente: Igor Anamnesis: Sintomático (Inapetencia). Caso Nº 14 Paciente: Chapi Anamnesis: Sintomático (Gingivitis, Diarrea, deshidratado, fiebre 41º, mucosas ictéricas, decaimiento, inapetencia). Caso Nº 15 Paciente: Muñeca Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 16 Paciente: Loquita Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 17 Paciente: Bebé Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 18 Paciente: Beto Anamnesis: Sintomático (Presento alopecia). Caso Nº 19 Paciente: Grace Anamnesis: Asintomático (Presento hace 10 días vómito). Caso Nº 20 Paciente: Oscar Anamnesis: Asintomático. 52 Caso Nº 21 Paciente: Silvestre Anamnesis: Asintomático (Presencia de parásitos externos (Pulgas y Piojos) Caso Nº 22 Paciente: Cochi Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 23 Paciente: Micho Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 24 Paciente: Nino Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 25 Paciente: Natasha Anamnesis: Asintomático (Presencia de parásitos externos Pulgas) Caso Nº 26 Paciente: Michú Anamnesis: Asintomático (Presento hace aprox 2 meses mordeduras y laceraciones en la extremidad posterior, Inapetencia). Caso Nº 27 Paciente: Niki Anamnesis: Sintomático (Presento parásitos gastrointestinales, linfoadenopatía, decaimiento). Caso Nº 28 Paciente: Blanquita Anamnesis: Asintomático Caso Nº 29 Paciente: Gatys Anamnesis: Sintomático (Ganglios poplíteos inflamados, anoréxica, mucosas pálidas). Caso Nº 30 53 Paciente: Nino Anamnesis: Sintomático (Temperatura baja, miembro anterior derecho inflamado y garras afectadas). Caso Nº 31 Paciente: Luisa Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 32 Paciente: Milita Anamnesis: Sintomáticos (Presento secreciones oculares). Caso Nº 33 Paciente: Pedrito Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 34 Paciente: Chiquita Anamnesis: Sintomático (Inapetencia, caída de pelaje, linfoadenopatía). Caso Nº 35 Paciente: Lucy Anamnesis: Asintomático Caso Nº 36 Paciente: Thomas Anamnesis: Asintomático (Falta de un miembro anterior izquierdo). Caso Nº 37 Paciente: Trampolín Anamnesis: Sintomático (Pelea de gatos hace 5 días, decaído, inapetencia orina amarillo intenso, mucosas pálidas temperatura 41º C, ganglios escapulares, poplíteos inactivos, amígdalas inflamadas). Caso Nº 38 Paciente: Bebé Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 39 54 Paciente: Loco Anamnesis: Asintomático (test positivo a Vilef). Caso Nº 40 Paciente: Colita Anamnesis: Sintomático (Decaimiento, falta de apetito, deshidratado, castrado). Caso Nº 41 Paciente: Princesa Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 42 Paciente: Luisito Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 43 Paciente: Garfield Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 44 Paciente: Madona Anamnesis: Asintomático (Presencia de parásitos externos (pulgas). Realizaron hemograma detectaron Mycoplasma haemofelis), En tratamiento. Caso Nº 45 Paciente: Gatito Anamnesis: Sintomático (Gingivitis, inapetencia, anoréxico). Caso Nº 46 Paciente: Stilan Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 47 Paciente: Franki Anamnesis: Sintomático (Inapetencia). Caso Nº 48 Paciente: Coco Anamnesis: Sintomático (Diarrea, deshidratado, falta de apetito, abdomen con pústulas). 55 Caso Nº 49 Paciente: Mishi Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 50 Paciente: Gatita Anamnesis: Sintomático (Linfoadenopatía generalizada, depresión, infecciones superficiales de piel, diarrea, anemia y secreciones oculares). Caso Nº 51 Paciente: Tito Anamnesis: Sintomáticos (Presento petequias en la región abdominal, presencia de ectoparásitos pulgas). Caso Nº 52 Paciente: Fany Anamnesis: Sintomáticos (Inapetencia). Caso Nº 53 Paciente: Federico Anamnesis: Sintomáticos (Mucosas pálidas, inapetencia, anoréxico). Caso Nº 54 Paciente: Juancho Anamnesis: Asintomáticos. Caso Nº 55 Paciente: Yupi Anamnesis: Sintomáticos (Secreciones oculares, presencia de ectoparásitos, anoréxico, inapetencia, deshidratado). Caso Nº 56 Paciente: Doraemon Anamnesis: Sintomático (Secreciones oculares, presencia de ectoparásitos, anoréxico, inapetencia). Caso Nº 57 Paciente Putifo 56 Anamnesis: Sintomático (Presencia de ectoparásitos, mucosas pálidas, anoréxico). Caso Nº 58 Paciente: Yoyi Anamnesis: Asintomático (Presencia de ectoparásitos). Caso Nº 59 Paciente: Cabezón Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 60 Paciente: Tigre Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 61 Paciente: Michito Anamnesis: Asintomático (Presencia de ectoparásitos). Caso Nº 62 Paciente: Tommy Anamnesis: Asintomático (Presencia de ectoparásitos). Caso Nº 63 Paciente: Cachudo Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 64 Paciente: Crass Anamnesis: Sintomático (Presencia de secreciones oculares, inapetencia). Caso Nº 65 Paciente: Misha Anamnesis: Sintomático (Inapetencia). Caso Nº 66 Paciente: Francisca Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 67 Paciente: Milagro 57 Anamnesis: Sintomático (Heces pastosas, orina amarillo intenso, fiebre). Caso Nº 68 Paciente: Félix Anamnesis: Sintomáticos (Presenta petequias en la región abdominal, inapetencia). Caso Nº 69 Paciente: Chacro Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 70 Paciente: Oliva Anamnesis: Asintomático. (Test positivo a leucemia) Caso N 71 Paciente: Mila Anamnesis: Asintomático (Caída del pelaje). Caso N 72 Paciente: Babys Anamnesis: Asintomático. Caso N 73 Paciente: Gatus Anamnesis: Asintomático. Caso N 74 Paciente: Rafica Anamnesis: Asintomático. Caso N 75 Paciente: Vivi Anamnesis: Asintomático (Hace 2 meses detectaron Mycoplasma haemofelis estuvo en tratamiento). Caso N 76 Paciente: Garfield Anamnesis: Sintomático (Decaimiento, linfoadenopatía, caída de pelaje en la cola, petequias en la región abdominal, deshidratado (está en tratamiento). 58 Caso N 77 Paciente: Viuda Anamnesis: Sintomático (Inapetencia). Caso N 78 Paciente: Bella Anamnesis: Asintomático. Caso N 79 Paciente: Olga Anamnesis: Sintomático (Inapetencia). Caso N 80 Paciente: Burbuja Anamnesis: Sintomático (Linfoadenopatía). Caso Nº 81 Paciente: Federico Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 82 Paciente: Dome Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 83 Paciente: Daysi Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 84 Paciente: Juancho Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 85 Paciente: Pepe Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 86 Paciente: Pantera Rosa 59 Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 87 Paciente: Pancho Anamnesis: Sintomático (Fiebre 40.5ºC, inapetencia, orina amarillo, heces negras, adelgazamiento, deshidratado, gingivitis, alitosis). Caso Nº 88 Paciente: Pancho Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 89 Paciente: Teresa Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 90 Paciente: Tina Anamnesis: Asintomático (Post parto). Caso Nº 91 Paciente: Niño Anamnesis: Asintomático (Aparentemente sano y positivo a Vilef). Caso Nº 92 Paciente: Rojo Anamnesis: Sintomático (Anoréxico). Caso Nº 93 Paciente: Daniel Anamnesis: Sintomático (Ganglios inflamados, Gingivitis). Caso Nº 94 Paciente: Tita Anamnesis: Asintomático (Aparentemente sano, presentó mordeduras, estuvo expuesto con animales leucémico). Caso Nº 95 Paciente: Lady Anamnesis: Asintomático (Presento mordeduras en sus orejas). 60 Caso Nº 96 Paciente: Tino Anamnesis: Sintomático (Inapetente). Caso Nº 97 Paciente: Príncipe Anamnesis: Asintomático. Caso Nº 98 Paciente: Santa Diabla Anamnesis: Asintomático (Post parto). Caso Nº 99 Paciente: Lucho Anamnesis: Sintomático (Gingivitis, ganglios inactivo, Inapetencia, deshidratado). Caso Nº 100 Paciente: Dominga Anamnesis: Asintomático. Anexos VII. Gráficos Gráfico 1 Estructura molecular de Leucemia Felina 61 Fuente: Line, 2009 Gráfico 2 Diagrama de la transmisión de la Leucemia Felina Fuente: Castellano, 1998 Gráfico 3 62 Estructura del Virus de Inmunodeficiencia felina Fuente: Palmero. M y Calballés, V, 2010 Grafico 4 Ubicación de la zona del muestreo Fuente: Google Earth, 2014 Gráfico 5 Plano del Guasmo Oeste 63 Gráfico 6 Eppendoff 2 ml Gráfico 7 Pipetas Pasteur de 2 ml 64 Anexos VIII. Certificado del Laboratorio de la Facultad 65 Anexos IX. Fotos Foto 1 66 Extracción de sangre de felinos Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 2 Paciente felino positivo a ViLeF Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 3 67 Presentación del Kit (FasTest VIF-ViLeF) Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 4 Baño María a 37º Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 5 68 Incubando las muestras a 37ºC por 20 minutos Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 6 Incubando las muestras a 37ºC por 20 minutos Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 7 69 Centrifugando las muestras a 3300 rpm por 10 minutos. Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 8 Pipeta graduada con 40 ul de suero del paciente para realizar el muestreo de ViLeF Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 70 Foto 9 Dr. Oscar Macías indicando el manejo del Kit Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 10 Dra. María de Lourdes Salazar Mazamba, PhD. Revisión estadística. Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 71 Foto 11 Biólogo: Antonio Freire, corrigiendo la metodología. Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 12 Recopilando información de acuerdo a los resultados de VIF-ViLeF Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 72 Foto 13 Observación de los resultados del test Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. Foto 14 Paciente llamado “GARFIELD”, positivo a VIF presentando gingivitis Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 73 X. TABLA DE PACIENTES FELINOS MUESTREADOS Diagnóstico Casos Nº Fecha de recolección Propietario Paciente Raza Sexo Edad (años) Domicilio VIF VILEF 1 15/06/2014 Cristobal Granda Gringo Mestizo ♂ 0.58 Av. Amazonas entre Zamora Chimchipe y Nuevo Rocafuerte Negativo Negativo 2 15/06/2014 Leiner Chávez Yambo Siamés ♂ 3 Av. Los Esteros y Calletano tarruel Negativo Negativo 3 15/06/2014 Kimberly Rivas Machas Mestizo ♀ 3 Sixto Durán y Juan Montalvan Cornejo Negativo Positivo 4 15/06/2014 Sonia Semigla Pocho Mestizo ♂ 0.58 Sixto Durán y Juan Montalvan Cornejo Negativo Positivo 5 15/06/2014 Familia. Barrezueta Gris pequeño Angora ♂ 0.75 Sixto Durán y Dr. Pio Jaramillo Negativo Positivo 6 15/06/2014 Amalaya Yagual Firulay Persa ♂ 0.5 Av. Los Esteros y Dr. Gabriel García Moreno Negativo Negativo 7 15/06/2014 Adrián Cedeño Tito Mestizo ♂ 5 Encontrado Por la terminal 25 de julio (metrovía) Positivo Positivo 8 17/06/2014 María Luisa Ponce Tino Mestizo ♂ 13 Av. Tena y Zamora Chimchipe Negativo Negativo 9 17/06/2014 Erick Lemus Guerra Mishi Persa ♀ 2 Av. Tena y Zamora Chimchipe Negativo Negativo 10 17/06/2014 Katherine Parrales Fercho Siamés ♂ 2 Av. Puyo y Cayetano Tarruel Negativo Negativo 11 17/06/2014 Mónica Guillem Cedeño Micha Persa ♀ 6 Dr. Pio Jaramillo y CRNL. Jacinto Eustaquio Rodríguez Negativo Negativo 12 17/06/2014 Shirley Vasquez Tricolor Mestizo ♀ 4 Dr. Juan Montalvan y CRNL. Jaciento Eustaquio R. Negativo Positivo 13 17/06/2014 Daniel Orrala Igor Mestizo ♂ 9 Av. Los Esteros y Luis Noboa Naranjo Negativo Negativo 14 18/06/2014 Luis Ocampo Chapi Mestizo ♂ 4 Coop. 25 de septiembre Callejón 48 y Av. 9 SO Positivo Positivo 15 18/06/2014 Ingrid Balseca Muñeca Mestizo ♀ 5 Coop. Fragata Av. 8 SO y Carchi Negativo Negativo 16 18/06/2014 Antonio Rodríguez Loquita Mestizo ♀ 1.6 Coop. Fragata Av. 8 SO y Carchi Negativo Negativo 17 18/06/2014 Fabricio Coello Jimenez Bebé Himalayo ♀ 0.67 Coop. Fragata Av. 8 SO y Carchi Negativo Negativo 18 18/06/2014 Verónica Salcedo Beto Angora ♀ 4 Dr. José Tomás de Aguirre y callejón 51 (Sta Mónica) Negativo Negativo 19 18/06/2014 Elba Salazar Grace Anbisinio ♀ 1.6 Dr. José Tomás de Aguirre y callejón 51 (Sta Mónica) Negativo Negativo 20 18/06/2014 Juana Conchacela Oscar Mestizo ♂ 2.6 Dr. José Tomás de Aguirre y callejón 51 (Sta Mónica) Negativo Negativo 21 19/06/2014 Viviana Gaibor Silvestre Mestizo ♂ 8 Dr. José Vicente Silva y calle 52 (Sta Mónica) Negativo Negativo 22 19/06/2014 Mariam López Cochi Persa ♀ 2 Dr. José Vicente Silva y calle 52 (Sta Mónica) Negativo Negativo 23 19/06/2014 Silvin Acuña Micho Siberiano ♂ 2 Dr. José Vicente Silva y calle 52 (Sta Mónica) Negativo Negativo 74 24 19/06/2014 Rosa Toro Nino Angora ♂ 0.67 Dr. José Vicente Silva y calle 52 (Sta Mónica) Negativo Negativo 25 19/06/2014 Familia. Ponce Donoso Natasha Mestizo ♀ 7 Dr. José Vicente Silva y calle 52 (Sta Mónica) Negativo Negativo 26 19/06/2014 Marco Carpio Michú Mestizo ♂ 3 Av. Cayetano Tarruel y Dr. José Tomás de Aguirre Negativo Positivo 27 19/06/2014 Paola León Niky Mestizo ♂ 1 Av. Cayetano Tarruel y Dr. José Tomás de Aguirre Negativo Positivo 28 19/06/2014 Hayde Moreno Blanquita Mestizo ♀ 12 Av.Cayetano Tarruel y Dr. José Tomás de Aguirre Negativo Positivo 29 20/06/2014 María Gloria Cornejo Gatys Mestizo ♀ 9 Mons. Manuel Ignacio (Sta Mónica) Negativo Negativo 30 20/06/2014 María Isabel Durán Nino Mestizo ♂ 13 Av. Los Esteros 2 da Etapa Negativo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Negativo Mons. José María Santistevan y Plaza y Callejón 52 (Sta Mónica) Mons. José María Santistevan y Plaza y Callejón 52 (Sta Mónica) Mons. José María Santistevan y Plaza y Callejón 52 (Sta Mónica) 31 20/06/2014 Tatina Gómez Luisa Siberiano ♀ 1 32 20/06/2014 Tatiana Viteri Milita Siamés ♀ 4 33 20/06/2014 Daniel Alvarez Pedrito Mestizo ♂ 0.58 34 20/06/2014 Ana Lucía Acuña Chiquita Siamés ♂ 2 Dr. José Vicente Silva y Av. 3 B (Santiaguito de Roldos) Negativo Positivo 35 20/06/2014 Peter Gavilanes Lucy Mestizo ♀ 1.6 Dr. José Vicente Silva y Av. 3 B (Santiaguito de Roldos) Negativo Negativo 36 22/06/2014 Erika Campoverde Ramírez Thomas Siamés ♂ 13 Dr. José Vicente Silva y Av. 3 B (Santiaguito de Roldos) Negativo Negativo 37 22/06/2014 Rosa Calderón Trampolín Mestizo ♂ 2 Dr. José Vicente Silva y Av. 3 B (Santiaguito de Roldos) Negativo Positivo 38 22/06/2014 Gabriela Merchán Bebé Persa ♀ 2.3 Dr. José Vicente Silva y Av. 3 B (Santiaguito de Roldos) Negativo Negativo 39 22/06/2014 Sin Nombre Loco Mestizo ♂ 2 Santa Mónica MZ 1560 Y SOLAR 25 Negativo Positivo 40 22/06/2014 Ana Tapia Colita Mestizo ♀ 1.4 Santa Mónica MZ 1560 Y SOLAR 25 Negativo Positivo 41 24/06/2014 Isabel Aguay Princesa Mestizo ♀ 1.5 Dr. Mario Viteri y Goméz Cornejo Negativo Negativo 42 24/06/2014 Xavier García Luisito Persa ♂ 7 Dr. Mario Viteri y Goméz Cornejo Negativo Negativo 43 24/06/2014 Daniel Bravo Garfield Mestizo ♂ 3 Dr. Mario Viteri y Goméz Cornejo Negativo Negativo 44 24/06/2014 Marlene Zambrano Madona Siamés ♀ 13 Dr. Mario Viteri y Goméz Cornejo Negativo Negativo 45 24/06/2014 Jefferson Medina Gatito Mestizo ♂ 0.58 Fertisa Negativo Positivo 46 24/06/2014 Katty López Parraga Stilan Siamés ♂ 6 Fertisa Negativo Negativo 47 24/06/2014 Elissa Williams Franki Mestizo ♂ 1 Fertisa Negativo Negativo 48 26/06/2014 Mercy Cedeño Coco Mestizo ♂ 0.67 Fertisa Negativo Negativo 49 26/06/2014 Erick Flores Chávez Mishi Persa ♀ 2 Fertisa Negativo Negativo 75 50 26/06/2014 Jorge Herrera Gatita Mestizo ♀ 1.2 Cuidadela Jaime Nebot Positivo Negativo 51 26/06/2014 Sofía Aguirre Tito Mestizo ♂ 0.75 Coop. La Fragata Negativo Negativo 52 26/06/2014 Lilayla Pérez Fanny Mestizo ♀ 1 Coop. La Fragata Negativo Negativo 53 26/06/2014 Iliana Matute Federico Mestizo ♂ 2 Coop. La Fragata Negativo Negativo 54 26/06/2014 Juan Carlos Soledispa Juancho Mestizo ♂ 2 Coop. La Fragata Negativo Negativo 55 29/06/2014 Axel Muentes Yupi Mestizo ♂ 2 Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo Alvarado(Parque) Negativo Negativo 56 29/06/2014 José Nieto Doraemon Mestizo ♂ 2 Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo Alvarado(Parque) Negativo Negativo 57 29/06/2014 Mercedes García Pitufo Mestizo ♀ 2 Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo Alvarado(Parque) Negativo Negativo 58 29/06/2014 Hugo Gómez Yoyi Mestizo ♂ 2 Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo Alvarado(Parque) Negativo Negativo 59 01/07/2014 Leonardo Trujillo Cabezón Mestizo ♂ 0.67 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 60 01/07/2014 Félida Márquez Trigre Mestizo ♂ 1 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 61 01/07/2014 Luis Pacheco Michito Mestizo ♂ 8 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 62 01/07/2014 Alberto Pico Tommy Mestizo ♂ 5 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 63 01/07/2014 María Elena González Cachudo Mestizo ♂ 0.83 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 64 01/07/2014 Eugenia Guadalupe Pilay Crass Mestizo ♂ 1 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 65 01/07/2014 Marisel Sancán Gómez Misha Mestizo ♀ 3 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 66 03/07/2014 Leonel Suarez Cedeño Francisca Angora ♀ 2 Vía Perimetral y Avenida 20 SO Negativo Negativo 67 03/07/2014 Yadira Macías Milagro Mestizo ♀ 0.67 Av. 25 de Julio y Av. Los esteros Negativo Negativo 68 03/07/2014 Darío Ponce Felix Mestizo ♂ 0.58 Av.. 25 de Julio y Av. Los Esteros Negativo Negativo 69 03/07/2014 Mario Panchana Chacro Mestizo ♂ 3 Av. 25 de Julio y Av. Los Esteros Negativo Negativo 70 03/07/2014 María Buestán Oliva Mestizo ♀ 4 Av. 25 de Julio y Av. Los esteros Negativo Positivo 71 03/07/2014 Juana Sylva B. Mila Angora ♀ 1.6 Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo Alvarado(Parque) Negativo Negativo 72 03/07/2014 U.A.E Babys Mestizo ♂ 1 Av. 25 de Julio Negativo Negativo 73 03/07/2014 U.A.E Gatus Mestizo ♂ 3 Av. 25 de Julio Negativo Negativo 74 03/07/2014 U.A.E Rafica Mestizo ♀ 5 Av. 25 de Julio Negativo Negativo 75 04/07/2014 U.A.E Vivi Mestizo ♀ 1 Av. 25 de Julio Negativo Negativo 76 04/07/2014 Cecilia Salazar Garfield Siamés ♂ 6 Dr. Gabriel García Moreno y Calle 50 B SO Positivo Positivo 76 77 04/07/2014 José Saavedra Viuda Mestizo ♀ 4 Av. 25 de Julio y Pedro José Camacho Negativo Negativo 78 04/07/2014 Lisbeth Acuña Bella Siamés ♀ 3 Av.25 de Julio y Pedro José Camacho Negativo Negativo 79 04/07/2014 David Bustillo Olga Mestizo ♀ 1 Av. 25 de Julio y Pedro José Camacho Negativo Negativo 80 05/07/2014 Joselyn Astudillo Burbuja Mestizo ♀ 7 Av. 25 de Julio y Pedro José Camacho Negativo Positivo 81 05/04/2014 Rafael Márquez Federico Mestizo ♂ 3 Sta Mónica ( Calle 51C SO Padre Cayetano Tarruel) Negativo Negativo 82 05/07/2014 Liceth Sánchez Dome Mestizo ♀ 2 Sta Mónica ( Calle 51C SO Padre Cayetano Tarruel) Negativo Negativo 83 07/07/2014 Elena Abad Daysi Mestizo ♀ 0.67 Sta Mónica ( Calle 51C SO Padre Cayetano Tarruel) Negativo Negativo 84 07/07/2014 Susana Campos Juancho Mestizo ♂ 4 Sta Mónica ( Calle 51C SO Padre Cayetano Tarruel) Negativo Negativo 85 07/07/2014 Remigio Ortega Pepe Himalay ♂ 2 Sta Mónica ( Calle 51C SO Padre Cayetano Tarruel) Negativo Negativo 86 07/07/2014 Ricardo Vélez Pantera Rosa Siamés ♂ 0.83 Avenida 1A SO y Callejón 51 SO Negativo Negativo 87 07/07/2014 Andys Trejo Pancho Mestizo ♂ 2 Floresta I Mz. 25 V.10 Positivo Positivo 88 07/07/2014 Juan Carlos Rivas Pancho Mestizo ♂ 4 Jaime de Roldós (Fertisa) Negativo Positivo 89 07/07/2014 Luis Claudio T. Teresa Siamés ♀ 1 Jaime de Roldós (Fertisa) Negativo Negativo 90 08/07/2014 Ruth Torres R. Tina Mestizo ♀ 0.75 Carchi y Av Juan Montalvan Negativo Negativo 91 08/07/2014 Mercy González Pincay Niño Siamés ♂ 2 Carchi y Av Juan Montalvan Negativo Positivo 92 09/07/2014 Sonia Villagrán Rojo Mestizo ♂ 4 Los Esteros (II Esteros) Negativo Negativo 93 09/07/2014 Sonia Villagrán Daniel Mestizo ♂ 1 Los Esteros (II Esteros) Negativo Negativo 94 09/07/2014 Sonia Villagrán Tita Mestizo ♀ 4 Los Esteros (II Esteros) Negativo Positivo 95 09/07/2014 Sheyla Echeverría Lady Mestizo ♀ 2 Los Esteros (II Esteros) Negativo Negativo 96 09/07/2014 Sheyla Echeverría Tino Mestizo ♂ 2 Cdla . Jambelí Negativo Negativo 97 09/07/2014 Sheyla Echeverría Príncipe Siamés ♂ 5 Cdla . Jambelí Negativo Negativo 98 09/07/2014 Sheyla Echeverría Santa Diabla Mestizo ♀ 2 Cdla . Jambelí Negativo Negativo 99 11/07/2014 Edwin García Lucho Mestizo ♂ 2 Floresta 2 Negativo Positivo 100 16/07/2014 Luis Maldonado Dominga Mestizo ♀ 1 Santiaguito de Roldos 1 Negativo Negativo Torres-González. (2014). Trabajo de Titulación. 77 78
