AMPLIFICACION Y CLONAMIENTO DEL GEN psa A DE S

AMPLIFICACION Y CLONAMIENTO DEL GEN psa A DE S. pneumoniae EN
E. coli. (Amplification and cloning of psa A gene of S. pneumoniae in E. coli),
Velasquez F (1) , Torres J(1), Riveros B(1)., Maldonado A(2), Seoane M(2), Quiroga C(1),
Sein J(1), Vásquez A(1). (1)Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de
Producción. (2)Sección Bacteriología, Departamento de Laboratorios de Salud. Instituto
de Salud Pública de Chile. Email: avasquez@ispch.cl
Introducción: Streptococcus pneumoniae es el agente etiológico de un amplio rango de
enfermedades como meningitis, neumonia y otitis media. En su patogenia participan
polisacáridos capsulares y proteínas de superficie. La proteína Psa A es una adhesina de
superficie, genéticamente conservada y expresada en todos los serotipos de S.
pneumoniae. Esta proteína se ha descrito como candidato para el desarrollo de vacunas
y métodos diagnóstico para infecciones causadas por S. pneumoniae.
Objetivo: Clonar el gen de la proteína Psa A desde aislados clínicos nacionales de S.
pneumoniae. Métodos: Se diseñaron partidores y ciclos de amplificación a partir de
secuencias del gen descritas en la literatura. La reacción de PCR se realizó
directamente desde suspensiones bacterianas de las cepas de S. pneumoniae 14C y 18C.
(Aislados clínicos del año 2000). El fragmento amplificado se purificó y ligó a un
vector comercial para el clonamiento de productos de PCR. Los clones obtenidos fueron
analizados mediante digestión con la enzima de restricción EcoR I, enzima que se ha
reportado que posee un sitio de reconocimiento en este gen.
Resultado: Se amplificó por PCR un fragmento de aproximadamente 800 pb desde una
suspensión bacteriana de S. pneumoniae 14C y 18C. El fragmento de DNA clonado fue
digerido por la enzima de restricción EcoR I, encontrándose un sitio de corte para esta
enzima. Conclusión: El fragmento clonado es del tamaño esperado y presenta el sitio
de corte para la enzima EcoR I descrito para este gen. Los resultados obtenidos
sugieren que hemos clonado el gen de psa A desde aislados clínicos de cepas de mayor
incidencia en nuestro país. La importancia del clonamiento de este gen es marcar el
inicio en el estudio de esta proteína en cepas nacionales; su secuencia nucleotídica nos
permitirá compararlas con las descritas en la literatura y el estudio inmunológico de esta
proteína clonada nos permitirá desarrollar nuevos métodos de diagnóstico. De igual
forma, el análisis de la secuencia nucleotídica del gen y propiedades inmunológicas nos
permitirá evaluar su utilización como inmunógeno en el desarrollo de vacunas basadas
en proteínas de superficie de S. pneumoniae.
IDENTIFICACION DEL EXPOSITOR
Abel Eduardo Vásquez Veloso
Centro de Investigación y Desarrollo, Departamento de Producción, Instituto de
Salud Pública de Chile.
Av. Marathon 1000, Ñuñoa. Santiago.
tel: 3507516
avasquez@ispch.cl
Modalidad: Panel