“ESPECIALIDAD EN GENETICA Y BIOTECNOLOGÍA” COLEGIO DE BIOQUÍMICOS DE LA PROVINCIA DE CÓRDOBA Directores: Dr. Rubén Simonetta Director General del Centro Integral de Genética Aplicada (CIGA). Ex-Director de Research & Development PAR Advanced Technologies (EE.UU.). Fundador y Miembro de la 1º Comisión Directiva de la SAGF (Sociedad Argentina de Genética Forense). Miembro de la SLAGF (Sociedad Latinoamericana de Genética Forense). Miembro del GEP y de la ISFG (International Society for Forensic Genetics). Miembro de RELAG (Escuela Latino Americana de Genética Humana y Medica. Ex-Perito del T.S.J. Especialista en Huellas Digitales Genéticas (Mat: 001/1993). Dr. Juan Carlos Jaime Director Científico del Centro Integral de Genética Aplicada (CIGA). Doctorando en Medicina Legal (Universidad de Murcia - España). Master en Genética Forense (Universidad de Granada - España). ExPerito Químico Legal del Gabinete Médico-químico Legal de la Policía Judicial de Córdoba. Miembro del GEP y de la ISFG (International Society for Forensic Genetics). Los docentes que se convocarán son profesionales de reconocida trayectoria en cada una de las áreas temáticas. Carga Horaria: Cuatro cuatrimestres. Actividades presenciales, smipresenciales y prácticas. Dirigido a graduados Bioquímicos, Licenciados en Química, Biólogos, Microbiólogos, Ingenieros Agrónomos, Veterinarios, Médicos y Farmacéuticos. 1 INTRODUCCIÓN La biotecnología comprende el estudio de las moléculas constitutivas de la materia viva; los mecanismos por los cuales estas moléculas se influyen mutuamente para construir, mantener y perpetuar el estado de vida; las leyes y procesos fisicoquímicos, metabólicos y moleculares que rigen las transformaciones y comportamientos de los organismos vivientes; así como el conjunto de metodologías moleculares y celulares que permiten el control, manipulación y transformación de los organismos vivos. El sector biotecnológico, tras alcanzar un relativo equilibrio en los países desarrollados (EEUU., Japón, Comunidad Económica Europea) comienza su consolidación en Argentina – es el segundo productor mundial de soja transgénica - y presenta un sector de oportunidades y empleo que crecerá en los próximos años. Con el ingreso de las técnicas de investigación biotecnológica en la industria, esta última se encontró con un gran déficit de personal con un perfil científico- empresarial, generando una demanda de profesionales que el mercado de hoy en día no esta cubierto. El presente programa tiene como objetivo unir las últimas tecnologías utilizadas en el campo científico desde una visión práctica con lo empresarial. La biotecnología en sí misma no es una ciencia, sino es un enfoque multidisciplinario que involucra biología, bioquímica, genética, microbiología, bromatología, agronomía, ingeniería, química, medicina y veterinaria; por lo cual esta especialidad está dirigida a todos los profesionales de estas carreras que podrán desempeñarse como “Especialistas Biotecnólogos”. El siguiente es un ejemplo de la producción de un biofármaco haciendo una simplificación de las operaciones y personal involucrado que intervienen: EN TODAS LAS ETAPAS: BIOTECNOLOGO-EMPRESARIO 2 OBJETIVOS DE LA ESPECIALIDAD EN BIOTECNOLOGIA Conocer las técnicas modernas utilizadas en biotecnología con el fin de lograr una formación académica de alto nivel para el desempeño profesional en la investigación, la docencia y el desarrollo productivo en la industria. Desarrollar capacidad analítica, crítica y creativa. Analizar las aplicaciones prácticas en cada uno de los sectores industriales que abarca como por ejemplo la industria alimenticia, química y farmacéutica; así como los métodos biotecnológicos utilizados para la protección del medio ambiente. Conocer los métodos y técnicas de gestión empresarial y de este modo asegurar la disponibilidad al sector económico y científico de recursos humanos capacitados en el manejo de las técnicas de biotecnología con una visión empresarial. FUNDAMENTACION DEL PROGRAMA Biotecnología aplicada a la salud humana y animal En esta área se realizan los estudios encaminados a resolver los problemas relacionados con aquellas enfermedades humanas y animales que tengan una mayor relevancia socio-económicas en nuestro país. Otras aplicaciones de la Biotecnología Animal y Vegetal son: la producción de vacunas, antibióticos y otras sustancias químicas de interés en el sector de la salud por sus capacidades biocontroladoras de enfermedades, aporte de inmunidad, bloqueo de patógenos, etc. El presente programa, en los capítulos 1, 2, y 3, se centran en objetivos relacionados con el diagnóstico, la identificación y caracterización de genes haciendo especial énfasis en el empleo de técnicas de biología molecular y celular. Biotecnología agroalimentaria El sector agroalimentario es de sumo interés económico para nuestro país y en especial para la provincia de Córdoba. Esto se explica por dos razones, en primer lugar la región centro es el área de mayor producción de agro alimentos de todo el país, siendo la ubicación geográfica ideal para el desarrollo y testeo de nuevos productos. Por otra parte, Córdoba cuenta con una importante base de recursos humanos tanto en cantidad como en calidad ya que posee numerosos alumnos y profesionales de carreras directamente relacionadas con la biotecnología. 3 En la actualidad 2.000.000.000 de seres humanos están crónicamente desnutridos. El escenario en los próximos 20 años será sumamente complicado ya que la demografía pronostica en este periodo la duplicación de la población mundial actual, lo que supone que para mantener la producción de alimentos, esta no debería duplicarse sino “triplicarse”. La realidad hoy es que en la tierra, la capacidad de producción y los recursos hídricos ya están al límite y se está contribuyendo a destruir la fertilidad del planeta, por ende para hacer frente a estos requerimientos, contamos con la biotecnología agroalimentaria como una herramienta promisoria. Por las razones expuestas esta es la orientación que le daremos a la especialidad en biotecnología agroalimentaria, cuya profundización está dada en el capítulo 4. Biotecnología industrial Esta es un área donde la necesidad de aproximación pluridisciplinaria a los problemas es muy evidente, ya que la producción industrial es un proceso integrado que abarca desde el diseño del organismo productor hasta la purificación del producto final. Se trata en el capítulo 5. Biotecnología del medio ambiente Esta área de la biotecnología pretende resolver problemas medioambientales específicos que posee el territorio argentino haciendo especial énfasis en el desarrollo de procesos de eliminación y/o aprovechamiento de residuos de origen químico y biológico, detoxificación y limpieza del medio ambiente, mejora y monitoreo de la bioseguridad en los procesos que impliquen la liberación al medio ambiente de organismos modificados genéticamente, entre otros temas. El programa tratará esta área de la biotecnología en él capitulo 6. Gestión empresarial El objetivo de incorporar esta temática en el presente programa es combinar las metodologías y herramientas de la biotecnología con estrategias de negocios, el juego de empresa, las inversiones, el management y la propiedad intelectual. Se tratara en el capítulo 7. CAPITULO 1 INTRODUCCION 4 Sección A: Introducción a la Biotecnología Definición, Biotecnología tradicional y moderna. Cronología. Impacto de la biotecnología. Biotecnología y desarrollo. Sección B: Genética Molecular Estructura del material genético; replicación del ADN, mutaciones y reparación del daño en el ADN, mecanismos de transposición y recombinación del ADN. Estructura del genoma humano, animal, vegetal y microbiano. Transcripción en eucariotas y procariotas, traducción, La Genómica. La Proteómica. CAPITULO 2 HERRAMIENTAS BASICAS DE GENETICA Sección A: La Reacción en cadena de la Polimerasa PCR. Reacción standard. Especificidad, amplificación y diseño de iniciadores “primers”. Ventaja de la PCR como método de clonado. Secuencias de DNA blanco. Tamaño de los productos formados. Errores cometidos en la replicación del DNA. Usos de la PCR. Ensayo de polimorfismos de sitios de restricción y repeticiones en tandem”: RSPs y STRPs. Análisis de mutaciones. PCR utilizando iniciadores de oligonucleótidos degenerados: DOP –PCR. “Linked primers PCR”. PCR reverse. “Bubble linkers” PCR. PCR asimétrica. PCR anidada. Sección B: Metodología para la determinación de los polimorfismos moleculares Métodos para detectar polimorfismos de nucleótido único desconocido: electroforesis en gel desnaturalizante y en gradiente (DGGE), conformación de cadena única (SSCP) y electroforesis en gel con gradiente de temperatura (TGGE). Métodos para detectar polimorfismos de nucleótido único conocidos: ensayo de ligadura de oligonucleótido (OLA), ensayo de incorporación de un terminador fluorescente dependiente de templado (TDI), ensayo de ligadura de un oligonucleótido específico de alelos (ASO). Métodos para la detección de polimorfismos en la longitud de fragmentos de restricción (RFLPs). Métodos para el análisis de polimorfismos a nivel de secuencias minisatélites y microsatélites. Métodos para el análisis de secuencias amplificadas “at random”. 5 Sección C: Ingeniería Genética Metodología del DNA recombinante. Objetivos generales del uso de estas metodologías. Panorama general de las estrategias más comunes utilizadas en ingeniería genética. Enzimas utilizadas en el clonado molecular. Enzimas de restricción y enzimas metilantes. DNA polimerasa. RNA polimerasa – DNA dependiente. Ligasas, quinasas, fosfatasas. Proteínas de unión a DNA. Características esenciales de los plásmidos. Los plásmidos como vectores de clonado. Desarrollo de nuevos plásmidos. Plásmidos comúnmente usados. Manipulación, extracción y purificación de plásmidos. Preparación en pequeña escala (miniprep). Preparación en gran escala (maxiprep). Estrategias de clonado en plásmidos. Desfosforilación de DNA plasmídico linealizado. Reacciones de ligación. Metodologías para la introducción de DNA plasmídico en hospedadores adecuados. Preparación y transformación de E. coli competentes. Electroporación. Identificación de colonias bacterianas que contienen plásmidos recombinantes. Análisis de restriccción. Alfa – complementación. Inactivación insercional. Búsqueda por hibridación. Metodologías para el rastreo y detección de recombinantes en bibliotecas de clones. Uso de anticuerpos y sondas de ácidos nucleicos (metodologías para su preparación). Técnicas basadas en el uso de isótopos radiactivos, reacciones colorimétricas o de luminiscencia (métodos no radiactivos). Sondas oligonucleotídas sintéticas. Electroforesis de ácidos nucleicos en geles de azarosa, en geles de poliacrilamida, en condiciones nativas y en condiciones desnaturalizantes. Secuenciamiento de ácidos nucleicos. Preparación de bibliotecas de clones. Extracción, purificación y análisis de DNA genómico. Construcción y análisis de bibliotecas de DNA genómicas. Características esenciales de los bacteriófagos. Fagos con genoma de DNA de doble cadena y simple cadena como vectores de clonado. Bacteriófagos lambda. Hospedadores bacterianos. Crecimiento, purificación y análisis de DNA genómico. Identificación y análisis de recombinantes. Características esenciales de los cósmidos. Cósmidos como vectores de clonado. Construcción de bibliotecas de DNA genómico en cósmidos. Amplificación y almacenamiento de las bibliotecas. Fagos filamentosos: M13. Propagación de bacteriófagos M13 y preparación de DNA. Clonado de M13 y transfección de E. coli competentes. Identificación y análisis de recombinantes. Clonado en phagemins. Amplificación in vitro de DNA por PCR. Mutagénesis in vitro. Generación de moléculas quiméricas por PCR. Mutagénesis de sitio dirigida. Expresión de genes clonados en E. coli. Detección y análisis de proteínas expresadas a partir de genes clonados. 6 CAPITULO 3 BIOTECNOLOGIA Y SALUD Sección A: Marcadores Moleculares Fundamentos y técnicas de biología molecular aplicados a los marcadores genéticos. Tinta Genética. Humano: Análisis de ADN nuclear aplicado a la determinación de la identidad y filiación, casos de identificación forense por caracterización del ADN. Utilización de marcadores moleculares del ADN mitocondrial y del cromosoma Y. Vegetal: Marcadores moleculares para el mejoramiento genético. Identificación de genotipos (pureza varietal), usos en bancos de germoplasma. Mapeo genético. Filogenia molecular. Animal: Trazabilidad de la carne de exportación. Marcadores asociados a digestibilidad de pasturas para aumento de rendimiento en carne de ganado vacuno. Otras aplicaciones. Microbiano: Identificación genética de cepas microbianas de interés comercial. Identificación para diagnóstico de patógenos. Epidemiología molecular. Sección B: Identificación de Genes Humanos que producen enfermedades Estrategias Generales: Clones Funcionales. Mapeo por clonado posicional. Detección de genes candidatos dependientes e independientes de su ubicación cromosomal. Asociación con la enfermedad. Oligonucleótidos específicos de los genes. Anticuerpos específicos. Ensayos funcionales complementarios. Clonado por hibidrización substractiva. Análisis por cruzamiento. Identificación de secuencias determinadas dentro del gen. Selección en bibliotecas de cDNA. “Zoo blotting”. Identificaciones de regiones CpG. “Exon Trapping” Análisis de secuencias y secuencias coincidentes. Detección de identificación de mutaciones. Movilidad de heterodúplex en poliacrilamida. Análisis de polimorfismos de cadena simple (SSCP o SSCA). Ruptura química o enzimática de los “mismatches” (CCP). Análisis de proteínas quebradas (PTT). Análisis de expansiones de tripletes. Sección C: Bases Moleculares de algunas enfermedades de origen genético La base de datos OMIN. Enfermedades causadas por desórdenes cromosomales, el síndrome de Down. Enfermedades mendelianas o monogénicas, influencia de la penetrancia, desordenes autosomales y ligados al sexo. Enfermedades de origen mitocondrial. “ Genetic counseling” y factores 7 éticos. La estructura del “CLUSTER” genético de la globina y las anemias mediterráneas, diferentes tipos. El gen del regulador de la conductancia de fibrosis quística, tipos de mutación y su patología. El gen de la enfermedad de Huntington, el papel de las repeticiones trinucleotídicas y su patología. Otras expansiones trinucleotídicas, síndrome del cromosoma X frágil. Enfermedad de Alzheimer. Hemofilia. Alcaptonuria. Hipercolesterolemias. Enfermedad de Tay Sachs. Charcot Marie Tooth. Síndrome de Angelman. Síndrome de Marfan. Poliquistosis renal. Los priones y el síndrome de Creutzfeldt – Jacob. El gen de la distrofina y la enfermedad de Duchenne. La miastenia y el receptor de acetilcolina. El receptor de rianodina y la Hipertermia maligna. Otros desórdenes genéticos. Sección D: Oncogenes Introducción. Bases moleculares de la carcinogénesis: El ciclo celular, etapas y su regulación por fosforilaciones proteicas; papel de factores moduladores. detección de oncogenes en células cancerígenas humanas, activación de oncogenes, rol de los proto-oncogenes en células normales y transformadas, oncogenes en la práctica clínica, virus y cáncer, cáncer hereditario. Sección E: Terapia Genética Clonado de genes humanos. Humanización de los anticuerpos. Vacunas modificadas por ingeniería genética. Diferentes estrategias de las terapias genéticas. Modificación del numero de copias de genes normales (GAT). Muerte celular específica (genes suicidas). Corrección de mutaciones. Inhibición de la expresión de genes alterados. Corrección de enfermedades hereditarias. Thyl, elastasa. Antígenos de SV40, c–myc, c–fos, alfa fetoproteína, insulina, gamma y beta globina, protamina, beta lactoglobulina, etc. Regulación de promotores. Terapias génicas. Corrección y obtención de mutantes. Sección F: Farmacéutica Regulación Genética de producción de enzimas. Estudio de farmacocinética. Producción de antibióticos. Preparación de vacunas. Biotransformación de esteroides. Métodos de Ingeniería Genética en productos farmacológicos. CAPITULO 4 BIOTECNOLOGIA AGROALIMENTARIA Sección A: Animales Transgénicos 8 Introducción de genes heterólogos en animales. Construcción de genes por fusión. Secuencias reguladoras. Promotores. Producción de ratones transgénicos por microinyección pronuclear. Metalotioneína. Integración de los genes heterólogos en el DNA cromosómico. Inducción de la expresión. Expresión en ratones transgénicos. Metilación de los nuevos genes. Transmisión hereditaria. Modelo de ratones transgénicos para el estudio de fisiopatologías humanas. Oncogénesis dirigida: expresión de oncogenes en ratones transgénicos y genes que participan en el desarrollo embrionario y en la diferenciación celular. Modelo de animales transgénicos para uso de la farmacología experimental: MDR, beta Adrenérgicos, anemias, hipercolesterolemias, epilepsia, hemofilia, etc. Sección B: Animales de granja Transgénicos Producción de proteínas recombinantes de interés económico en la leche de animales transgénicos. Producción de cerdos transgénicos: xenotransplantes. Clonado de animales de granja. Sección C: Plantas Transgénicas Cultivo in Vitro: Producción y tecnología del ADN recombinante en la mejora genética vegetal. Transferencia del ADN exógeno y vectores de expresión para células vegetales. Regulación de la expresión de genes en plantas: Agrobacterium tumefaciens. Infección. Plásmido Ti. T – DNA. Genes vir. Regulación. Inducción. Siringonas y flavonoides. Proceso de transferencia. Octopinas, nopolinas. Genes marcadores. Genes quimeras. Promotores y expresión de genes heterólogos en plantas. Plantas transgénicas. Resistencia a plaguicidas, antibióticos e insectos. Clonado de genes. Genes regulados por fitocromos y luz. Aplicaciones de las plantas transgénicas. Aporte de la transformación a la variabilidad genética. Agrobiotecnología y biodiversidad. Cultivos transgénicos de “primera generación” y de “segunda generación”. Sección D: Regulación de la Fijación de Nitrógeno Simbiosis bacteria-leguminosa. Infección y nodulación. Propiedades y estructura del nódulo. Genes. Bacteroides. Nitrogenasas. Purificación. Cinética de la fijación. Sub-unidades. Genes que codifican los distintos polipéptidos. Operón nif y su regulación genética. Genes regulatorios y estructurales. Glutamino sintetasa. Utilización del NH4. Mutantes. Genes fix. Regulación. Interacción con genes Nif. Clonado y secuenciación. Sección E: Biotecnología Alimentaria 9 Nuevas aplicaciones de la Biotecnología en la alimentación. Biotecnología del vino. Biotecnología de productos cárnicos. Biotecnología de alimentos lácteos. Obtención de enzimas y aditivos. Alimentos funcionales. Reglamentación del Código Alimentario Argentino, Regulaciones MERCOSUR. Tecnologías emergentes en la conservación de alimentos. Detección de alimentos transgénicos en la cadena alimentaria (GMO: organismos modificados genéticamente). Detección fenotípica, inmunológica, por métodos de PCR. Análisis cualitativo, semicuantitativo y cuantitativo. Segregación, trazabilidad e identidad preservada para GMO. Entes reguladores (SAGPyA-CONABIA). CAPITULO 5 BIOTECNOLOGIA INDUSTRIAL Sección A: Procesos Biotecnológicos Análisis de un modelo de proceso biotecnológico. Manejo de cepas microbianas. Sistema de expresión de proteínas recombinantes. Extracción y purificación de vil moléculas. Estabilidad y escalonamiento. Principios de la ingeniería Bioquímica y Fermentaciones industriales. Biotransformaciones y producciones microbianas y de cultivo de vegetales. Bio-reactores. Materiales. Métodos. Condiciones de fermentación. Control de calidad del proceso y del producto final. Sección B: Química y Vil combustibles Desarrollo de química biotecnológica. Metodología instrumental del análisis químico aplicado a la biotecnología. Química de las proteínas. Generación de sustancias químicas a partir de la biomasa. Biodiesel., etanol y biogas .Ley Provincial 9.397 y Ley Nacional 26.093. Materiales y biotecnología. CAPITULO 6 BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL Introducción al medio ambiente. Factores que amenazan al medio ambiente. Bioseguridad. Sección A: Agua Introducción al entorno del agua, legislación fundamental, características de las aguas residuales y urbanas, tratamientos básicos de depuración, eliminación biológica de nutrientes. 10 Sección B: El Suelo Introducción al entorno del suelo, legislación fundamental, elementos básicos del suelo. Saneamiento de suelos contaminados. Bioreparación. Sección C: Los residuos Introducción al entorno de los residuos, legislación fundamental. Origen y composición de los distintos tipos de residuos. Eliminación biológica de los mismos. Biorremediación, decontaminación utilizando bacterias degradadoras de hidrocarburos. Producción de energía a través de los sistemas de tratamiento y el biogas. Sección D: La Atmósfera Introducción al entorno de la Atmósfera. Legislación fundamental. Contaminación Biótica y Abiótica. Técnicas y procesos implementados para la purificación de gases. CAPITULO 7 GESTIÓN EMPRESARIAL Sección A: Negocio-Empresa Introducción a la contabilidad para “no financieros”. Empresas de Biotecnología. Concepto. Áreas. Estructura departamental. Perfiles Profesionales. Método de toma de alusiones. Estrategia de outsourcing. Estrategias de comercialización. Empresas Biotecnológicas cotizadas. Mercado de capitales: Capitales. Técnicas de Marketing dirigidas a la opinión pública. Valoración de empresas de biotecnología. Técnicas de valoración. Fusiones, adquisiciones y alianzas. Ventajas competitivas. Selección de proyectos. Métodos de selección. Análisis de mercado. Análisis de costo. Análisis de competencia. Ayudas oficiales. Guía de preparación de propuestas de I + D Latinoamericanas. Ayudas oficiales y modelos de empresas biotecnológicas. Sección B: Financiero Análisis de las necesidades. Financieras en la investigación y desarrollo de los proyectos I + D. Inversión en proyectos de activos intangibles. Criterios de valoración en inversiones. Reducción de riesgo. Prestamos participativos. Bancos de inversión. Salida a bolsa. Sección C: Marketing y Organización comercial Fundamentos de Marketing. Ámbitos de aplicación. Segmentación y posicionamiento. El plan de Marketing. Organización de redes comerciales. Marketing en Internet y comercio electrónico. 11 Sección D: Patentes Legislación sobre patentes. Protección jurídica de inversiones Biotecnológicas. Secreto industrial y no publicación. Royalties. Patentabilidad de los resultados. Sección E: Oratoria Estructura de la expresión oral. Argumentación. Gestión de tiempo en la exposición. Dicción, ritmo y actitud. El lenguaje del cuerpo: gesto, expresión escrita. Técnica de presentación. 12