Extracción "casera" de ADN

Liceo “Domingo Herrera Rivera”
Subsector: Biología
Profesor: Edith Fernández García
NOMBRE:…………………………………………………CURSO………..FECHA……NºGRUPO:____
GUÍA DE LABORATORIO BIOLOGÍA
TEMA: “Extracción de ADN de la mucosa bucal”
OBJETIVO
1. Realizar la extracción del ADN de las células
de descamación del epitelio mucoso del interior
de la boca, poniendo de manifiesto su
estructura fibrilar y el extraordinario grado
de
enrrollamiento,
que
permite
el
empaquetamiento en el núcleo celular de
las larguísimas cadenas de esta molécula.
FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en
el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las
cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y
posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar
(romper) las células mediante un detergente, vaciándose
su contenido molecular en una disolución tampón en la que
se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene
ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en
menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en
cadena más pequeña y separada de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el
ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico,
probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber en una cocina.
La saliva arrastra las células del epitelio que recubre las paredes internas de la boca y que
se están desprendiendo constantemente. La sal común (NaCl), con esa concentración, es un
medio hipertónico que provoca el estallido de las células y los núcleos, quedando libre las
fibras de cromatina. El detergente cumple la misión de formar un complejo con las proteínas
histonas y separarlas del ADN.
MATERIAL NECESARIO (Disponible en el laboratorio)
- Agua mineral
- Alcohol de 96º muy frío - Detergente lavavajillas (Quix)
- Palillo o varilla de vidrio
- Sal común
- Gradilla
- Vasos precipitado
- Tubo de ensayo
- Alcohol de 96º
PROCEDIMIENTO
1. Preparación de solución Tampón o Buffer:
Agregar 20 ml de agua destilada (o mineral) en un vaso precipitado. En el mismo vaso,
añadir dos pizcas de sal común y un par de gotas de detergente lavavajillas.
2. Agregar en un vaso precipitado 20 ml alcohol etílico de 96 º y poner a enfriar lo máximo
que sea posible, por ejemplo en baño de agua con hielo, mientras se realizan los pasos
siguientes.
3. Poner un poco de agua en un vaso y enjuagarse la boca enérgicamente durante al menos
medio minuto para arrastrar el mayor número posible de células de descamación de la
mucosa bucal.
4. Expulsar a lo menos 2 a 5 ml de saliva con las células de la mucosa bucal en el tubo
de ensayo y agregar sobre ésta, 5 ml de solución tampón. Esperar durante unos 10
minutos, removiendo de vez en cuando suavemente para disolver estos componentes
evitando la formación de espuma.
5. A continuación, añadir a la solución anterior suavemente por el tubo de ensayo el
alcohol muy frío dejándola resbalar por la pared del tubo inclinado.
OBSERVACIONES:
 Observarás que el filtrado que aparece es más denso que el alcohol y algo
turbio, se deposita en el fondo del tubo.
 Dejar reposar durante 2 ó 3 minutos sin moverlo en absoluto. El alcohol formará un
sobrenadante por encima de la fase acuosa, en la que se encuentra el ADN en
disolución, provocando que éste precipite.
 Esperar unos minutos mientras el ADN precipita en la interfase alcohol-agua
formando una masa blanquecina que “asciende lentamente formando un
grumo de aspecto algodonoso”.

Tras unos minutos de reposo, el ADN tiende a subir hacia la superficie del
alcohol.
 Entonces podremos recogerlo utilizando una varilla de vidrio, una pipeta Pasteur o
simplemente un palillo. Para ello, se introduce en la masa de ADN y se extrae
suavemente mientras se hace girar entre los dedos.
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ACTIVIDAD FINAL:
1.- Organízate con tu grupo y contesta las siguientes preguntas:
A) ¿Cuál es la ubicación y función del ADN o DNA?
B) ¿El ADN tiene alguna participación en la síntesis de proteínas?
C) ¿Qué contiene la solución Tampón y para qué sirve?
D) ¿Qué le sucedió a las células cuando se le agregó, agua, detergente, sal?
E) ¿Qué le sucede a la preparación obtenida cuando la agregas al final alcohol?
F) ¿Cómo observaste el ADN extraído de tus células epiteliales de la mucosa bucal
(mejilla interna)
2.- Dibuja lo observado en el tubo de ensayo al finalizar la actividad. Rotula lo observado.
3.- Analiza tus resultados y saca conclusiones.
4.- Diseña un experimento para extraer ADN de otras células, ya sea animal o vegetal. (TAREA
DE INVESTIGACIÓN INDIVIDUAL)
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