Inmunofluerescencia

INDICE
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Introducción
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Definición
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Clasificación
o
Aplicaciones
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Penfigo

Penfigoide

Liquen plano

Enfermedad IgA lineal

Eritema multiforme

Lupus
Ventajas y desventajas
DIAGNÓSTICO POR INMUNOFLUORESCENCIA
Introducción
El Ac que reconoce un Ag específico es un miembro de la
familia de proteínas séricas denominadas
inmunoglobulinas. Cada molécula de inmunoglobulina es
un complejo de cuatro polipéptidos que forman una
estructura simétrica a modo de Y, y contiene dos cadenas
idénticas de bajo peso molecular llamadas cadenas ligeras,
y otras dos de alto peso molecular, también idénticas,
llamadas cadenas pesadas. Las cadenas están unidas por
puentes disulfuro. Hacia el segmento amino-terminal cada
cadena presenta una posición variable, que es por donde
reconoce al antígeno y donde tiene lugar la reacción Ag-Ac.
Definición
La inmunofluorescencia es una técnica de inmunoanálisis
basada en la reacción Ag-Ac. Se utiliza para el estudio de
enfermedades ampollosas o inmunitarias. Se emplean Ac
marcados con colorante fluorescente (fluorocromo) que los
tiñe con el objeto de identificar determinados especímenes
clínicos. El colorante fluorescente se conjuga con las
inmunoglobulinas sin alterar la reacción Ag-Ac y permite
visualizar los organismos teñidos bajo un microscopio de
fluorescencia.
Las muestras suelen tomarse mediante una biopsia, un
raspado… y deben ser remitidas a un laboratorio lo antes
posible, en fresco, humedecidas con suero o PBS para
evitar su desecación. Antes y durante su transporte
pueden mantenerse en nevera pero nunca en un
congelador.
La lectura de ambas modalidades de IF se hace con un
microscopio de fluorescencia cuya luz excita al
isotiocianato de fluoresceína haciendo que emita luz
fluorescente de color verde. La observación de luz verde
fluorescente “tiñendo” un objeto del porta indica la
presencia del antígeno en la muestra o de anticuerpos
específicos en el suero, según el caso.
Clasificación
• DIRECTA: sobre un porta depositamos una muestra
que hemos obtenido mediante una biopsia, un
raspado… y en ella buscamos la presencia de un
antígeno determinado. A la muestra le añadimos Ac
monoclonales conjugados con compuestos
fluorescentes (conjugado) y si el Ag está presente en
la muestra se va a unir al conjugado.
•
INDIRECTA: sobre un porta que lleva pegado un
antígeno conocido, añadimos el suero problema. Si
éste contiene anticuerpos específicos, se unen al
antígeno. Posteriormente se añade un suero antiinmunoglobulina humana marcada con isotiocianato
de fluoresceína (conjugado). El conjugado se une a
los anticuerpos específicos.
Aplicaciones
En el diagnóstico de:
 Candidiasis
 Lesiones vesiculoampollosas: penfigo, penfigoide y
eritema multiforme
 Liquen plano
 Lupus
 Patología de glándulas salivales: sialadenitis virales y
parotiditis por citomegalovirus
 Enfermedad IgA lineal
Pénfigo
El pénfigo es una enfermedad ampollar intraepidérmica
rara que se presenta en piel y mucosas. Las ampollas
aparecen de manera espontánea y son relativamente
asintomáticas, pero las lesiones se extienden y las
complicaciones de la enfermedad originan gran toxicidad y
debilidad.
La enfermedad se presenta casi de manera exclusiva en
adultos de edad madura o avanzada y en todas las razas y
grupos étnicos.
Pénfigo en mucosa yugal
Pénfigo en labio inferior
Pénfigo en lengua
Mediante la inmunofluorescencia directa se demostró la
patogenia del pénfigo vulgar. En vivo se observó la unión
de Ac a la sustancia intercelular del queratinocito.
La IgG se deposita en el espacio intercelular y se
encuentra en el 100 % de las muestras de pacientes con
enfermedad activa.
La inmunofluorescencia directa, realizada en la biopsia,
muestra un patrón reticular a nivel del estrato espinoso
debido al depósito de inmunoglobulinas IgG, IgM, C3 y
fibrinógeno. En el 100 % de los casos aparece IgG y en la
mitad de los casos el C3.
Patrón de fijación epitelial intercelular reticular en malla.
Se observan depósitos de anticuerpos fluorescentes en el
contorno de los queratinocitos.
Imagen en panal de abeja correspondiente al penfigo
vulgar.
Penfigoide
Comprende un grupo de enfermedades autoinmunes
adquiridas caracterizadas por formación de ampollas
subepidérmicas causadas por la síntesis de
autoanticuerpos frente a un antígeno común, el antígeno
del penfigoide ampolloso, producido por los queratinocitos
basales. Ocurre en personas de edad avanzada y es poco
frecuente en los jóvenes.
Penfigoide en paladar
Gingivitis descamativa por penfigoide
Depósito lineal de anticuerpos (IgG y C) a lo largo de la
membrana basal.
Patrón de fijación lineal que sigue el trayecto de la
membrana basal, con positividad para la Ig G en un alto
porcentaje y en menor porcentaje para el C3, la Ig M y la Ig
A. Este depósito lineal no es exclusivo de esta entidad.
Liquen plano
El liquen, es una enfermedad, inflamatoria, crónica y
recurrente que afecta a piel y mucosas. Es padecida
aproximadamente por el 2% de la población. Presenta un
pico máximo entre los 35 y 55 años, siendo poco frecuente
en jóvenes y excepcional en niños. Así mismo se ha
observado una prevalencia en el sexo femenino en una
proporción 2:1. De igual manera parece ser un
padecimiento casi exclusivo de la raza blanca y poco
frecuente en la raza negra.
Está caracterizado por papulas blancas agrupadas y
placas reticuladas en mucosa labial, yugal o sublingual.
Ocasionalmente pueden surgir erosiones o úlceras.
Mediante la técnica de inmunofluorescencia directa se
evidencia la existencia de depósitos autoinmunes tanto en
el liquen plano cutáneo como en la cavidad oral.
En algunos casos se puede encontrar marcada positividad
antifibrina de forma lineal en la membrana basal así como
para IgM, IgA, IgG y depósitos globulares a nivel de la
dermis papilar para IgG, IgA, IgM y fibrina. Diferenciamos
esta enfermedad del penfigo y del penfigoide gracias al
elevado acumulo de fibrinogeno a nivel de la membrana
basal.
Enfermedad IgA Lineal (EAL)
La enfermedad por depósito lineal de IgA es un proceso
mucocutaneo crónico e infrecuente de origen autoinmune,
caracterizado por depósitos lineales de IgA a lo largo de la
membrana basal. En la mayor parte de los casos, junto a
las lesiones cutáneas, aparecen lesiones orales y en otras
mucosas. Se han descrito casos en los que la afectación se
limitaba a la mucosa oral. Por ello es importante el
conocimiento de esta patología a la hora de establecer el
diagnóstico diferencial de las enfermedades mucocutaneas
ampollares.
Lesión gingival
Immunofluorescencia directa. Patrón de depósito lineal de
IgA
en la zona de la membrana basal
Eritema multiforme
Reacción aguda que afecta a piel y a mucosas. Mediante
inmunofluorescencia directa se revela la presencia de
depósitos del factor C3 del complemento en la pared
vascular.
Lupus
Es una enfermedad autoinmune crónica. El SI ataca a las
células de organismo y a los tejidos produciendo
inflamación y daño debido a la unión de autoanticuerpos a
las células del organismo y al deposito de complejos Ag-Ac.
La inmunofluorescencia directa revela un patrón granular
lineal subepitelial para IgA, IgG, IgM, C3 y fibrinógeno en
un 75-100 % de los casos.
Ventajas
- Se pueden obtener resultados rápidos.
-No es necesario realizar cultivos.
-Se puede identificar microorganismos específicos en un
grupo mixto.
-Determina la identidad de un organismo muerto.
-Es sensible.
Desventajas
-Costos en reactivo y equipo
-Debe ser realizado por personal muy especializado.
-Los resultados no son 100% específicos (como toda
técnica serológica).
BIBLIOGRAFIA
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Medicina Bucal Práctica
Medicina Oral
Internet