Tema 14. Genética de levaduras
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Tema 14. Genética de levaduras Saccharomyces cerevisiae Formas de división Saccharomyces cerevisiae Schizosaccharomyces pombe Esporulación Ascosporas Formación de basidiosporas Esporulación Ascosporas Saccharomyces cerevisiae Schizosaccharomyces pombe Pseudohifas e hifas Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae, ciclo de vida α a apareamiento a/α cigoto -C -N esporulación Asca con 4 esporas germinación +C +N a α a α Células haploides Saccharomyces cerevisiae Morfogénesis y diferenciación en un organimos unicelular Schizosaccharomyces pombe Saccharomyces cerevisiae Fermentación de la glucosa Saccharomyces cerevisiae Tamaño y composición de las células de S. cerevisiae Célula haploide Volumen (µm3) 70 Composición (10-12 g) • Peso húmedo 60 • Peso seco 15 • DNA 0,017 • RNA 1,2 • Proteína 6 Célula diploide 120 80 20 0,034 1,9 8 S. Cerevisiae: genoma S. cerevisiae cromosomas S. cerevisiae Electroforesis de campo pulsante Centromeros Plásmidos artificiales S. cerevisiae, genoma Número de intrones 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Yeast Fungi Mammal 0 1 >1 Tamaño de los intrones 70 60 50 40 Fungi Verterbrate 30 20 10 0 <100 <200 <1 kbp 1 to 5 >5 Genética de levaduras Genética de levaduras Prueba de dominancia X ts - TS+ - ts / TS+ Cruce del mutante con el silvestre y examen del fenotipo del diploide Prueba de complementación X - ts 1 - ts 2 - ts 1 / ts 2 Cruce de dos mutantes con el mismo fenotipo y examen del fenotipo del diploide Genética de levaduras Prueba de complementación Genética de levaduras Prueba de fenotipos no seleccionados Genética de levaduras 1 2 3 4 5 6 7 8 Análisis de tétradas a b c d ¿Se debe un fenotipo a la mutación de un solo gen? Mapeo de los genes entre sí y respecto al centrómero Creación de dobles mutantes Test de reversión Comprobación de que dos fenotipos se deben a la misma mutación Análisis de tétradas por micromanipulación Análisis de tétradas por micromanipulación Genética de levaduras Análisis de tétradas ¿Segrega el fenotipo 2:2 tras la meiosis? Sí: el fenotipo se debe a la mutación de un solo gen NO: algo más ha ocurrido (más de una mutación no ligadas, mutación en plásmido o en el genoma mitocondrial) Segregación 2:2 Otro tipo de segregación Análisis de tétradas Genética de levaduras Terminología de ligamiento: Ejemplo: Rb x rB R = Resistente a una droga r = sensible B = Blanco b = azul Tres posibles tipos de tétradas espora a b c d Rb Rb rB rB genotipos RB RB rb rb RB Rb rB rb PD NPD T Ditipo parental Ditipo No parental Tetratipo Genética de levaduras Genética de levaduras Segregación durante la meiosis Ditipos parentales Ditipos no parentales Tetratipos rB rb RB rB rb Rb Rb RB rb Rb RB rB No ligados 1: 1: 4 Ligados >1 : <1 Ligado al centrómero 1 : 1: <4 Algunos escrutinios Supresores extragénicos GEN2 gen1 No crece mutagénesis gen2 gen1 Crece Supresores multicopia un ejemplo supresor silvestre mutante X 10 1 X 1 10x 1 Supresores multicopia GEN2 gen1 No crece genoteca 2µ GEN2 gen1 Crece Suprimidos multicopia GEN2 GEN2 GEN1 El plásmido puede perderse Mutagénesis GEN2 gen1 El plásmido no puede perderse Fenotipo por dosis alta No crece en galactosa Ausencia de complementación Suele indicar genes que codifican subunidades de un complejo heteromultimético Mutantes letales sintéticos Mutante viable Segunda mutación Mutante inviable Mutantes letales sintéticos GEN2 GEN1 gen1 posible la segregación mutagénesis gen2 GEN1 gen1 NO es posible la segregación Mutantes letales sintéticos mutX mutX ura3 ade2 mutY ade2 ade3 ADE3 URA3 ade3 ADE3 URA3 GEN X ura3 GEN X UV Colonias blancas Crecimiento en 5’-FOA Colonias rojas sin sectores Sensibles a 5’-FOA Genética molecular de levaduras Aislamiento de alelos por “gap repair” Genética molecular de levaduras Reemplazamiento de genes Genética molecular de levaduras Deleción Genética molecular de levaduras Barajado de plásmidos Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisiae Tipo sexual Interconversión del tipo sexual HMLα 200 kb MATα CEN III E W W Ya Yα ZL ZR X Yα ZL ~700 bp ~600 bp ~750 bp ~300 bp ~250 bp I W 150 kb HMRa HO X Yα Z E X Ya ZR I HO corta en una secuencia de ~18 bp (α-inc) Evento no recíproco. Se pierde el casette Conversión génica, vía reparación de corte de doble cadena Interconversión del tipo sexual α mother daughter α α daughter mother a a α α HO está: a o α pero no a/α cambian Apagado en a/α Sólo las madres cambian Apagado en hijas Encendido al final de G1 Nasmyth (1983) Un linaje de célula madre controlado por los genes SWI Aislamiento del mutante ash1 Genética del ciclo celular •Mutantes cdc •Aislamiento de ciclinas de G1 como supresores de cdc28 por sobrexpresión Regulación del ciclo celular Regulación del ciclo celular Regulación del ciclo celular
