práctica 3 - Universidad de Granada

Facultad de Farmacia
Departamento de Química Física
Universidad de Granada
PRÁCTICA 3
SEPARACIÓN
DE
ASPIRINA,
ACETOFENITIDINA Y CAFEÍNA POR
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
Introducción
• A menudo, la aspirina, acetofenitidina y
cafeína se usan combinados en las
preparaciones analgésicas y antipiréticas.
• La detección e identificación en tales
preparaciones puede hacerse por
cromatografía de capa fina.
Material
•
•
•
•
Recipiente para desarrollo.
Portaobjetos.
Gel de sílice para cromatografía de capa fina.
Disolvente eluyente: mezcla de metanol absoluto, ácido
acético glacial, éter dietílico y benceno en la proporción
volumétrica 1:18:60:120.
• Disoluciones de aspirina, acetofenitidina y cafeína en
cloroformo con concentraciones de 5-10 mg/ml.
• Reactivo revelador: permanganato potásico 0,1N en
ácido sulfúrico 0,05N.
• Disolución mezcla de composición desconocida.
Recipientes para el desarrollo
Cubetas para cromatografía
Parte experimental
Preparación de las placas
• Limpiar dos portaobjetos (25x75 mm) con
disolución de mezcla crómica, o con disolución
jabonosa, enjuagar minuciosamente con agua
destilada y secar
•Preparar una pasta formada por 15 g de gel de sílice G
y 37 ml de agua, agitando bien con una varilla.
•Coger por sus extremos dos portaobjetos, juntos por
sus caras más extensas, y sumergirlos en la pasta
separándolos a continuación. Debe quedar una capa
fina y homogénea sobre cada portaobjetos.
Dejar secar al aire
•Una vez seco el gel al aire, colocar los portaobjetos en
una estufa a 100ºC durante una hora
Indicador de
temperatura
abrir la puerta
Colocar los portaobjetos sobre la bandeja
• Preparación Micropipeta
Abrir el gas para encender el mechero
Abrir la puerta
Girar las llaves de la derecha
cerrado
abierto
Girar la llave a la derecha
abierto
cerrado
• Encender el mechero:
Girar el tornillo del mechero
para dejar salir el gas
Acercar la llama al mechero
Calentar el capilar de vidrio y estirar
Aplicación de la muestra
• Aplicar en una de las placas la muestra de
composición desconocida y una sustancia pura,
y en la otra las dos disoluciones restantes
de las sustancias puras,
Aplicar con una micropipeta una gotita de muestra a
unos 12 mm del extremo de la placa, repitiendo
pequeñas aplicaciones de la disolución en un punto y
dejando que cada incremento se seque antes de la
nueva aplicación. La gota de muestra no debe tener
más de 3 mm de diámetro.
Desarrollo cromatográfico
Se vierte el suficiente líquido eluyente en el
recipiente de desarrollo cromatográfico para
que entre en contacto con el extremo inferior
del portaobjetos, pero sin llegar a tocar las
manchas de la muestra.
Tapar y dejar unos minutos para crear una
atmósfera saturada de fase movil
Colocar los portaobjetos en la cubeta y tapar
•Cuando el frente del disolvente haya avanzado
unos 50 mm, se saca de la cubeta y se rasga
cuidadosamente la superficie del portaobjetos
para indicar la posición del frente del
disolvente. A continuación se deja secar al aire
durante unos minutos para evaporar el
disolvente orgánico.
Frente de la fase movil
Lugar de colocación
de las muestras
Revelado del cromatograma
Para ello colocar el portaobjetos seco en un papel
de filtro.
Pulverizar ese portaobjetos con la disolución de
permanganato potásico mediante el frasco
pulverizador
Se calienta el portaobjetos en una estufa
durante unos minutos.
• Las muestras aparecen como manchas
amarillo-verdosas en un fondo violeta.
•La mancha de la cafeína es muy débil y algunas
veces se distingue más fácilmente observándola por
la parte posterior, es decir, a través del vidrio.
Cálculos
• Determinar el factor de retención (Rf) para las tres
sustancias.
Distancia de la sustancia al origen
Rf = -------------------------------------------------Distancia del eluyente al origen
Dado que, en cromatografía de capa fina, los valores de
Rf son reproducibles para unas condiciones
experimentales fijas, se utilizan los valores de Rf para
localizar la posición de cada componente en la placa
donde se ha separado la mezcla desconocida.
Cálculos del factor de retención ( Rf ) para
cada una de las sustancias separadas
Frente del disolvente
5,0 cm
Nueva posición del compuesto
3.9 cm
Lugar de aplicación de la muestra
Rf =
3, 9
5, 0
= 0,78