DEXAMETASONA, FOSFATO SÓDICO DE O H CH3 HO OH O ONa P H CH3 F ONa O H CH3 H O C22H28FNa2O8P PM: 516,4 2392-39-4 Definición - Fosfato Sódico de Dexametasona es Sal disódica de (11,16) 9-fluoro11,17-dihidroxi-21-(fosfonooxi)-16-metilpregna1,4-dieno-3,20-diona. Debe contener no menos de 97,0 por ciento y no más de 102,0 por ciento de C22H28FNa2O8P, calculado sobre la sustancia libre de agua y alcohol y debe cumplir con las siguientes especificaciones. Caracteres generales - Polvo cristalino blanco o algo amarillo. Inodoro o posee un débil olor a alcohol. Excesivamente higroscópico. Fácilmente soluble en agua; poco soluble en alcohol; muy poco soluble en dioxano; insoluble en cloroformo y éter. Presenta polimorfismo. Sustancias de referencia Dexametasona SR-FA. Fosfato de Dexametasona SR-FA. Fosfato Sódico de Dexametasona SR-FA. Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA. CONSERVACIÓN En envases inactínicos de cierre perfecto. ENSAYOS Identificación A - Aplicar la siguiente técnica cromatográfica. Fase estacionaria - Emplear una placa para cromatografía en capa delgada (ver 100. Cromatografía) recubierta con gel de sílice para cromatografía con indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor. Fase móvil - Butanol, agua y ácido acético glacial (60:20:20). Solución estándar A - Pesar exactamente alrededor de 20 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona SR-FA, transferir a un matraz aforado de 20 ml, disolver y completar a volumen con metanol. Solución estándar B - Disolver 10 mg de Fosfato Sódico de Prednisolona SR-FA en la Solución estándar A y diluir a 10 ml con la misma solución. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 10 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona y transferir a un matraz aforado de 10 ml, disolver y completar a volumen con metanol y mezclar. Revelador - Agregar cuidadosamente y enfriando, 20 ml ácido sulfúrico a 60 ml de alcohol. Dejar enfriar y diluir a 100 ml con el mismo solvente [NOTA: preparar en el momento de su uso]. Procedimiento - Aplicar por separado sobre la placa 5 µl de la Solución muestra y 5 µl de las Soluciones estándar A y B. Dejar secar las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta que el frente del solvente haya recorrido aproximadamente tres cuartas partes de la longitud de la placa. Secar la placa al aire y examinar bajo luz ultravioleta a 254 nm: la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra debe ser similar en tamaño, intensidad y valor de Rf a la obtenida con la Solución estándar A. Pulverizar sobre la placa con Revelador y calentar a 120 °C durante 10 minutos o hasta que las manchas aparezcan. Dejar enfriar y examinar bajo luz natural y bajo luz ultravioleta a 366 nm: la mancha principal en el cromatograma obtenido a partir de la Solución muestra se debe corresponder en tamaño, valor de Rf, color a la luz natural y fluorescencia a la luz ultravioleta que la mancha principal obtenida con la Solución estándar A. El ensayo solo es válido si en el cromatograma obtenido con la Solución estándar B se observan dos manchas, las cuales pueden no estar completamente separadas. B - El residuo de ignición debe responder a los ensayos para Fosfato <410> y para Sodio <410>. Determinación de la rotación óptica <170> Rotación específica: Entre + 74° y + 82°, calculada sobre la sustancia libre de agua y alcohol. Solución muestra: 10 mg por ml, en agua. Determinación del pH <250> Entre 7,5 y 10,5, determinado sobre una solución 1 en 100. Determinación de agua <120> Titulación volumétrica directa. La suma de los porcentajes del contenido de agua y del contenido de alcohol, determinado según se indica en Determinación de alcohol, no debe ser mayor de 16,0 %. Determinación de alcohol <130> Proceder según se indica para Método II; excepto que se debe emplear una columna con fase estacionaria constituida por un copolímero de 4-vinilpiridina y estireno-divinilbenceno y las siguientes modificaciones. Solución del estándar interno - Transferir 1,0 ml de alcohol isopropílico a un matraz aforado de 100 ml, completar a volumen con agua y mezclar. Solución estándar - Preparar una solución 1 en 50 de alcohol en agua. Determinar la densidad relativa a 25 °C (ver 160. Determinación de la densidad relativa) y obtener el porcentaje de C2H5OH por referencia a la Tabla alcoholimétrica en Tablas. Preparación estándar - Transferir 4,0 ml de Solución estándar y 5,0 ml de Solución del estándar interno a un matraz aforado de 10 ml. Completar a volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el cromatógrafo de gases. Preparación muestra - Pesar exactamente alrededor de 500 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 10 ml, agregar 5,0 ml de Solución estándar interno y mezclar hasta disolver. Completar a volumen con agua y mezclar. Inyectar 2 µl de esta solución en el cromatógrafo de gases. Cálculos - Calcular el porcentaje de alcohol en la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensayo por la fórmula siguiente: 4(S/P)(RM/RE) en la cual S es el porcentaje de alcohol en la Solución estándar, P es el peso en g de Fosfato Sódico de Dexametasona empleado en la Preparación muestra y RM y RE son las respuestas del pico de alcohol, relativas al estándar interno, en la Preparación muestra y la Preparación estándar, respectivamente. El contenido de C2H5OH no debe ser mayor de 8,0 %. Fosfato inorgánico Solución estándar de fosfato Disolver 143,3 mg de fosfato monobásico de potasio seco en agua y diluir a 1 litro. Esta solución contiene el equivalente a 0,10 mg de fosfato en cada ml. Reactivo para fosfato A - Disolver 5 g de molibdato de amonio en ácido sulfúrico 1 N para obtener 100 ml. Reactivo para fosfato B - Disolver 350 mg de sulfato p-metilaminofenol en 50 ml de agua, agregar 20 g de bisulfito de sodio, mezclar hasta disolver y diluir con agua a 100 ml. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 25 ml y disolver en una mezcla de 10 ml de agua y 5 ml de ácido sulfúrico 2 N, calentando si fuera necesario. Agregar 1 ml de Reactivo para fosfato A y 1 ml de Reactivo para fosfato B, completar a volumen con agua, mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Solución estándar - En forma similar y en sucesión inmediata, preparar una Solución estándar empleando 5,0 ml de Solución estándar de fosfato en lugar de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona. Procedimiento - Determinar concomitantemente las absorbancias de ambas soluciones, en celdas de 1 cm a 730 nm, con un espectrofotómetro, empleando agua como blanco. La absorbancia de la Solución muestra no debe ser mayor que la de la Solución estándar. No debe contener más de 1,0 % de fosfato. Dexametasona libre Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm × 4,5 mm con fase estacionaria constituida por grupos fenilo químicamente unidos a partículas porosas de sílice de 5 µm de diámetro. El caudal debe ser aproximadamente 1,2 ml por minuto. Solución de trietilamina - Preparar una solución que contenga 7,5 ml de trietilamina en 1 litro de agua. Ajustar a pH 5,4 con ácido fosfórico. Fase móvil - Solución de trietilamina y metanol (74:26). Filtrar y desgasificar. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía). Solución estándar - Disolver una cantidad exactamente pesada de Fosfato de Dexametasona SR-FA en Fase móvil para obtener una solución de aproximadamente 0,5 mg por ml. Preparar una segunda solución disolviendo una cantidad exactamente pesada de Dexametasona SR-FA en una mezcla de metanol y agua (1:1) para obtener una solución de aproximadamente 50 µg por ml. Transferir 10,0 ml de la primera solución y 1,0 ml de la segunda solución a un matraz aforado de 100 ml. Completar a volumen con Fase móvil y mezclar. Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 50 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 100 ml y disolver con Fase móvil. Completar a volumen con Fase móvil y mezclar. Diluir 5,0 ml de esta solución con Fase móvil a 50,0 ml. Solución de aptitud del sistema - Preparar una solución en Fase móvil de aproximadamente 0,05 y 0,02 mg por ml de Fosfato de Dexametasona SR-FA y de Dexametasona SR-FA, respectivamente. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) Cromatografiar la Solución de aptitud del sistema y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la eficiencia de la columna determinada para el pico principal no debe ser menor de 900 platos teóricos; el factor de asimetría para el pico principal no debe ser mayor de 1,6; la resolución R entre los picos de fosfato de dexametasona y dexametasona no debe ser menor de 1,8; la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 1,0 %. Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 20 µl) de la Solución estándar y la Solución muestra, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de dexametasona. Calcular la cantidad de dexametasona (C22H29FO5) en la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensayo. No debe contener más de 1,0 %. Pureza cromatográfica Sistema cromatográfico, Solución reguladora, de acetato, Solución A, Solución B y Fase móvil proceder según se indica en Valoración, excepto que el cromatógrafo se debe programar del siguiente modo: Tiempo Solución A (minutos) (%) 0-3,5 90 Solución B (%) 10 3,5-23,5 9060 1040 23,5-34,5 605 4095 34,5-59,5 5 95 59,5-60 590 9510 Etapa VALORACIÓN Sistema cromatográfico - Emplear un equipo para cromatografía de líquidos con un detector ultravioleta ajustado a 254 nm y una columna de 25 cm × 4,6 mm con fase estacionaria constituida por octilsilano químicamente unido a partículas porosas de sílice de 3 a 10 µm de diámetro. Mantener la temperatura de la columna a aproximadamente 40 °C. El caudal debe ser aproximadamente 1,0 ml por minuto. El cromatógrafo se debe programar del siguiente modo: Tiempo Solución A (minutos) (%) 0-3,5 90 Solución B (%) 10 3,5-24 9060 1040 24-35 605 4095 35-60 5 95 60-60,1 590 9510 60,1-65 90 10 Isocrática Gradiente lineal Gradiente lineal Isocrática Gradiente lineal Solución muestra - Pesar exactamente alrededor de 25 mg de Fosfato Sódico de Dexametasona, transferir a un matraz aforado de 25 ml, disolver en Solución A, completar a volumen con el mismo solvente y mezclar. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) Cromatografiar la Solución muestra y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la resolución R entre el pico principal y el de la impureza más cercana no debe ser menor de 1,8; la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 4,0 %. Procedimiento - Inyectar en el cromatógrafo aproximadamente 15 µl de la Solución muestra, registrar el cromatograma y medir las respuestas de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza individual en la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensayo, en relación a la suma de las respuestas de todos los picos. No debe contener más de 1,0 % de cualquier impureza individual y no más de 2,0 % de impurezas totales. Impurezas orgánicas volátiles <520> Método II. Etapa Isocrática Gradiente lineal Gradiente lineal Isocrática Gradiente lineal Isocrática Solución reguladora de acetato - Disolver 7 g de acetato de amonio en 1 litro de agua, ajustar a pH 4,00 0,05 y mezclar. Solución A - Metanol, agua y Solución reguladora de acetato (7:7:6). Filtrar y desgasificar. Solución B - Metanol y Solución reguladora de acetato (7:3). Filtrar y desgasificar. Fase móvil - Emplear mezclas de Solución A y Solución B según se indica en Sistema cromatográfico. Hacer los ajustes necesarios (ver Aptitud del sistema en 100. Cromatografía). Preparación estándar - Disolver una cantidad exactamente pesada de Fosfato de Dexametasona SR-FA en Solución A para obtener una solución de aproximadamente 0,92 mg por ml. Preparación muestra - Disolver una cantidad exactamente pesada de Fosfato Sódico de Dexametasona en Solución A y mezclar para obtener una solución de aproximadamente 1,0 mg por ml. Aptitud del sistema (ver 100. Cromatografía) Cromatografiar la Preparación muestra y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la resolución R entre el pico de fosfato de dexametasona y el de la impureza más cercana no debe ser menor de 1,0. Cromatografiar la Preparación estándar y registrar las respuestas de los picos según se indica en Procedimiento: la desviación estándar relativa para inyecciones repetidas no debe ser mayor de 2,0 %. Procedimiento - Inyectar por separado en el cromatógrafo volúmenes iguales (aproximadamente 15 µl) de la Preparación estándar y la Preparación muestra, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad de C22H28FNa2O8P en la porción de Fosfato Sódico de Dexametasona en ensayo.