SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE

SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFÍA
EN PAPEL
Materiales
• Mortero.
• Tijeras.
• Espinacas u hojas verdes.
• Embudo con papel de filtro.
• Tubo de ensayo en gradilla.
• Alcohol etílico.
• Éter
• Hexano
• Cápsula de Petri o vaso de precipitados.
• Capilar o micropipeta (cuentagotas en su
defecto).
• Papel de filtro
Introducción Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores:
clorofila-α (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro) y xantofilas
(amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.
Fundamento Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en
disolventes apolares. Esto permite su separación cuando una solución de las mismas
asciende por capilaridad a través de una tira de papel poroso (papel de cromatografía o de
filtro) dispuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico (etanol). Las
más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente al
disolvente a medida que éste asciende, mientras que las menos solubles avanzarán menos
en la tira de papel de filtro. Aparecerán, por tanto, varias bandas de diferentes colores
(hasta siete o más, dependiendo del material utilizado) que estarán más o menos alejados
de la línea base según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas
poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución.
Los pigmentos se reconocen según su color.
Técnica
1. Se trituran en un mortero 2 g de hojas de espinacas frescas, previamente secadas con
papel absorbente, exentas de nervaduras y cortadas con tijera, junto a 2g de MgSO4 y 4 g de
arena durante unos pocos minutos. La pasta obtenida se transfiere a un vaso y se añaden 8
mL de acetona, se envuelve en papel de aluminio (evitar la luz que transforma las clorofilas
en feofitinas) y se agita suavemente durante unos 10 minutos. Una vez obtenido el extracto,
se filtra (lo ideal es una centrifugadora) para eliminar los sólidos recogiéndolo en un tubo de
ensayo protegido con papel de aluminio.
2. Se aplica el extracto, a aproximadamente 1,5 cm del borde inferior del papel, tres toques
con capilar de diámetro no mayor de 2 mm, hasta formar una mancha nítida de 0,5 cm de
diámetro, dejando evaporar el disolvente entre cada aplicación.
3. El papel se suspende dentro de la probeta de 100 mL teniendo la precaución de que el
eluyente solo alcance la zona de aplicación por capilaridad. Se cubre una vez más con papel
de aluminio y se deja desarrollar hasta que el eluyente alcance hasta aproximadamente 1 cm
del borde superior. Una vez retirado se marca hasta donde ha alcanzado el frente, se seca al
aire, se marcan las distintas manchas y se determinan los correspondientes Rfs.
4. Como eluyentes se emplean mezclas hexano-acetato de etilo en proporciones desde 8-1
hasta 12-1.
OBTENCIÓN DE UN COMPLEJO DE Cu DE LA CLOROFILA
Introducción
Cuando los vegetales se someten a cocción prolongada el magnesio del complejo de
clorofila se pierde, siendo sustituido por un hidrógeno. Así la molécula de clorofila se
transforma en feofitina y los vegetales pierden su color verde brillante para pasar a tener un
color verde-oliva pálido. Este experimento lo que hace es transformar la molécula de
clorofila en otra más estable que no se altere con la cocción.
Parte Experimental
Materiales
2 Vasos de precipitados de 100 ml
Espátula
Agitador magnético con calefacción
Reactivos
Guisantes
CuSO4.5H2O
Procedimiento
Se colocan 5 g de guisantes en cada uno de los vasos de precipitados y se mezclan con 50
ml de agua y unas gotas de jabón líquido. A continuación se añade a uno de los vasos de
precipitados una espátula de CuSO4 · 5H2O y se disuelve. Se calientan a ebullición los dos
vasos de precipitados durante 10 minutos. Posteriormente se colocan los guisantes
respectivos en dos vidrios de reloj y se observa la diferencia.
Fundamento
El complejo de Mg+2 de la molécula de clorofila es transformado en otro complejo donde el
Cu+2 ha sustituido al Mg+2. Este último complejo tiene un color verde intense y puede ser
usado como colorante de la comida.