Métodos de diagnóstico prenatal genético

Métodos
de
diagnóstico prenatal genético
Raluca Oancea – MIR 4º -Análisis Clínicos
Usos del diagnóstico prenatal:
„
Para que los padres tomen una decisión
„
Tratamiento clínico
…
…
…
Tratamiento prenatal
Atención del recién nacido
Consideraciones obstétricas
Introducción:
Cariotipo normal – 46XX (mujer)
Cariotipo normal – 46XY (hombre)
Conceptos fundamentales:
‰Gen (segmento de ADN que contiene
la información para sintetizar una cadena peptídica)
‰Genotipo (constitución genética de un individuo)
‰Fenotipo (apariencia, física, bioquímica y fisiológica de un individuo,
que es resultado de la interacción del ambiente y del genotipo)
„
„
Locus genético
Alelos
dominante
recesivo
codominante
… Homocigoto
… Heterocigoto
Enfermedades hereditarias
Malformaciones congénitas
„
Mendeliana. Monogénica (AD,AR,LX)
„
Cromosómica (numéricas, estructurales)
„
Multifactorial
„
Esporádica. Ambiental.
„
Desconocida
(poligénica, predisposición)
Frecuencias de las enfermedades genéticas
„
„
„
„
„
Monogénica
¾ Dominante
¾ Recesiva
¾ Ligada al x
Cromosómica
Enfermedad común
Malformación congénita
Total
0.2 - 0.9 %
0.2 – 0.3 %
0.05 – 0.3 %
0.7 %
0.7 -1 %
2 – 2.5 %
4–5%
Edad de riesgo
>35 años
APP
Screening1ºT
alto riesgo
Hallazgos
ecográficos
Antecedentes
familiares y personales
Técnicas de reproducción asistida
Otras
Consulta Genética ↔ Consejo genético
Decisión por parte de la pareja / Consentimiento informado
¿Pruebas diagnósticas?
NO
SI
Cultivo celular
Bandeo cromosómico
Estudio microscópico
Cariotipo fetal
y/o
FISH (21,13,18,X,Y)
Estudio microscópico
Estudio molecular
Diagnóstico prenatal
No invasivo
Invasivo
3-4 D
Ultrasonidos
Muestra de
sangre materna
10-12 S
14-16 S
+18 S
Diagnóstico previo
a la implantación
Muestra de
vellosidades coriónicas
Amniocentesis
Fetoproteína alfa
Muestra de sangre fetal
Diagnóstico previo
a la implantación
Alt. cromosómicas
Enf. monogénicas
Muestra
de
Amniocentesis
vellosidades
Muestra
decoriónicas
sangre fetal
Técnicas invasivas para diagnóstico prenatal
Biopsia corial
Amniocentesis
Cordocentesis
<1%
<0,5%
1-2%
Etapa más
temprana
Medir AFP
Más experiencia
Resultado ràpido
Estudio DNA
Mosaicismo
Precisión menor
del estudio
Sensibilización Rh Más difícil de
realizar
Cultivo lento
Se cuenta con
poco tiempo para
repetirse
Técnicas utilizadas
Citogénetica convencional
Citogénetica molecular
Cultivo celular
Bandeo cromosómico
Estudio microscópico
Cariotipo fetal
FISH (21,13,18,X,Y)
Estudio microscópico
QF -PCR
Estudio molecular directo e indirecto
Enf. monogénicas
¿CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO?
„
„
„
„
„
„
Cultivo a 37ºC
/subcultivo (añadir
colchicina)
Sacrificio del cultivo
(choque osmótico;
KCL)
Fijación (Carnoy)
Extensión y Tinción
(Giemsa)
Envejecer
Bandeo
Caso 1. Screening de 1º trimestre de alto
riesgo para el Sdr. Down.
Caso 2. Hallazgos ecográficos
Caso 3. Edad de riego(37 años).
Técnicas utilizadas
Citogénetica convencional
Citogénetica molecular
Cultivo celular
Bandeo cromosómico
Estudio microscópico
Cariotipo fetal
FISH (21,13,18,X,Y)
Estudio microscópico
QF -PCR
Estudio molecular directo e indirecto
Enf. monogénicas
Painting/SKY
Cromosomas 13/21
QF - PCR
DIAGNOSTICO GENÉTICO PRENATAL
ESTUDIO MOLECULAR
LÍQUIDO
Directo
AMNÍOTICO (sem. 14-16)
Indirecto
Biopsia corial (sem 12 -14)
EXTRACCIÓN DNA
Secuenciación
Real DTEREMINACIÓN
time quantitativeMUTACIÓN
PCR
DEL SEXO FETAL
(PCR)
STRS
COMPATIBILIDAD
MUESTRA - PACIENTE
Multiplex fluorescent analysis of STRs
Diagnóstico prenatal
No invasivo
Invasivo
3-4 D
Ultrasonidos
Muestra de
sangre materna
10-12 S
14-16 S
+18 S
Diagnóstico previo
a la implantación
Muestra de
vellosidades coriónicas
Amniocentesis
Fetoproteína alfa
Muestra de sangre fetal
Ð
Ð
Muestra de
sangre materna
Ácidos nucleicos fetales
Células fetales
Células fetales en sangre materna :
¿Trofoblastos ?
¿Linfocitos fetales?
¿Eritroblastos fetales?
┌●
┌◙
MACS
FACS
ADN fetal (<0.5%)
ADN materno
Cariotipo masculino normal ,46 XY
Sexo fetal masculino
DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL (Gen SRY)
EN EL PLASMA MATERNO
ENFERMEDADES LIGADAS AL X (HEMOFILIAS)
DETERMINACIÓN DEL SEXO FETAL EN EL PLASMA MATERNO
(Sem. 10)
SEXO
MASCULINO
Biopsia corial/Amniocentesis
para el diagnóstico prenatal
SEXO
FEMENINO
STOP
DETERMINACIÓN DEL RH FETAL
EN EL PLASMA MATERNO
Gestante RH negativa, ¿Incompatibilidad RH?
DETERMINACIÓN DEL RH FETAL EN EL PLASMA MATERNO
(a partir sem. 15)
RH positivo
RH negativo
¿Amniocentesis para la determinación del RH fetal?
En caso de feto Rh negativo: se descarta EHRN, se evitan pruebas invasivas
se evita administración de la gammaglobulina anti D
Marco legal, problemas éticos
El artículo 417 bis del Código Penal
„
«1. No será punible el aborto practicado por un médico, o bajo su dirección, en centro o
establecimiento sanitario, público o privado, acreditado y con consentimiento expreso de la
mujer embarazada, cuando concurra alguna de las circunstancias siguientes:
…
evitar un grave peligro para la vida o
la salud física o psíquica de la embarazada y así conste en
1.ª Que sea necesario para
un dictamen emitido con anterioridad a la intervención por un médico de la especialidad
correspondiente, distinto de aquél por quien o bajo cuya dirección se practique el
aborto.En caso de urgencia por riesgo vital para la gestante, podrá prescindirse del
dictamen y del consentimiento expreso.
…
2.ª Que el embarazo sea consecuencia de un hecho constitutivo de delito de
violación del artículo 429, siempre que el aborto se practique dentro de las doce
primeras semanas de gestación y que el mencionado hecho hubiese sido denunciado.
…
el feto habrá de nacer con graves
taras físicas o psíquicas, siempre que el aborto se practique dentro de
3.ª Que se presuma que
las veintidós primeras semanas de gestación y que el dictamen, expresado con
anterioridad a la práctica del aborto, sea emitido por dos especialistas ser centro o
establecimiento sanitario, público o privado, acreditado al efecto, y distintos de aquél por
quien o bajo cuya dirección se practique el aborto.
„
2. En los casos previstos en el número anterior, no será punible la conducta de la embarazada
aún cuando la práctica del aborto no se realice en un centro o establecimiento público o
privado acreditado o no se hayan emitido los dictámenes médicos exigidos.»
Gracias por
su atención