OBSERVACIÓN DE FENÓMENOS OSMÓTICOS OBJETIVOS - Poner de manifiesto el papel regulador que producen las variaciones de concentración de sustancias, como las sales, sobre el equilibrio osmótico de las células. Reconocer al microscopio los efectos producidos sobre las células (procesos de plasmólisis y turgencia) y compararlos en células animales y vegetales. FUNDAMENTO TEÓRICO Las células se encuentran en un medio isotónico pues la concentración en el interior de la célula es la misma que en el medio. Cuando este equilibrio osmótico se rompe por aumento de concentración de sales o de otras sustancias en uno u otro lado de la membrana celular se produce el paso de agua a través de ella, desde la solución menos concentrada hacia la que lo está más, hasta que se restablece el equilibrio. Vamos a poner de manifiesto este fenómeno sobre dos tipos celulares, glóbulos rojos y células epidérmicas de bulbo de cebolla. Debes recordar que se trata de dos tipos de organización celular distintos, cuya principal diferencia es la pared celulósica de la célula vegetal. MATERIAL Material de Laboratorio Reactivos Material Biológico Microscopio. 3 Portaobjetos y 3 cubreobjetos. Gradilla y 3 tubos de ensayo. 3 Vidrios de reloj. Pipeta de 5 ml. Pinzas y aguja enmangada. Bisturí o cuchilla. Rotulador permanente. Colorante rojo neutro al 1% (preparar 50 ml en frasco cuentagotas). Disolución de NaCl al 6 % (preparar 100 ml). Disolución de NaCl al 0.9 % (preparar 100 ml). Agua destilada. Citrato sódico al 10% u oxalato potásico al 1 % (preparar 50 ml). Sangre de mamífero (cordero, cerdo, etc.) en frasco con cuentagotas. Cebolla. La sangre de un mamífero (cordero, cerdo, etc.) puede obtenerse en mataderos y carnicerías, mezclándola en un frasquito que contenga como anticoagulante citrato sódico al l0 % u oxalato potásico al 1%, en una proporción de una parte por cada diez de sangre. MÉTODO A) Fenómenos osmóticos en glóbulos rojos. 1. Prepara tres tubos de ensayo numerados y deposita en el tubo nº 1, 2 ml de agua destilada; en el nº 2, 2 ml de solución de cloruro sódico al 6%; en el nº 3, 2 ml de NaCl al 0,9 %. Déjalos en la gradilla. 2. Deposita en cada tubo una gota de sangre y dilúyela bien. Transcurridos unos 3 minutos, toma con el cuentagotas una gota de cada tubo y trasládalas a tres portaobjetos que tendrás numerados como los tubos. 3. Coloca un cubre sobre cada muestra con cuidado de no formar burbujas. 4. Observa las preparaciones al microscopio, a los mayores aumentos que te permitan apreciar con claridad la forma de las células. Comienza por la muestra número 3, en la que el aspecto de los glóbulos debe ser normal, pasando después a las otras muestras. B) Fenómenos osmóticos en células de epidermis de bulbo de cebolla. 1. Sirviéndonos de las pinzas y el bisturí, corta un trocito de epidermis interna de un bulbo de cebolla y divídelo en varios fragmentos de aproximadamente 1 cm de lado. 2. Prepara tres vidrios de reloj numerados y deposita en el nº 1 unas gotas de colorante rojo neutro; en el nº 2, unas gotas de la solución de NaCl al 6 %; y en el nº 3, unas gotas de agua destilada. Sumerge dos trozos de epidermis en el nº1. 3. Transcurrido un minuto, extrae uno de los trozos del vidrio nº 1 que contiene el colorante rojo neutro, ligeramente hipotónico respecto del interior celular, y llévalo al vidrio nº 2. 4. Monta el fragmento de epidermis que se queda en el vidrio nº 1 (preparación 1), sobre el portaobjetos con una gota del mismo colorante y coloca sobre él el cubreobjetos apoyándolo sobre un lado y dejándolo caer poco a poco (puedes utilizar las pinzas) como se cierra un libro, con objeto de que no queden burbujas de aire. Observa al microscopio: El colorante debe teñir de rojo suave el interior de las células y en algunas se habrá teñido más intensamente el núcleo. Las membranas deben estar apretadas contra las paredes celulares. 5. Saca el fragmento del vidrio nº 2 y móntalo sobre un portaobjetos y cubreobjetos (preparación 2). Observa cómo se han arrugado las membranas y las vacuolas se han retraído, apareciendo una especie de manchas rosas separadas de las paredes. 6. Retira el cubreobjetos de la preparación 2, empujando lateralmente el cubre con la aguja enmangada, coloca el fragmento de epidermis sobre el vidrio nº 3, con objeto de bañar la muestra en agua destilada. Monta de nuevo la preparación y observa si las células han recuperado su aspecto inicial. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS Dibuja lo observado en cada una de las muestras de glóbulos rojos, anotando los aumentos correspondientes. ¿En qué muestra se encuentran los glóbulos en un medio isotónico? Describe los procesos que han sucedido en las muestras 1 y 2 y di qué nombres reciben, explicado el fundamento de ambos. ¿Qué consecuencias crees que tendría una inyección de agua destilada en la sangre? Explica lo observado en cada muestra de las células de cebolla, anotando los aumentos. Explica y da nombre al proceso osmótico sucedido a las células de cebolla sumergidas en NaCl y a lo ocurrido a continuación al sustituirlo por agua destilada. ¿Qué crees que ocurriría si regáramos las raíces de una planta con agua salada? ¿Qué ocurriría si hubiéramos situado la epidermis en una solución concentrada de glucosa? Si la diferencia de concentraciones externa e interna fuera muy grande, ¿crees que la turgencia terminaría del mismo modo en los glóbulos y en las células de cebolla? ¿Por qué?