k OFICINA ESPAÑOLA DE PATENTES Y MARCAS 19 k kInt. Cl. : A23L 1/211 11 Número de publicación: 2 192 882 7 51 ESPAÑA k TRADUCCION DE PATENTE EUROPEA 12 kNúmero de solicitud europea: 99967812.1 kFecha de presentación: 17.08.1999 kNúmero de publicación de la solicitud: 1 105 004 kFecha de publicación de la solicitud: 13.06.2001 T3 86 86 87 87 k 54 Tı́tulo: Proceso para convertir fitato en fosfato inorgánico. k 73 Titular/es: University of Saskatchewan k 72 Inventor/es: Maenz, David Daniel; k 74 Agente: Dávila Baz, Angel 30 Prioridad: 19.08.1998 GB 9818126 Campus Drive Saskatoon, Saskatchewan S7N 5B5, CA 45 Fecha de la publicación de la mención BOPI: 16.10.2003 45 Fecha de la publicación del folleto de patente: ES 2 192 882 T3 16.10.2003 Aviso: k k Classen, Henry Leonard y Newkirk, Rex Wayne k En el plazo de nueve meses a contar desde la fecha de publicación en el Boletı́n europeo de patentes, de la mención de concesión de la patente europea, cualquier persona podrá oponerse ante la Oficina Europea de Patentes a la patente concedida. La oposición deberá formularse por escrito y estar motivada; sólo se considerará como formulada una vez que se haya realizado el pago de la tasa de oposición (art. 99.1 del Convenio sobre concesión de Patentes Europeas). Venta de fascı́culos: Oficina Española de Patentes y Marcas. C/Panamá, 1 – 28036 Madrid 1 ES 2 192 882 T3 DESCRIPCION Proceso para convertir fitato en fosfato inorgánico. La presente invención se refiere a un proceso para convertir fitato en fosfato inorgánico. En particular, se refiere a un proceso tal que puede adjuntarse a procesos convencionales que se usan para extraer aceite de semillas oleaginosas. El fitato [mioinositol 1,2,3,4,5,6-hexaquis(dihidrógeno fosfato)] se encuentra en grados variables en todas las plantas como forma principal de almacenamiento de fósforo. Entre un 60 y un 80 % del fósforo total de las plantas está en forma de fitato. A menudo, el fitato presente en las plantas se encuentra en forma de complejos con cationes tales como calcio, magnesio o potasio. Algunas veces, los complejos resultantes se denominan fitina. El término fitato, como se usa en este documento, engloba especı́ficamente tales complejos de fitina. Los animales monogástricos digieren el fitato de forma deficiente. Como consecuencia de esto, los animales monogástricos alimentados con una dieta rica en fitato pueden padecer enfermedades causadas por una deficiencia de fósforo. Esto se debe a que el fósforo del fitato no está biodisponible, y la mayorı́a del fitato de la dieta que consume un animal monogástrico pasa a través de su tracto gastrointestinal y se excreta en las heces. Esta excreción es un problema particular en áreas de producción intensiva de ganado, en las que cantidades excesivas de estiércol enriquecido con fósforo pueden ser nocivas desde el punto de vista medioambiental. Otro problema relacionado con la presencia de fitato en los alimentos es que forma complejos con cationes metálicos multivalentes. Esto puede interferir con la biodisponibilidad de tales cationes para los animales y los seres humanos. Esto puede dar lugar a trastornos de deficiencia de metales o a una mineralización ósea inadecuada, especialmente en el caso de los vegetarianos, las personas de edad avanzada y los niños. El fitato también tiene el inconveniente de que inhibe diversas enzimas en el tracto gastrointestinal, incluyendo la pepsina y la tripsina. Además, forma complejos con proteı́nas impidiendo su digestión. Por estas razones, la presencia de fitato en la dieta es, en realidad, anti-nutricional, ya que reduce la digestibilidad de proteı́nas presentes junto con él. Una solución que se ha propuesto para solventar los problemas anteriores es convertir el fitato en fosfato inorgánico. El fósforo presente en el fosfato inorgánico está biodisponible para animales monogástricos. Esto disminuye el contenido de fósforo de las heces, libera cationes previamente complejados por el fitato, promueve la digestión de proteı́nas y previene la inhibición de enzimas gastrointestinales por el fitato. Se sabe que la conversión se realiza tratando el fitato in vitro o in vivo con una enzima fosfatasa denominada fitasa. Los productos de reacción de esta conversión son mioinositol y ortofosfato, denominándose este último fosfato inorgánico en esta memoria descriptiva. La conversión in vivo se realiza añadiendo fi2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2 tasa a los alimentos que contienen fitato. Como resultado, tanto el fitato como la fitasa están presentes conjuntamente en el tracto gastrointestinal donde, al menos en teorı́a, la fitasa puede convertir el fitato en fosfato inorgánico. Sin embargo, esto ha resultado ser sólo parcialmente eficaz, consiguiéndose como máximo una conversión de fitato en fósforo inorgánico no mayor que el 55 %, y normalmente una proporción significativamente menor. Esta conversión incompleta principalmente es una consecuencia de las condiciones dentro del tracto gastrointestinal, que son bastante diferentes de las que son óptimas para la actividad de la fitasa. La temperatura, el pH, la humedad y el contenido mineral del material digerido son tales que la fitasa sólo es parcialmente eficaz en el tracto gastrointestinal durante el tiempo que tarda el material digerido en pasar a su través. Se ha descubierto que la segunda solución, que consiste en someter los alimentos que contienen fitato a una hidrólisis in vitro con fitasa, es más eficaz que la conversión in vivo descrita anteriormente. Esto se debe a que las condiciones de la reacción in vitro pueden adaptarse a las que hacen que la fitasa tenga su actividad óptima. El documento EP-A-0 380 343 describe un ejemplo de un proceso en el que el fitato presente en aislados de proteı́na de soja se convierte en fosfato inorgánico. La conversión se realiza en una solución acuosa usando una fitasa bacteriana a un pH de 2-6 y a una temperatura de 20-60◦C. Sin embargo, se ha descubierto que incluso tales tratamientos todavı́a no son satisfactorios. En primer lugar, la suspensión resultante de estos tratamientos tiene que secarse eliminando las cantidades significativas de agua que están incluidas de forma convencional. Aunque tal secado es una etapa del proceso relativamente sencilla, no obstante, es relativamente caro de realizar debido al volumen de agua que se ha usado de forma convencional. Tal volumen es necesario, en primer lugar, para proporcionar el medio acuoso que necesita la fitasa para ser catalı́ticamente activa y, en segundo lugar, para facilitar la mezcla de la suspensión que, de lo contrario, formarı́a una masa relativamente viscosa. Como resultado de este problema de secado, tales procesos in vitro han tenido un éxito comercial limitado. El segundo problema que se ha encontrado es que la conversión de fitato en fosfato inorgánico en estos procesos in vitro todavı́a está lejos de completarse a menos que se usen concentraciones extremadamente altas de fitasa (que es relativamente cara). Los presentes inventores han descubierto que esto se debe a que el fitato existe en dos formas; una forma susceptible a la fitasa y una forma resistente a la fitasa unida a minerales. Se ha descubierto que la forma resistente a la fitasa es el fitato en forma de un complejo con cationes de metales alcalinotérreos tales como Mg2+ y Ca2+ . Por consiguiente, un primer objeto de la presente invención es proporcionar un proceso comercialmente viable para la conversión in vitro del fitato presente en un alimento en fosfato inorgánico. Un segundo objeto es proporcionar un proceso comercialmente viable en el que aproximadamente un 50 % en moles o más del fitato 3 ES 2 192 882 T3 se convierte en fosfato inorgánico. Un tercer objeto es adjuntar tal proceso a un proceso convencional para extraer aceite a partir de semillas oleaginosas con el fin de proporcionar, como sub-producto, una harina enriquecida con fosfato inorgánico adecuada para incluirse en un pienso para animales o para uso alimentario en general. De acuerdo con un primer aspecto, la presente invención proporciona un proceso para convertir el fitato presente en un alimento en fosfato inorgánico, que comprende las etapas de (i) mezclar mecánicamente una suspensión que comprende (a) 100 partes en peso del alimento que contiene fitato, (b) 60-1000 partes en peso de una mezcla de disolventes que comprende agua y un disolvente orgánico inmiscible con agua que tiene un punto de ebullición de 20-100◦C, constituyendo el disolvente orgánico inmiscible con agua el 20-85 % en peso de la mezcla de disolventes, y (c) una fitasa; y (ii) secar el alimento para retirar el disolvente orgánico. Preferiblemente, en el proceso anterior, la suspensión comprende 150-750 partes en peso de la mezcla de disolventes, más preferiblemente 250600 partes en peso, y aún más preferiblemente 325-475 partes en peso. El proceso anterior es capaz de convertir el fitato presente en un alimento en fosfato inorgánico a un coste reducido en comparación con los procesos in vitro disponibles anteriormente y con un alto rendimiento. La fitasa requiere la presencia conjunta de un contenido significativo de disolvente para catalizar eficazmente la conversión de fitato en fosfato inorgánico. Aunque en la técnica anterior siempre se ha asumido que este disolvente deberı́a ser exclusivamente agua, los presentes inventores sorprendentemente han descubierto que una proporción substancial de este agua puede reemplazarse por un disolvente orgánico inmiscible sin afectar significativamente a la capacidad de la fitasa para catalizar la conversión de fitato en fosfato inorgánico. El uso de un sistema disolvente que incluye un 20-85 % en peso, más preferiblemente un 40-75 % en peso, y aún más preferiblemente un 50-70 % en peso del disolvente orgánico inmiscible con agua puede soportar la actividad de la fitasa, aunque con la ventaja de que el secado de la suspensión después de la conversión catalizada por fitasa en un contenido de humedad aceptable de menos de un 20 % en peso es substancialmente más barato que el secado de una suspensión comparable en la que el disolvente se forma totalmente a partir de agua. Esto se debe a que la mezcla de disolventes usada en la presente invención requiere la entrada de menos energı́a para su evaporación desde la suspensión. Preferiblemente, la suspensión que se mezcla mecánicamente comprende además un agente quelante para cationes de metales alcalinotérreos. Tal agente quelante compite con el fitato por la unión de cationes inorgánicos, en particular cationes alcalinotérreos tales como Ca2+ y Mg2+ . Esta unión de cationes inorgánicos por el agente quelante tiene como consecuencia la conversión del fitato resistente a la fitasa en fitato susceptible a fitasa que, a su vez, entonces puede convertirse en fosfato inorgánico por la fitasa presente conjuntamente. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4 El alimento que puede procesarse de acuerdo con la presente invención puede ser cualquier alimento que contenga fitato. Tales alimentos son los que tı́picamente proceden de plantas. De acuerdo con un aspecto particularmente preferido de la invención, el alimento es uno que se obtiene mezclando semillas oleaginosas trituradas con un disolvente orgánico para extraer el aceite de las semillas oleaginosas y, después separando las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con el disolvente del disolvente que contiene aceite. Éstas son etapas tı́picas que se usan para extraer aceite a partir de, por ejemplo, soja, semillas de girasol, colza, semillas de canola, arroz, cáscara de arroz, maı́z, semillas de algodón, cacahuetes, semillas de cartamo, cocos, semillas de palma, nueces o avellanas, o cualquier derivado procesado del mismo, tal como soja desgrasada. Otras fuentes de fitato que pueden procesarse incluyen granos de cereales tales como trigo, cebada, triticale, centeno, sorgo o avena. Cuando se extrae aceite de las semillas indicadas anteriormente, se mezcla un 10-80 % en peso (más preferiblemente, un 35-60 % en peso) de las semillas oleaginosas trituradas con un 90-20 % en peso (más preferiblemente, un 65-40 % en peso) del disolvente orgánico, siendo éste tı́picamente n-hexano, aunque puede usarse cualquier otro disolvente orgánico inmiscible con agua que tenga un punto de ebullición de 20-100◦C. Después de mezclar vigorosamente, el aceite procedente de las semillas oleaginosas trituradas migra al hexano, tras lo cual, el hexano enriquecido con aceite se separa de las semillas oleaginosas trituradas sobre las que queda un residuo del disolvente de hexano. Las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con disolvente comprenden tı́picamente un 15-65 % en peso del disolvente y un 85-35 % en peso de las semillas oleaginosas, más preferiblemente un 25-50 % en peso del disolvente y un 75-50 % en peso de las semillas oleaginosas trituradas y, aún más preferiblemente, un 35-45 % en peso del disolvente y un 65-55 % en peso de las semillas oleaginosas trituradas. En este campo de la técnica, las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con disolvente algunas veces se denominan hollejo o escamas blancas. En un proceso tı́pico de la técnica anterior para extraer aceite a partir de semillas oleaginosas, las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con disolvente se secarı́an en esta etapa para retirar todos los restos del disolvente orgánico. Esto no ocurre en la presente invención, en la que estas semillas oleaginosas trituradas adulteradas con disolvente se tratan después para convertir el fitato presente en fosfato inorgánico. En particular, se mezclan 100 partes en peso (excluyendo el disolvente) de las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con el disolvente orgánico para formar una suspensión con 10-10.000 unidades de fitasa por kg de semillas oleaginosas trituradas, 30-350 partes en peso (más preferiblemente 100250 partes en peso, aún más preferiblemente 120180 partes en peso) de agua y, opcionalmente, un disolvente orgánico inmiscible con agua adicional que tenga un punto de ebullición de 20-100◦C, que puede ser el mismo disolvente orgánico usado 3 5 ES 2 192 882 T3 en la etapa de extracción de aceite u otro disolvente diferente, de forma que la cantidad total del disolvente orgánico sea de 30-850 partes en peso (más preferiblemente 125-500 partes en peso, y aún más preferiblemente 200-300 partes en peso). Esta suspensión se somete a una mezcla mecánica, por ejemplo, usando un mezclador Hobbart, durante la cual la fitasa convierte el fitato presente en las semillas oleaginosas trituradas en fosfato inorgánico. La suspensión anterior puede incluir además 0,05-10 partes en peso del agente quelante. Como se ha mencionado anteriormente, este agente compite con el fitato por la unión de cationes inorgánicos, convirtiendo de esta forma el fitato resistente a la fitasa en fitato susceptible a la fitasa. El agente quelante es cualquier material que pueda quelar cationes alcalinotérreos. Son tı́picos de tales agentes quelantes ácidos bi-, trio tetra-carboxı́licos tales como ácido ascórbico, ácido ftálico, ácido cı́trico o EDTA. Más preferiblemente, en esta etapa se mezclan 100 partes en peso (excluyendo el disolvente) de las semillas oleaginosas con 0,5-5 partes en peso del agente quelante y 100-1.000 unidades de fitasa por kg de semillas oleaginosas trituradas. Preferiblemente, la suspensión se hace reaccionar en el mezclador donde el fitato se convierte en fosfato inorgánico por la acción catalı́tica de la fitasa durante 5 minutos-2 horas, más preferiblemente 15-90 minutos y aún más preferiblemente 30-75 minutos, y a una temperatura de, preferiblemente, 10-70◦C, más preferiblemente 20-65◦C y aún más preferiblemente 40-60◦C. El pH de la suspensión es preferiblemente 2-8, más preferiblemente 3-6 y aún más preferiblemente 4,5-5,5. La acidez de la suspensión puede deberse a la presencia del agente quelante ácido, aunque puede incluirse, como alternativa o adicionalmente, un ácido mineral tal como HCl o H3 PO4 para ajustar el pH de la suspensión al valor que es óptimo para la actividad de la fitasa. Puede usarse cualquier disolvente orgánico inmiscible con agua siempre que tenga un punto de ebullición de 20-100◦C. No se prefieren disolventes con puntos de ebullición más altos, ya que no es fácil retirarlos de la suspensión por evaporación o ebullición. Naturalmente, el disolvente orgánico elegido tiene que tener su punto de ebullición por encima de la temperatura a la que se realiza la conversión de fitato en fosfato inorgánico. Son disolventes orgánicos tı́picos con el punto de ebullición deseado disolventes alifáticos que tienen al menos 5 átomos de carbono, y son disolventes preferidos pentano, hexano y heptano, isómeros estructurales de los mismos e isooctano. En un aspecto preferido de la invención, la suspensión comprende además uno o más de los siguientes elementos: granos de cereales, harina de cereales, grasa, vitaminas, aminoácidos o una o más enzimas. Los granos de cereales y la harina de cereales contienen fitato, y éste también se convertirá ventajosamente en fosfato inorgánico durante el tratamiento con fitasa. También se prefiere la presencia de una o más enzimas tales como una proteasa, una carboxipeptidasa, una celulasa, una xilanasa, una mananasa, una amilasa, una αgalactosidasa, una pectinasa, una β-glucanasa o 4 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6 una estearasa. Esto se debe a que tales enzimas pueden ayudar a liberar el fitato de los cuerpos de las plantas haciendo que sea más susceptible a la acción de la fitasa y/o actúan sobre otro de los componentes del alimento para mejorar su digestibilidad. En una etapa posterior, el alimento se seca para retirar al menos el disolvente orgánico y, preferiblemente, al menos una parte del disolvente acuoso. Esto puede hacerse por desolventación del alimento, por ejemplo, por calentamiento o secado por aspersión. El producto seco resultante preferiblemente tiene un contenido del disolvente orgánico menor que el 0,1 % en peso, más preferiblemente menor que el 0,04 % en peso, y un contenido de humedad menor que el 20 % en peso, más preferiblemente menor que el 15 % en peso. Después, el alimento enriquecido con fosfato inorgánico resultante puede procesarse en un pienso para animales o en un alimento para seres humanos mezclándolo con uno o más materiales alimentarios adicionales cuando se requiera. El alimento enriquecido con fosfato inorgánico resultante tiene un valor substancialmente mayor para los seres humanos y para todas las especies de animales de producción en comparación con el alimento de partida. En particular, el pienso enriquecido con fosfato resultante puede incorporarse en las dietas de animales de producción tales como pollos, pavos, cerdos, vacas, peces y ovejas. Como los piensos resultantes tienen un contenido de fitato relativamente bajo o insignificante, también pueden tener la ventaja de mejorar la biodisponibilidad de minerales y proteı́nas en los alimentos o piensos en los que se incorporan. En particular, estarán biodisponibles cationes complejados con el agente quelante, ya que las sales resultantes son solubles en agua. También se mejora la biodisponibilidad de las proteı́nas presentes en el alimento, ya que el fitato ya no está disponible para atraparlas en complejos de proteı́nafitato. La fitasa que puede usarse en la presente invención se produce por diversos microorganismos tales como Aspergillus spp., Rhizopus spp. y ciertas levaduras. La fitasa también se produce por diversas semillas de plantas, por ejemplo de trigo, durante la germinación. Las fitasas prefeR , que se puede obteridas incluyen Natuphos ner en BASF de Alemania, Phytase Novo que se R S que puede obtener en Novo Nordisk y Finase se puede obtener en Alko Ltd. La cantidad de fitasa requerida dependerá de la preparación usada, del contenido de fitato del alimento y de las condiciones de reacción. Un especialista en la técnica puede estimar fácilmente la dosificación apropiada. La actividad de la fitasa puede determinarse usando fitato sódico al 1 % (que se puede obtener en Sigma St. Louis, Missouri) como substrato. La reacción enzimática se realiza a un pH de 5,5 y a una temperatura de 40◦ C. La fitasa libera grupos fosfato del fitato. La determinación del fósforo inorgánico liberado se basa en el color formado por la reducción de un complejo de fosfomolibdato. Además de facilitar el secado de la suspensión, la presencia del disolvente orgánico junto con el 7 ES 2 192 882 T3 agua tiene la ventaja de reducir substancialmente la viscosidad total de la suspensión. Se ha descubierto que en ausencia del disolvente orgánico, las proteı́nas solubles en agua presentes en el alimento pueden hacer que la suspensión se vuelva tan viscosa que no pueda realizarse la mezcla mecánica necesaria sin la adición de un exceso significativo de agua. A continuación, la presente invención se explicará con más detalle mediante el siguiente ejemplo. Este ejemplo ilustra cómo puede incorporarse el proceso de la invención en un proceso tı́pico usado para extraer aceite a partir de la colza. Debe tenerse en cuenta que este ejemplo no pretende restringir el alcance de la presente invención de forma alguna. Ejemplo procesamiento de semillas de colza La semilla de colza contiene cuerpos de aceite diminutos dentro de sus células y principalmente se cultiva comercialmente para producir este aceite. Se limpiaron semillas de colza recolectadas, se secaron y se preacondicionaron de la forma conocida. Después, las semillas de colza se descascarillaron por laminación para abrir las cáscaras. Esto se hizo pasando las semillas de colza a través del estrechamiento de un par de rodillos lisos que giraban con velocidades diferentes. La acción de estos rodillos cortó las semillas en escamas mientras se rompı́an algunas de las células de aceite. Después, las escamas se sometieron a un acondicionamiento térmico a aproximadamente 80◦C durante aproximadamente 1 hora, que rompió las células de aceite restantes. Esta etapa también ayudó a mejorar la biodisponibilidad de las proteı́nas en el producto de harina resultante. Después, las escamas acondicionadas, que contenı́an aproximadamente un 42 % en peso de aceite y aproximadamente un 8 % en peso de humedad, se suministraron a una serie de prensas de husillo continuo de baja presión donde se sometieron a un prensado moderado. Esta fase extrajo aproximadamente la mitad del aceite de colza disponible a partir de las semillas de colza. Después, la torta resultante de las prensas de husillo se transportó hasta un extractor de disolventes Rotocell en el que se extrajo el aceite de canola con n-hexano comercial. La torta se introdujo en el extractor de disolventes a través de una unidad hermética al vapor, donde se depositó en una cesta. Se filtró N-hexano por gravedad a través del lecho de la torta de forma que se difundió hacia el interior y saturó los fragmentos de la torta. El aceite de colza migró al disolvente orgánico y, después, el disolvente que contenı́a aceite fluyó a través del tamiz de soporte de la torta hasta el fondo de la cesta para la separación. La presión de vapor del n-hexano limita la temperatura práctica de funcionamiento del extractor de disolventes a aproximadamente 55◦ C. Una temperatura superior aumenta indebidamente la cantidad de vapor de disolvente que tiene que recuperarse. Además, si la temperatura de la torta es el punto de ebullición del disolvente o está cerca de este punto, aparece una fase de vapor en la interfase entre los fragmentos de la torta y el disolvente, que bloquea eficazmente la difusión de 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8 lı́quido. De esta forma, el extractor produjo una fase esencialmente lı́quida que contenı́a aceite de canola y n-hexano y una fase “sólida” de semillas de colza de las que se habı́a extraı́do el aceite adulteradas con n-hexano. En el procesamiento convencional de semillas de colza, las semillas de colza adulteradas con nhexano se desolventarı́an en la siguiente etapa. Sin embargo, de acuerdo con el proceso de la presente invención, después, las semillas de colza se sometieron al tratamiento con fitasa para convertir el fitato presente dentro de las semillas en fosfato inorgánico. Se transformó 1 kg de las semillas de colza de las que se habı́a extraı́do el aceite, trituradas, que contenı́an 0,38 moles de fosfato total en forma de fitato adulterado con 0,3 litros de nhexano, en una suspensión con 750 unidades de R , se obtuvo una fitasa de BASF de Natuphos Alemania, 1 litro de agua y 1,1 litros de n-hexano adicional. La cantidad de fitato presente en las semillas de colza de las que se habı́a extraı́do el aceite puede ensayarse de acuerdo con el método de Tangkongchitr et al. descrito en Cereal Chem., 58, páginas 226-228. Después, la suspensión resultante se cerró herméticamente en un recipiente de plexiglás mantenido a 50◦ C por incubación en un baño de agua y se mezcló continuamente durante 1 hora usando un sistema de amasado con gancho. Al final del perı́odo de incubación, la harina resultante (muestra 1) contenı́a 0,17 moles de fosfato inorgánico, lo cual equivalı́a a una conversión de un 45 % en moles del fitato de partida. Se conocen varios métodos para ensayar el fosfato inorgánico, tales como el método de Pons y Guthrie (Ind. Eng. Chem. Anal. Ed. 18, páginas 184-186). A modo de comparación, se realizó un tratamiento idéntico sobre 1 kg de semillas de colza trituradas, con la excepción de que se omitió la fitasa. La harina resultante (muestra 2) contenı́a sólo 0,019 moles de fosfato inorgánico, lo cual equivalı́a a un porcentaje de conversión de sólo un 5 % en moles basado en el contenido de fitato de partida de las semillas de colza de las que se habı́a extraı́do el aceite. Se trató otro lote de 1 kg de semillas de colza trituradas de la misma forma que la muestra 1 anterior con la excepción de que se añadió ácido cı́trico a la suspensión como agente quelante para dar una concentración final del 0,5 % en peso de ácido cı́trico en la suspensión. El ácido cı́trico redujo el pH de la mezcla a 5,0. Este tratamiento produjo una harina (muestra 3) que contenı́a 0,32 moles de fosfato inorgánico, lo cual equivalı́a a una conversión del 85 % en moles del fitato de partida. La muestra 3 muestra los efectos beneficiosos del tratamiento combinado tanto con el disolvente orgánico como con el agente quelante. De forma similar, pueden conseguirse altos valores de conversión de fitato usando agentes quelantes alternativos tales como EDTA o ácido ftálico. Después, las harinas inorgánicas resultantes enriquecidas con fosfato de las muestras 1 y 3 se sometieron a un tostado de desolventación. La desolventación retira el n-hexano que se recicla a la etapa de extracción de aceite por evaporación desde el alimento junto con una proporción del agua. Después, el alimento seco resultante puede 5 9 ES 2 192 882 T3 para un pienso animal o para un alimento humano. usarse directamente como un suplemento con un alto contenido de fosfato inorgánico y de proteı́nas 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 6 10 11 ES 2 192 882 T3 REIVINDICACIONES 1. Un proceso para convertir el fitato presente en un alimento en fosfato inorgánico, que comprende las etapas de: 5 (i) mezclar mecánicamente una suspensión que comprende: (a) 100 partes en peso del alimento que contiene fitato, (b) 60-1000 partes en peso de una mezcla de disolventes que comprende agua y un disolvente orgánico inmiscible con agua que tiene un punto de ebullición de 20-100◦C, constituyendo el disolvente orgánico inmiscible con agua el 20-85 % en peso de la mezcla de disolventes, y (c) una fitasa; y 10 15 20 (ii) secar el alimento para retirar el disolvente orgánico. 2. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1, en el que el disolvente orgánico inmiscible con agua constituye un 40-75 % en peso de la mezcla de disolventes. 3. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en el que la suspensión comprende además un agente quelante para cationes de metales alcalinotérreos. 4. Un proceso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que el alimento que contiene fitato para incluirse en la suspensión se obtiene mezclando semillas oleaginosas trituradas con el disolvente orgánico inmiscible con agua para extraer aceite de las semillas oleaginosas, y separando las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con el disolvente del disolvente que contiene aceite. 5. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4, en el que se mezcla un 10-80 % en peso de semillas oleaginosas trituradas con un 90-20 % en peso del disolvente orgánico. 6. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 4 o la reivindicación 5, en el que las semillas oleaginosas trituradas adulteradas con disolvente comprenden un 15-65 % en peso del disolvente y un 85-35 % en peso de las semillas oleaginosas trituradas. 7. Un proceso de acuerdo con cualquiera de 25 30 35 40 45 50 55 60 12 las reivindicaciones 4-6, en el que la suspensión se forma mezclando: 100 partes en peso (excluyendo el disolvente presente conjuntamente) de semillas oleaginosas trituradas adulteradas con el disolvente; 10-10.000 unidades de fitasa por kg de semillas oleaginosas trituradas; 30-350 partes en peso de agua; y opcionalmente, un disolvente orgánico adicional de forma que la cantidad total de disolvente orgánico en la suspensión sea de 30-850 partes en peso. 8. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 7, en el que la suspensión comprende además 0,0510 partes en peso de un agente quelante para cationes de metales alcalinotérreos. 9. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 3 o la reivindicación 8, en el que el agente quelante es ácido ascórbico, ácido ftálico, ácido cı́trico o EDTA. 10. Un proceso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4-9, en el que las semillas oleaginosas son semillas de soja, semillas de girasol, semillas de colza, semillas de canola, arroz, cáscaras de arroz, maı́z, semillas de algodón, cacahuetes, semillas de cartamo, cocos, semillas de palma, nueces o avellanas. 11. Un proceso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que la etapa de mezcla (i) se realiza en un mezclador durante 5 minutos2 horas a una temperatura de 10-70◦C y a un pH de 2,0-8,0. 12. Un proceso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que el disolvente orgánico es pentano, hexano o heptano. 13. Un proceso de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, en el que la suspensión comprende además uno o más de los siguientes: granos de cereales, harina de cereales, grasas, vitaminas, aminoácidos o una o más enzimas. 14. Un proceso de acuerdo con la reivindicación 13, en el que la enzima o las enzimas se seleccionan entre una proteasa, una carboxipeptidasa, una celulasa, una xilanasa, una mananasa, una amilasa, una α-galactosidasa, una pectinasa, una β-glucanasa y una esterasa. 15. Un proceso para producir un pienso animal o un pienso humano que comprende las etapas de convertir el fitato presente en un alimento en fosfato inorgánico de acuerdo con cualquier reivindicación anterior, y mezclar el alimento enriquecido con fosfato inorgánico resultante con uno o más productos alimentarios adicionales. NOTA INFORMATIVA: Conforme a la reserva del art. 167.2 del Convenio de Patentes Europeas (CPE) y a la Disposición Transitoria del RD 2424/1986, de 10 de octubre, relativo a la aplicación del Convenio de Patente Europea, las patentes europeas que designen a España y solicitadas antes del 7-10-1992, no producirán ningún efecto en España en la medida en que confieran protección a productos quı́micos y farmacéuticos como tales. 65 Esta información no prejuzga que la patente esté o no incluı́da en la mencionada reserva. 7