manual de técnicas clínicas Cerrar esta ventana para volver a IVIS Este libro está reproducido en el sitio web de IVIS con el permiso de Grupo Asís. IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo. TÉCNICA CLÍNICA Biopsia de lomo Lluís Bosch Puig1 Xavier Puigvert Colomer1 Marc Tor Naudí2 Daniel Villalba Mata2 Joan Estany Illa2 1 Universitat de Girona Departament d’Enginyeria Química, Agrària i Tecnologia Agroalimentària Avda. Lluís Santaló s/n 17071 Girona 2 Universitat de Lleida Departament de Producció Animal Avda. Rovira Roure 191 25198 Lleida La posibilidad de utilizar biopsias para la predicción in vivo de la calidad de la carne fue mencionada por Schmidt et al. (1971). En estos primeros experimentos se utilizaba una metodología de obtención de biopsias en la cual la anestesia era necesaria, siendo además un método de complejidad considerable. Posteriormente Lundström et al. (1973) utilizaron un método de biopsia denominado needle biopsy, recogiendo muestras de grasa y de masa muscular, con el inconveniente de la poca cantidad obtenida con él, insuficiente para realizar análisis de composición. Otro método empleado ha sido el de disparo o shot biopsy (Schöberlein, 1976; Lahucky et al., 1987), con el cual la utilización de anestesia no era necesaria. Actualmente el método de obtención de biopsias in vivo que parece más utilizado es el de muelle evolucionado o spring loaded biopsy (Lahucky et al., 1999). La utilización de biopsias in vivo en porcino ha tenido diferentes finalidades: determinación del potencial glicolítico relacionado con el gen del Rendimiento Napole (Hamilton et al., 2000), determinación del pH, de la conductividad eléctrica, de la capacidad de retención de agua y medidas de color (Kovac, comunicación personal), la predicción del contenido y composición de la grasa intramuscular (Villé et al.,1992 y Baas et al., 1998) o la determinación de la composición de la grasa subcutánea (Isabel et al., 2003), además de distintas aplicaciones con fines de diagnóstico veterinario. Una de las preocupaciones mayores que puede generar la utilización de biopsias en porcino es la relativa al bienestar animal y su comportamiento. En un experimento previo en el que se compararon tres lotes de animales (uno de ellos control y otros dos sometidos a biopsia –el primero con la utilización de anestesia total y el segundo sin anestesia alguna–), no se apreciaron diferencias relevantes, ni en consumo ni en comportamiento, entre los animales control y los sometidos a biopsia, así como entre los anestesiados y los que no lo fueron, a excepción del estrés momentáneo producido durante la extracción de la biopsia o la aplicación del anestésico. Esta observación coincidiría con lo apuntado por los diseñadores del equipo (Kovac, comunicación personal). En 1998, Geverink et al. llevaron a cabo un experimento para determinar el efecto de la biopsia (shot biopsy) sobre el comportamiento, contenido en cortisol salival y frecuencia cardiaca en cerdos de sacrificio. De su estudio se concluye que la realización de biopsias in vivo repercute en un incremento de la frecuencia cardiaca y la concentración de cortisol, siendo no aconsejable la utilización de este sistema en ensayos donde deba medirse el estrés previo al sacrificio. La puesta a punto del método de realización de biopsias se ha llevado a cabo con el fin de determinar el contenido y composición de la grasa intramuscular, así como la composición de la grasa subcutánea. MATERIAL Agradecimientos: A la empresa GESCASER, S.A., por la cesión de los animales. 42 SUIS Nº 15 El material necesario para llevar a cabo la biopsia de lomo es el siguiente: Jaula de inmovilización Spring loaded biopsy BIOTECH PPB-U Cánulas y cargador Rasurador (cuchilla, hojas afeitar, navaja o afeitadora) Jabón con digluconato de clorhexidina al 4% Solución de digluconato de clorhexidina al 5% Aparato de ultrasonidos estándar Aerosol tópico con clortetraciclina Aerosol tópico protector y coadyuvante de la cicatrización Bisturí Tubos de conservación de tejidos Detergente desengrasante, escobilla y cepillos para limpiar las cánulas Cajas metálicas de esterilización con tapa Esterilizador de calor seco Tanque de nitrógeno líquido Nevera y hielo Spray engrasante Este libro está reproducido en el sitio web de IVIS con el permiso de Grupo Asís. IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo. TÉCNICA CLÍNICA DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO SPRING LOADED BIOPSY Las biopsias se realizan con el equipo spring loaded biopsy (PPB-U, Biotech, Nitra, Slovakia), utilizado anteriormente en diversos experimentos (Baas et al., 1998; Ellis et al., 1998; Lahucky et al., 1999 y Hamilton et al., 2000). Este aparato consta de un muelle central recubierto de una camisa cilíndrica metálica; al final del muelle se dispone un eje central al cual se le acopla una cánula metálica formada por un cilindro metálico hueco en su interior. La cánula dispone de un extremo cortante con un mecanismo de cierre y corte. Todo el conjunto se coloca en el interior de un cilindro metálico que actúa de calibrador de la profundidad de penetración y de cierre del mecanismo de la cánula. El conjunto, una vez comprimido el muelle, impulsa la cánula a una velocidad superior a los 300 m/s (Kovac, comunicación personal), la cual atraviesa piel, grasa subcutánea y parte del músculo longissimus dorsi. Una vez cortada y recogida la muestra se procede a su extracción. Los diámetros de cánula utilizables son de 6, 7 y 8 mm. Figura 1. Esquema del aparato spring loaded biopsy. Figura 2. Detalle de la cánula de extracción de biopsias. 1 DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA 1 Tras inmovilizar al animal en una jaula, se localiza la última costilla y se ubica el lugar de biopsia, desplazándonos 5 cm de la columna vertebral. Se lava con agua y jabón con digluconato de clorhexidina al 4% y, seguidamente, se rasura una superficie de aproximadamente 5x5 cm. 2 Se decide la profundidad de biopsia en función del grosor del tocino dorsal del cerdo, utilizando un aparato de ultrasonidos estándar. Este libro está reproducido en el sitio web de IVIS con el permiso de Grupo Asís. IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo. 2 SUIS Nº 15 43 TÉCNICA CLÍNICA DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA (continuación) 3 La zona se desinfecta con una solución antiséptica de digluconato de clorhexidina al 5%. Se procede a cargar y asegurar el spring loaded biopsy, a armar la cánula y a montarla en el aparato, adecuando la profundidad. Se aplica el dispositivo a la zona rasurada, se quita el seguro y se dispara. 4 Una vez retirado el spring loaded biopsy se desinfecta la zona con solución de digluconato de clorhexidina al 5%. Aplicamos aerosol con clortetraciclina y, finalmente, aerosol protector y coadyuvante de la cicatrización. 5 Se desarma y se vacía la cánula; una vez extraída la muestra de biopsia se procede a la separación de grasa subcutánea y músculo con ayuda de un bisturí, envasándose cada fracción en un vial diferente y congelándose en nitrógeno líquido a –196 ºC. Posteriormente se conserva hasta su análisis en un congelador a –80 ºC. 6 Durante 2-3 días se sigue aplicando el aerosol tópico protector y coadyuvante de la cicatrización 2 veces al día. En la imagen se aprecia el estado de la zona de incisión 9 días después de realizar la biopsia. 44 SUIS Nº 15 3 4 5 6 Este libro está reproducido en el sitio web de IVIS con el permiso de Grupo Asís. IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo. TÉCNICA CLÍNICA A TENER EN CUENTA Una vez extraída la muestra de biopsia se limpia la cánula con detergente desengrasante (sumergir las cánulas durante 3-4 minutos). Se frota con un cepillo el interior y se limpia a fondo, lavando con agua limpia, agua destilada, secando y esterilizando (calor seco 20’ a 180 ºC). Las cánulas se almacenan en recipientes estériles (para conservarlas por largo tiempo, una vez limpias se rocían con spray engrasante para proteger los mecanismos y evitar la corrosión; regularmente se procederá a su examen y, si es preciso, afilado). No se han observado daños en el matadero en los animales sometidos a biopsia. Tal como determinó Villé et al. (1992), el tiempo mínimo entre la realización de la biopsia y el sacrificio del animal se estima en 15 días, si bien se acepta un período de 15 a 21 días como correcto. La realización de biopsias 30 días antes del sacrificio de los animales imposibilita la utilización del aerosol tópico con clortetraciclina, con el fin de respetar el período de retirada; en las pruebas llevadas a cabo, la no utilización de este producto no ha ocasionado infecciones locales salvo en contadas ocasiones (1-2%). En la determinación del contenido de grasa intramuscular en animales con un elevado espesor de grasa subcutánea, se pueden obtener predicciones del contenido de grasa intramuscular elevadas debido a la contaminación producida en el momento de penetración de la cánula. Para la determinación del contenido y composición de los ácidos grasos en el músculo longissimus dorsi se lleva a cabo la determinación cuantitativa de los ácidos grasos, que se realiza por cromatografía gaseosa en columna capilar, previa esterificación metílica directa sobre el tejido (Rule, 1997). Los ácidos grasos se cuantifican utilizando como patrón interno el triglicérido del ácido pentadecanoico (C15:0), al no hallarse éste presente en las muestras de carne analizadas. BIBLIOGRAFÍA Baas, T.J., L.L. Christian y G.H. Rouse. 1998. Prediction of muscle quality in live pigs using press biopsy. Final Research Report. Department of Animal Science. Iowa State University. Ellis, M., F. K. McKeith, K. D. Miller y D. S. Sutton. 1998. The effect of the rendement Napole Gene on pork quality. Disponible en http//www.mark.asci.ncsu.edu/Genetics/pork/genmeat.html. Acceso 15 de diciembre de 2000. Geverink, N. A., M. A. W. Ruis, R. Eisen, E. Lambooij, H. J. Blokhuis y V. M. Wiegant. 1999. The effect of shot biopsy on behavior, salivary cortisol and heart rate in slaughter pigs. Journal of Animal Science. 77:1614:1619. Hamilton, D.N., M. Ellis, K. D. Miller, F. K. Mckeith y D. F. Parrett. 2000. Journal of Animal Science. 78:2862-2867. Isabel, B., A. Daza, C.J. López-Bote, V. Serradilla. 2003. Evolución del perfil de ácidos grasos de tejido adiposo subcutáneo de cerdos _ Ibérico, _ Duroc cebados en montanera exclusiva. X Jornadas sobre producción animal, volumen extra, número 24, tomo I: 199-201. Lahucky, R. 1987. Recent findings using the muscle shot biopsy to evaluate meat quality in pigs. Pigs news and Information. 8:291-294. Lahucky, R., G. Kohn, U. Baulain, M. Henning, E. Kallweit, P. Demo, D. Vasicek, N. Pronayova. 1999. Ante-mortem 21 pNMR study of the skeletal muscle metabolism on entire and on a muscle biopsy in Heterozygotes and MH Normal pigs. In: Proceedings 45th International Congress of Meat Science and Technology, Vol.4:330-331. Lundström, K., B. Malmforms y J. Hansson. 1973. Swedish Journal of Agricultural Research., 3. 211. Rule, D. C. 1997. Direct transesterification of total fatty acids of adipose tissue, and of freeze-dried muscle and liver with boron-trifluoride in methanol. Meat Science, 46:23-32. Schmidt, G.R., Zuidam, L. y Sybesma, W. 1971. Biopsy technique and analysis for predicting pork quality. Journal of Animal Sciences. 34:25. Schöberlein, L. 1976. The shot biopsy, a new method of sampling the muscle tissue. Journal of Animal Sciences, 32:457. Villé, H., G. Maes, R. Geers, V. Goedeseels, G. Parduyns, J.V. Bael, S. Janssens, P. Dekempeneer y J. Van-Bael. 1992. A technique for muscle biopsy sampling on pigs to assess intramuscular fat. Meat Science. 32:123-129. Este libro está reproducido en el sitio web de IVIS con el permiso de Grupo Asís. IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo. SUIS Nº 15 45 ADVERTENCIA Los conocimientos técnicos veterinarios están en constante evolución. Las investigaciones recientes y la experiencia clínica, al mismo tiempo que amplían nuestros conocimientos hacen necesarios cambios en los tratamientos y en la terapia farmacológica, por lo que se debe ser cuidadoso en su aplicación. En consecuencia, se recomienda a los lectores que analicen los últimos datos aportados por los fabricantes sobre cada fármaco para comprobar la dosis recomendada, la vía y duración de la administración y las contraindicaciones. Es responsabilidad ineludible del veterinario clínico determinar la dosis y el tratamiento más adecuado para cada paciente, en función de su experiencia y del conocimiento de cada caso concreto. Ni el editor ni el autor asumen responsabilidad por los daños y/o perjuicios que pudieran generarse a personas o propiedades como consecuencia del contenido de esta obra. Reservados todos los derechos. 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