Bio Optica Milano S.p.A. • via San Faustino 58 • I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 • Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 • Fax Vendite +39 02.21.53.000 HIERRO COLOIDAL Método para mucinas ácidas Ref: 180809 - Número mínimo de test realizables ................................... 12 ensayos x 50 ml Tiempo de ejecución ........................................................ 1 hora 30 min. Caducidad del producto .................................................... 1 año Temperatura de almacenamiento ...................................... 15-25 ºC Equipo complementario…. Jarra Coplin 50 ml, probeta graduada y varilla de vidrio APLICACIÓN Método utilizado para mostrar hierro reactivo en secciones de tejidos PRINCIPIO Este método esta basado en la interacción del hierro coloidal con los grupos ácidos a pH bajo. El hierro forma una sal quelada de acido mucopolisacarido; esto se demuestra por la reacción de azul de Prusia: El ferrocianuro potásico reacciona con los iones férricos de la hemosiderina en medio ácido para formar una sal coloreada: Prussiar tiene lugar en forma iónica de la siguiente manera 4Fe+++ + 3K4FE(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12K+ REACTIVOS A- solución acido acético .................................................... 30 B- solución buffer acido ...................................................... 18 C- solución acido coloidal.................................................... 18 D- solución acido acético .................................................... 30 E- Solución acido acético .................................................... 30 F- solución ferrocianuro potásico ......................................... 12 G- ácido hidroclorhidrico 5M ............................................... 50 H- solución rojo rápido nuclear............................................ 30 ml ml ml ml ml x 10 ml ml ml MÉTODO 1- Lavar el porta con agua destilada 2- Ponga en el porta 10 gotas del reactivo A: deje actuar durante 2 minutos 3- Prepare el recipiente de incubación: ponga en el fondo 10 ml de agua destilada, introduzca el porta y ponga sobre el porta 5 gotas del reactivo B y 5 gotas del reactivo C. cierre el recipiente y deje incubar durante 60 minutos. 4- Sin lavar, escurra el portaobjetos y pinga sobre la muestra 10 gotas del reactivo D: deje actuar durante 1 minuto. Escurra el portaobjetos y repita el paso 4. 5- Sin lavar, escurra el portaobjetos y ponga sobre la muestra 10 gotas del reactivo E. deje actuar durante 1 minuto. Escurra el portaobjetos y repita el paso 5 6- Escurra el portaobjetos. Partita IVA - VAT Number: IT06754140157 Tribunale di Milano REA n. 1118800 – c.c.i.a.a. di Milano Bio Optica Milano S.p.A. • via San Faustino 58 • I-20134 Milano Tel. +39 02.21.27.13.1 • Fax Acquisti/Export +39 02.21.54.155 Fax Assistenza/Contabilità +39 02.26.41.74.48 • Fax Vendite +39 02.21.53.000 7- Vierta todo el contenido del recipiente de la botella F en una jarra Coplin de 50 ml. Añadir 30 ml de agua destilada y 4 ml del reactivo G. Agite brevemente y sumerja el portaobjetos durante 10 minutos. 8- Ponga sobre la muestra 10 gotas del reactivo H. Deje actuar durante 5 minutos 9- Lavar en agua destilada 10- Deshidratar en soluciones ascendentes de alcoholes, xileno y montaje RESULTADOS Mucinas ácidas ....................................................................................................azul Núcleos .............................................................................................................. rojo PRECAUCIÓN: Los iones férricos contaminan el vidrio en contacto con el baño de flotación. Para evitarlo, nunca toque la solución con objetos metálicos. Para mayor información sobre los riesgos, y medidas de precaución en la manipulación de los reactivos, están disponibles las fichas de seguridad de los mismos. Partita IVA - VAT Number: IT06754140157 Tribunale di Milano REA n. 1118800 – c.c.i.a.a. di Milano