PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS © Miguel Conesa 3ªed. PRÁCTICA 3 OBSERVACIÓN DE LA PLASMOLISIS EN CÉLULAS VEGETALES DETERMINACIÓN DEL POTENCIAL OSMÓTICO DEL CONTENIDO CELULAR POR EL MÉTODO PLASMOLÍTICO Si tenemos dos disoluciones acuosas de distinta concentración separadas por una membrana semipermeable (deja pasar el disolvente pero no el soluto ), se produce el fenómeno de la ósmosis que sería un tipo de difusión pasiva caracterizada por el paso del agua ( disolvente ) a través de la membrana semipermeable desde la solución más diluida ( hipotónica ) a la más concentrada (hipertónica ), este trasiego continuará hasta que las dos soluciones tengan la misma concentración ( isotónicas o isoosmóticas ). Se entiende por presión osmótica la presión que sería necesaria para detener el flujo de agua a través de la membrana semipermeable. De la misma manera las membranas biológicas separan un medio concentrado de un medio menos concentrado (en condiciones naturales) y su comportamiento es muy parecido a la membrana semipermeable del dibujo. Cuando las concentraciones de los fluidos extracelulares e intracelulares son iguales, ambas disoluciones son isotónicas. Si los líquidos extracelulares aumentan su concentración de solutos se hacer hipertónicos respecto a la célula, y ésta pierde agua, se deshidrata y mueren (plasmolisis). Y si por el contrario los medios extracelulares se diluyen, se hacen hipotónicos respecto a la célula, el agua tiende a entrar y las células se hinchan, se vuelven turgentes (turgescencia), llegando incluso a estallar. 1 PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS © Miguel Conesa 3ªed. Comportamiento de una vacuola celular en tres tipos de concentraciones distintas. Materiales - Hojas de Elodea canariensis - Epidermis del bulbo de cebolla ( Alium cepa) - Solución 2M. de Sacarosa - Rojo neutro al 0.05% - Microscopio - Placas “Petri” Método Se cortan 1 ó 2 mm. del ápice de las hojas de elodea y se montan sobre un portaobjetos con una gota de agua. Posteriormente se repite la experiencia, pero antes de montarlos se introducen en un crsitalizador con una disolución 2M. de sacarosa. Observar las diferencias entre las dos preparaciones bajo el microscopio. Si le experiencia se hace con las cebollas s procederá de la siguiente manera: Se toman los epitelios de la cara externa de los gajos de la cebona y se dejan en una placa “Petri”, donde se teñirán con una solución de rojo neutro durante 15 minutos. Posteriormente se introducirán los tejidos en una placa donde se encuentre una solución 2M de sacarosa. Se dejan los tejidos durante 15 minutos y después se montan para su observación al microscopio. Células plasmolizadas 2 PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS © Miguel Conesa 3ªed. DETERMINACIÓN DEL POTENCIAL OSMÓTICO Al sumergir un tejido vegetal en una solución hipertónica, la mayor parte de las células entrarán en plasmolisis, mientras que si se introducen en una disolución hipotónica pocas o ninguna célula entrará en plasmolisis. Intentaremos buscar el punto de incipiente plasmolisis en el que el tejido vegetal ni gana ni pierde agua. Justamente en este punto el potencial hídrico del tejido es igual al de la solución externa y como la presión de turgencia es cero, también los son los potenciales osmóticos. Generalmente se admite que se produce una “incipiente plasmolisis” cuando el 50% de las células de un tejido están plasmolizadas. Método A partir de una solución 2 M de sacarosa, preparar 20 cc de disoluciones 0.24 M; 0.22M; 0.18M; 0.14M. Posteriormente disolver 10 cc de una solución de colorante rojo neutro al 0.05% en la de sacarosa; añadir agua hasta completar los 20 cc. Cada una de estas disoluciones se dejan en un tubo de ensayo. Para determinar el potencial osmótico se cortan tiras de tejido epidérmico de cebolla, teniendo en cuenta que los trozos deben ser iguales y de 0.5 cm2 de tamaño. En intervalos regulares ir introduciendo los trozos de tejidos en vidrios de reloj con la solución plasmolizante. Una vez transcurridos 40 minutos montar los tejidos en un portaobjetos y contar el número de células plasmolizadas en cada una de las preparaciones. Resultados Completar la tabla adjunta con las observaciones microscópicas: MOLARIDAD Nº CELULAS PLASMOLIZADAS Nº CÉLULAS SIN PLASMOLIZAR % CÉLULAS PLASMOLIZADAS 3 PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA COLEGIO MARAVILLAS © Miguel Conesa 3ªed. Interpretación de los resultados: Con los resultados obtenidos se construye una gráfica, en papel milimetrado,colocando en el eje de ordenadas el % de células plasmolizadas frente a la concentración de las disoluciones plasmolizantes. De esa forma se puede calcular por interpolación gráfica la concentración a la que se expresa el punto de incipiente plasmolisis. Ahora bien, como el potencial osmótico es igual al potencial hídrico menos el potencial de turgor, los resultados se pueden expresar en base al potencial osmótico en vez de la concentración de la disolución plasmolizante. 75% 70% 65% 60% 55% 50% 45% 40% 35% 30% 25% 20% 15% 10% 5% 0,14 0,16 0,18 0.20 0,22 0,24 M 4