LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA – SEMANAS 2 Y 3 GRUPOS

LABORATORIO DE PARASITOLOGÍA – SEMANAS 2 Y 3
GRUPOS 1: 18/setiembre/2015
GRUPO 2: 25/setiembre/2015
PARTE 1
EXAMEN GENERAL DE HECES POR PARÁSITOS
FUNDAMENTO:
El examen general de heces por parásitos brida información cabal y algunas veces es
crucial para orientar el diagnóstico de patologías producidas por parásitos y de otra índole, siendo
muy relevante la descripción de su consistencia y color al inicio del reporte. Así, de acuerdo con la
materia vista en clase, encontramos las disenterías (presencia de deposiciones líquidas o
diarreicas, con muco y sangre), las muestra acintadas que hacen pensar en la presencia de
tumores sólidos cerca o en el recto, las acolias, o sea, las de color blanco, que reflejan un
problema hepático parenquimatoso o de vías biliares y los pacientes que abusan de antiácidos y
de largos tratamientos con inhibidores de la bomba de protones (omeprazol, lanzoprazol,
esomeprazol), y también se pueden observar comensales que no producen enfermedad en el
hospedero (Entamoeba coli, Endolimax nana, Chilomastix mesnili, Retortamonas intestinalis,
Iodamoeba bütschlii).
En el ámbito nacional lo que más se reporta dentro del grupo de los protozoarios son los
comensales y parásitos como Giardia duodenalis, Entamoeba histolytica/E. dispar/E. moshkovskii,
y en orinas se reportan frecuentemente Trichomonas vaginalis.
Dentro del grupo de helmintos lidera las estadísticas Trichiuris trichiura, seguido por
Ascaris lumbricoides y ocasionalmente, con el método de Graham, los oxiuros de la especie
Enterobius vermicularis.
El montaje de las heces se hace en Solución Salina (SS) normal y lugol doble (combinación
de yodo y yoduro de potasio). En la SS se pueden observar los elementos celulares típicos como lo
serían eritrocitos y leucocitos, los cuales se deben reportar haciendo un estimado y anotando
“muchos o abundantes” (como en las verdaderas colitis, diarreas infecciosas o patologías
inflamatorias como Crohn). En cuanto al reporte de comensales y parásitos del grupo de los
protozoarios se debe hacer la distinción entre las formas móviles conocidas como trofozoítos, y las
formas infectantes, diagnósticas no móviles llamadas quistes. Entre los helmintos, el reporte de la
especie es importante aun cuando muchos de ellos se tratan con el mismo medicamento, y en
general, tendríamos hallazgos en heces de huevecillo, larvas y proglótides.
Aunque si bien la presencia de los comensales no es indicativo de enfermedad en el
hospedero, su hallazgo corrobora una baja de la guardia en cuanto a higiene se refiere y, además,
es un indicador indirecto que podría representar la llegada en cualquier momento de un
verdadero parásito, pues si un microorganismo sin factores de virulencia evadió las defensas del
hospedero, suponiendo que su comportamiento y costumbres de aseo frecuente no mejorasen,
habrá más posibilidad de que lo hagan los parásitos.
La razón de ser del lugol es teñir estructuras internas, primordialmente de quistes y
huevecillos para poder mejorar la visualización de núcleos, por ejemplo el número de ellos en la
diferenciación entre Entamoeba coli (4, 8 hasta 16) y Entamoeba histolytica/E. dispar/E.
moshkovskii (2 o 4 máximo, vacuolas de glucógeno y corpúsculos cromatoidales). Los huevecillos
pueden colorearse de café en lugol, que es el color del reactivo, siendo ésta la mejor manera de
reconocerlos en la preparación (tipo de capa vitelina, pared y embriones que pudiese haber
dentro de los huevecillos)
Básicamente se colocarán 3 gotas de SS en un portaobjetos, y a la par otras 3 gotas de
lugol. Una vez homogenizada la muestra, con un palillo de madera se tomará una pequeña
fracción casi equivalente a menos de un tercio de un frijol, y se deslizará en forma de círculos
primeramente en la SS y sin cambiar el palillo, éste igualmente se frotará circularmente en las
gotas de lugol. De hacerlo de manera contraria, se lisarían los elementos celulares y se
contaminaría la preparación en SS.
En imperante hacer la observación primero en la SS, no solo porque en ella observaremos
mucosidad, leucocitos y eritrocitos, sino que además va a darnos el primer indicio de la presencia
de quistes, trofozoítos, huevecillo o larvas móviles. La lámina se enfoca con el lente de franja
amarilla 30X, y si al examinar varios campos se observan pequeños círculos o formas ovoides
refringentes, esto es, de un color verde fosforescente, se pasa al lugol para la confirmación
diagnóstica. Además, para mayor certeza se debe enfocar con el lente de franja azul 40X, y es este
aumento donde se estima la cantidad de leucocitos y eritrocitos como abundantes, pocos, escasos
o no se observan (Incorrecto: No hay, tampoco se reporta Negativo). Hay que ser cuidadosos
cuando se está analizando cualquier muestra al microscopio en cuanto a la direccionalidad con la
que se pasa de un campo microscópico a otro. Un método que garantiza una mejor y mayor
visualización es colocarse en un punto cerca de una de las esquinas del cubreobjetos que tiene la
preparación en SS y, con el rodillo, se mueve la platina hacia la izquierda hasta llegar al otro
extremo del cubreobjetos. Se mueve en línea recta hacia arriba y nuevamente va examinando
campos microscópicos pero esta vez hacia la derecha, y así sucesivamente como en una especie de
zigzag. Si no halló ningún parásito pasa a la preparación en lugol y sigue el mismo procedimiento
hasta que ambas preparaciones hayan sido examinadas desde el extremo inferior izquierdo al
superior derecho. Si no observamos parásitos o comensales en la SS, siempre se debe pasar a la
muestra que se montó en lugol, ya que por experiencia algunas veces en la SS no hallamos formas
diagnósticas pero de pronto las encontramos en el lugol.
El día de la práctica se realizará un quiz con la materia vista en la clase de Introducción al
Laboratorio de Parasitología, disponible en la página web.
Seguidamente pasaremos a montar las muestras de heces, después se realizará la II Parte
que consiste en la determinación de Azúcares Reductores, y finalmente se hará la incógnita
(individual o grupal). Recuerde llevar su bitácora preparada y la materia vista el viernes pasado 11
de setiembre memorizada para el quiz de entrada.
Procedimiento:
1. Coloque 3 gotas de solución salina en el extremo izquierdo de un portaobjetos limpio, y
3 gotas de lugol doble en el extremo derecho de dicho portaobjetos. Recuerde colocarlas
lo suficientemente separadas para que al llegar a los pasos 6, 7 y 8, las soluciones no se
mezclen por cercanía
2. Observe la muestra de heces y anote su consistencia y su color. Para hacer esta
observación utilice el cuadro de consistencias y colores visto en clase, junto con la escala
de Bristol. Recuerde anotar si hay presencia de sangre macroscópica o de muco. Haga la
observación de “muestra francamente disentérica” si coinciden las características vistas
en clase tales como: diarrea + sangre + mucosidad. Anote sus observaciones en bitácora.
3. Utilizando un palillo de madera, homogenice la muestra, revolviendo de forma circular la
muestra.
4. Descarte el palillo para evitar llevar mucha muestra al portaobjetos.
5. Con un nuevo palillo, tome la cantidad de un tercio de frijol de la muestra de heces
homogenizada.
6. Coloque primeramente el palillo con muestra en la solución salina y gire el palillo dentro
de las gotas de salina de forma circular. Debe quedar levemente turbia, ya que si queda
muy grumosa o muy turbia, se dice que la preparación está muy “gruesa” y va a impedir
la correcta observación al microscopio. Si por el contrario queda muy clara, puede sesgar
el diagnóstico parasitario y dar por negativo a un paciente cuya expulsión de quistes o
huevecillos es escasa. Se recomienda hacer unos 5 o 6 giros del palillo untado con heces
tal que quede levemente turbia. Trate de no ocasionar el desprendimiento de grandes
grumos, es decir, a veces al contacto con la salina se desprende el pedacito de muestra y
esto se evita girando el palillo despacio. Lo anterior es importante ya que al colocar el
cubreobjetos sobre grumos de heces grandes quedarán burbujas de aire o quedará
inclinado el cubreobjetos, con una parte levantada haciendo que al observar la muestra
al microscopio sólo se pueda ver la mitad de la preparación en salina.
7. Inmediatamente pase el palillo a las gotas de lugol y repita los giros, unas cinco o seis
veces en forma circular. Los mismos cuidados explicados en el punto anterior debe
tomarlos en cuenta al preparar las heces en lugol.
8. Ponga un cubreobjetos sobre la preparación en salina y otro sobre la preparación en
lugol. Tenga el cuidado de que las preparaciones no se mezclen por continuidad o si por
accidente inclina el portaobjetos.
9. Observe en el microscopio primero la salina en bajo poder (30X) en busca de quistes de
los protozoarios más frecuentes vistos en clase. Muévase de izquierda a derecha y en
línea recta hasta donde termina el cubreobjetos. Suba y muévase de derecha a izquierda
hasta terminar en el borde del cubreobjetos otra vez. Siga repitiendo la misma ruta de
observación. Cada vez que observe lo que considere un quiste, gire el revólver al
siguiente lente de mayor poder (40X) en busca de núcleos o estructuras internas.
10. Siga observando en busca de protozoarios hasta aproximadamente la mitad de la lámina
y luego empiece a buscar los huevecillos de helmintos en el poder de 30X ya que son las
formas más grandes que podrá ver en una determinada muestra.
11. Note si hay leucocitos o eritrocitos en la muestra. Para ello es importante la preparación
en salina.
12. Repita la misma forma de observación de los pasos 9 y 10, pero esta vez en la
preparación con lugol.
13. Si está seguro (a) de que está en presencia de un quiste o huevecillo, llame a su
supervisor para que le aclare si se trata de un “artefacto” o de un verdadero comensal o
parásito.
14. Para todas las muestras observadas y confeccione para cada una de ella un formato de
reporte como los siguientes:
NÚMERO DE MUESTRA: 76
CONSISTENCIA: Formada suave sin muco
COLOR: Café claro
LEUCOCITOS: No se observan / por campo de 400X
ERITROCITOS: No se observan / por campo de 400X
PARÁSITOS: No se observan parásitos
NÚMERO DE MUESTRA: 89
CONSISTENCIA: Semilíquida con muco
COLOR: Pardo claro
LEUCOCITOS: Pocos / por campo de 400X
ERITROCITOS: No se observan / por campo de 400X
PARÁSITOS: Giardia duodenalis (quistes)
IMPORTANTE!: La incógnita se realizará empleando el mismo formato anterior, y cuando se vaya
a realizar se les entregará una plantilla de reporte en blanco que será en la que se consigne la
nota respectiva.
II PARTE
PRUEBA DE BENEDICT PARA AZÚCARES REDUCTORES
FUNDAMENTO:
Cuando se está ante un paciente con diarrea explosiva y con gas, o bien, que refiere que la
manifiesta con dolores o malestar general luego de haber comido alimentos ricos en
carbohidratos, es importante diferenciar entre la etiología infecciosa de la diarrea, es decir, si la
diarrea que presenta es de origen infeccioso o no infeccioso. La Prueba de Azúcares Reductores es
negativa en las diarreas infecciosas, pero es positiva en las diarreas no infecciosas.
El principio de esta prueba es muy básico. Monosacáridos como la glucosa, celobiosa y
fructosa, y disacáridos como la lactosa y la maltosa, tienen en su estructura molecular grupos
reductores libres (C=O) con un –OH anomérico libre, que se comportan como el grupo aldehído
del azúcar (COH). El reactivo de Benedict es una solución de sulfato de cobre en medio alcalino. El
cobre presente en la solución, que es un Cu+2 es reducido por el grupo aldehído a Cu+, el cual, en
medio alcalino se combina con el oxígeno para precipitar en forma de óxido cuproso, Cu2O. La
reacción ocurre al aplicar calor y después de enfriarse a la temperatura ambiental, la intensidad y
el cambio de color son proporcionales a la concentración de carbohidratos presentes en la
defecación.
El significado clínico consiste en que si el paciente no llevó a cabo la absorción de los
carbohidratos en las porciones proximales del intestino delgado, éstos continúan su trayecto a lo
largo de todo el tubo digestivo generando una presión osmótica aumentada intraluminal, lo se
traduciría en el paso de agua hacia la zona de mayor concentración de solutos y por ende el
arrastre de agua, el aumento de la motilidad intestinal, la fermentación de los azúcares por las
bacterias intestinales generando el gas, y entonces se produce la diarrea. Este mecanismo no
ocurre en las diarreas bacterianas, virales ni parasitarias. La separación de las causas de la diarrea
es de gran utilidad para tomar una decisión clínica sobre el tratamiento y la educación nutricional
y cambio de hábitos alimentarios del paciente si fuera el caso.
Materiales:
- Reactivo de Benedict
- Mechero de alcohol
- Tubo de ensayo de vidrio de 10 mL
- Pinzas metálicas sujetadoras de tubos
- Palillos de madera
- Pipetas de vidrio de 5 mL
- Peras de hule
- Gradilla para tubos
Procedimiento:
1. Deposite 3 mL de reactivo de Benedict en un tubo de ensayo.
2. Con un palillo de madera coloque una pequeña cantidad de muestra de heces, casi
equivalente a un pequeño grumo, de tal forma que no coloree el reactivo a ligeramente
verdoso, sino que permanezca celeste, ya que el color debe aparecer hasta que se
caliente a la llama la disolución y ésta se haya enfriado.
3. Sujete el tubo con las pinzas metálicas.
4. Encienda el mechero de alcohol.
5. Incline el tubo hacia otra dirección que no sea hacia usted ni hacia un compañero.
6. Coloque el tubo siempre inclinado en la parte azul de la llama, moviéndolo para que
toda la disolución entre en contacto con la llama, hasta que se formen burbujas que
indiquen que va a empezar a ebullir. Esto puede tardar menos de 2 minutos. En ese
momento retire rápido de la llama para que no salte la solución fuera del tubo.
7. Coloque el tubo en la gradilla hasta que enfríe a temperatura ambiente.
8. Una vez atemperado, observe el color de la solución y reporte NEGATIVO o bien el
número de cruces junto con la concentración de acuerdo a dicho color, utilizando la guía
siguiente:
COLOR DE LA REACCIÓN
REPORTE POR CRUCES
Azul verdoso
Verde con precipitado amarillo
en el fondo
Amarillo tenue con precipitado
amarillo
Anaranjado
Rojo ladrillo
Negativo
+
Concentración de azúcares
mg/dL
100
100 – 500
++
500 – 1400
+++
++++
1400 - 2000
Más de 2000