Uso de la morfología de las colonias para la identificación

Anuncio
Uso de la morfología de las colonias para la
identificación presuntiva de los microorganismos
Capítulo 8
Iván Ferrer Rodríguez, PhD
Catedrático
Identificación de bacterias
 El manejo de la morfología de las colonias con maestría y la interpretación de la
tinción Gram son esenciales en la identificación de bacterias en el área clínica.
 Pueden proveer una identificación presuntiva.
 Pueden aumentar la calidad en el manejo de un paciente.
 Pueden jugar un rol importante en el control de calidad en sistemas automatizados.
2
Observación inicial
 Normalmente se observa la colonia
en un cultivo primario luego de 1824 horas de incubación (overnight).
 Este examen se conoce como
lectura de placas.
 Cuando las bacterias crecen en la
superficie de un medio de cultivo
sólido, permanecen fijas en su
posición y forman masas de muchos
millones de células visibles a simple
vista.
 Evaluación macroscópica.
3
Observación inicial
 Las colonias así formadas varían desde un tamaño diminuto hasta masas de
varios milímetros de diámetro.
 El tamaño, forma, textura, olor y en algunos casos el color son útiles para la
identificación de las bacterias.
 Estas características dependen del medio de cultivo y de las condiciones de
incubación.
 Selección de medios en los SOPs.
4
Observación inicial
 La morfología de las colonias es una de las características básicas de las bacterias
y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificación
preliminar.
 Las características morfológicas más importantes de una colonia bacteriana
aislada sobre un medio de cultivo sólido son:
 Hemólisis
 Color
 Tamaño
 Consistencia
 Forma o margen
 Pigmentación
 Elevación
 Olor
 Densidad
 Primero se examinan los medios selectivos y no selectivos para determinar
5
preliminarmente si es gram-positivo o gram-negativo.
Observación inicial
MacConkey:
 Inhibe los organismo gram-
positivos.
 Inhibe crecimiento de algunos
gram-negativos fastidiosos,
Haemophilus y Neisseria.
 Promueve crecimiento de bacilos
gam-negativos, Enterobacterias.
 Permite diferenciar entre
fermentadores y no fermentadores
de lactosa.
6
Fermentador
No fermentador
Observación inicial
 Segundo, se examinan otros medios
como el Agar sangre (BA) y Agar
Chocolate (CA) que promueven
crecimiento de organismos
fastidiosos.
 Si crece en BA, normalmente crece
en CA.
 Si crece en CA, no necesariamente
crece en BA.
 Algunas especies de Haemophilus y
Neisseria gonorrhoeae NO crecen en
BA, pero crecen en CA.
7
Observación inicial
8
Escherichia / Citrobacter
Klebsiella / Enterobacter
 Colonia rosa y seca.
 Colonia grande, mucoide.
 Figura 8-3.
 Figura 8-4.
Hemólisis
 Algunas bacterias, principalmente los cocos, pueden causar hemólisis de RBC
en un medio de cultivo sólido como el agar sangre.
 Esto se debe a la liberación de unas sustancias llamadas hemolisinas.
 La hemólisis adyacentes a la colonia puede ser intensa o ligera y se observa
como un halo verdoso más o menos claro alrededor de la colonia.
 Es útil en la identificación de las bacterias, en especial ayuda a diferenciar los
diferentes tipos de Streptococcus.
 La hemólisis puede ser alfa, beta o gamma.
9
Hemólisis
Streptococcus B-hemolítico
 La hemólisis total o completa se
denomina hemólisis beta.
10
Hemólisis
Streptococcus pneumonia
 La alfa es una hemólisis parcial de
las RBC y se caracteriza por una
coloración verdosa.
11
Hemólisis
 La ausencia de hemólisis se
denomina hemólisis gamma.
12
Tamaño
 El tamaño de las colonias bacterianas es bastante uniforme en condiciones de
cultivo.
 La visualización del tamaño normalmente se hace a simple vista, aunque se
podrían utilizar lupas o estereoscopios para discernir mejor.
 En términos generales las colonias se describen por comparación como grandes,
medianas o pequeñas, pero sin medirlas.
 Por ejemplo, el tamaño de las colonias de los bgn es mayor al de los cgp y
Staphylococcus tiene mayor diámetro que Streptococcus.
 Las características de una colonia se deben estudiar en el mismo tipo de medio,
13
para evitar las diferencias surgidas por la diferencia en la composición de los
medios de cultivo (SOPs).
Tamaño
 El tamaño de las colonias bacterianas se puede clasificar en las siguientes
categorías:
 Pequeñas o puntiformes: 1 mm de diámetro o menor
 Medianas: hasta 4 mm de diámetro
 Grandes: mayores de 4 mm de diámetro
14
Forma o margen
B. anthracis: medusa head
 La morfología de una colonia viene
dada por su borde y la forma de
elevarse sobre el medio de cultivo.
 El borde puede ser (Figura 8-8):
 Liso o suave
 Áspero o rugoso
 Filamentoso
 Irregular
15
Forma o margen
 Algunas especies de Proteus
producen Swarming en medios
como BA o CA.
 Es como una manta brumosa que se
extiende sobre la superficie del
medio más allá de donde están las
bacterias.
 Puedes ver un ejemplo en la
Figura 8-9.
16
“Swarming “
Elevación y densidad
Elevación
Densidad
 La elevación normalmente se
 La densidad normalmente se
describe como:
 Plano
 Elevado
 Convexa
 Umbilicate – depresión central
 Umbonate
describe como:
 Transparente
 Translucidas – deja pasar luz,
pero no permite ver
 Opaco
 Puedes ver estos ejemplos en la
 Puedes ver estos ejemplos en la
Figura 8-11.
17
Figura 8-12.
Color y pigmentación
Color
Pigmentación
 En términos generales, el color se
 La pigmentación es una
usa para describir un género.
 Puede ser blanco, gris, amarillo.
18
característica intrínseca de las
especies (Figura 8-15).
Consistencia
 La consistencia se determina
tocando la colonia con un asa
estéril.
 Las colonias pueden tener una
consistencia variable:
 Seca y frágil
 Grasienta y cremosa
 Viscosa y pegajosa
 La mayoría de las colonias tienes
19
consistencia mantecosa, siendo fácil
obtener porciones pequeñas de la
misma.
 En algunas ocasiones las colonias
son extremadamente viscosas y
tienden a formar filamentos
mucosos cuando intentamos
retirarlas con el asa.
Olor
Algunos ejemplos:
 Ciertos tipos de bacterias
descomponen los sustratos que
utilizan para su metabolismo
desprendiendo sustancias volátiles
que proporcionan un olor
característico a los cultivos.
 Staphylococcus aureus – medias viejas
 Pseudomonas aeruginosa – olor a
frutas, uvas
 Proteus mirabilis – putrefaccion
20
Crecimiento en caldo
Thioglycollate
Figura 8-19
 Streamers
 Serpentinas
 Vines
 Enredaderas
 Puffballs
 Puffballs
 Scum
 Escoria
 Importante para determinar
arreglos.
21
Hoja de Reporte de Desconocidos
22
Resumen
23
Descargar