Uso de la morfología de las colonias para la identificación presuntiva de los microorganismos Capítulo 8 Iván Ferrer Rodríguez, PhD Catedrático Identificación de bacterias El manejo de la morfología de las colonias con maestría y la interpretación de la tinción Gram son esenciales en la identificación de bacterias en el área clínica. Pueden proveer una identificación presuntiva. Pueden aumentar la calidad en el manejo de un paciente. Pueden jugar un rol importante en el control de calidad en sistemas automatizados. 2 Observación inicial Normalmente se observa la colonia en un cultivo primario luego de 1824 horas de incubación (overnight). Este examen se conoce como lectura de placas. Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio de cultivo sólido, permanecen fijas en su posición y forman masas de muchos millones de células visibles a simple vista. Evaluación macroscópica. 3 Observación inicial Las colonias así formadas varían desde un tamaño diminuto hasta masas de varios milímetros de diámetro. El tamaño, forma, textura, olor y en algunos casos el color son útiles para la identificación de las bacterias. Estas características dependen del medio de cultivo y de las condiciones de incubación. Selección de medios en los SOPs. 4 Observación inicial La morfología de las colonias es una de las características básicas de las bacterias y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificación preliminar. Las características morfológicas más importantes de una colonia bacteriana aislada sobre un medio de cultivo sólido son: Hemólisis Color Tamaño Consistencia Forma o margen Pigmentación Elevación Olor Densidad Primero se examinan los medios selectivos y no selectivos para determinar 5 preliminarmente si es gram-positivo o gram-negativo. Observación inicial MacConkey: Inhibe los organismo gram- positivos. Inhibe crecimiento de algunos gram-negativos fastidiosos, Haemophilus y Neisseria. Promueve crecimiento de bacilos gam-negativos, Enterobacterias. Permite diferenciar entre fermentadores y no fermentadores de lactosa. 6 Fermentador No fermentador Observación inicial Segundo, se examinan otros medios como el Agar sangre (BA) y Agar Chocolate (CA) que promueven crecimiento de organismos fastidiosos. Si crece en BA, normalmente crece en CA. Si crece en CA, no necesariamente crece en BA. Algunas especies de Haemophilus y Neisseria gonorrhoeae NO crecen en BA, pero crecen en CA. 7 Observación inicial 8 Escherichia / Citrobacter Klebsiella / Enterobacter Colonia rosa y seca. Colonia grande, mucoide. Figura 8-3. Figura 8-4. Hemólisis Algunas bacterias, principalmente los cocos, pueden causar hemólisis de RBC en un medio de cultivo sólido como el agar sangre. Esto se debe a la liberación de unas sustancias llamadas hemolisinas. La hemólisis adyacentes a la colonia puede ser intensa o ligera y se observa como un halo verdoso más o menos claro alrededor de la colonia. Es útil en la identificación de las bacterias, en especial ayuda a diferenciar los diferentes tipos de Streptococcus. La hemólisis puede ser alfa, beta o gamma. 9 Hemólisis Streptococcus B-hemolítico La hemólisis total o completa se denomina hemólisis beta. 10 Hemólisis Streptococcus pneumonia La alfa es una hemólisis parcial de las RBC y se caracteriza por una coloración verdosa. 11 Hemólisis La ausencia de hemólisis se denomina hemólisis gamma. 12 Tamaño El tamaño de las colonias bacterianas es bastante uniforme en condiciones de cultivo. La visualización del tamaño normalmente se hace a simple vista, aunque se podrían utilizar lupas o estereoscopios para discernir mejor. En términos generales las colonias se describen por comparación como grandes, medianas o pequeñas, pero sin medirlas. Por ejemplo, el tamaño de las colonias de los bgn es mayor al de los cgp y Staphylococcus tiene mayor diámetro que Streptococcus. Las características de una colonia se deben estudiar en el mismo tipo de medio, 13 para evitar las diferencias surgidas por la diferencia en la composición de los medios de cultivo (SOPs). Tamaño El tamaño de las colonias bacterianas se puede clasificar en las siguientes categorías: Pequeñas o puntiformes: 1 mm de diámetro o menor Medianas: hasta 4 mm de diámetro Grandes: mayores de 4 mm de diámetro 14 Forma o margen B. anthracis: medusa head La morfología de una colonia viene dada por su borde y la forma de elevarse sobre el medio de cultivo. El borde puede ser (Figura 8-8): Liso o suave Áspero o rugoso Filamentoso Irregular 15 Forma o margen Algunas especies de Proteus producen Swarming en medios como BA o CA. Es como una manta brumosa que se extiende sobre la superficie del medio más allá de donde están las bacterias. Puedes ver un ejemplo en la Figura 8-9. 16 “Swarming “ Elevación y densidad Elevación Densidad La elevación normalmente se La densidad normalmente se describe como: Plano Elevado Convexa Umbilicate – depresión central Umbonate describe como: Transparente Translucidas – deja pasar luz, pero no permite ver Opaco Puedes ver estos ejemplos en la Puedes ver estos ejemplos en la Figura 8-11. 17 Figura 8-12. Color y pigmentación Color Pigmentación En términos generales, el color se La pigmentación es una usa para describir un género. Puede ser blanco, gris, amarillo. 18 característica intrínseca de las especies (Figura 8-15). Consistencia La consistencia se determina tocando la colonia con un asa estéril. Las colonias pueden tener una consistencia variable: Seca y frágil Grasienta y cremosa Viscosa y pegajosa La mayoría de las colonias tienes 19 consistencia mantecosa, siendo fácil obtener porciones pequeñas de la misma. En algunas ocasiones las colonias son extremadamente viscosas y tienden a formar filamentos mucosos cuando intentamos retirarlas con el asa. Olor Algunos ejemplos: Ciertos tipos de bacterias descomponen los sustratos que utilizan para su metabolismo desprendiendo sustancias volátiles que proporcionan un olor característico a los cultivos. Staphylococcus aureus – medias viejas Pseudomonas aeruginosa – olor a frutas, uvas Proteus mirabilis – putrefaccion 20 Crecimiento en caldo Thioglycollate Figura 8-19 Streamers Serpentinas Vines Enredaderas Puffballs Puffballs Scum Escoria Importante para determinar arreglos. 21 Hoja de Reporte de Desconocidos 22 Resumen 23