Honorable Cámara de Diputados Provincia de Buenos Aires PROYECTO DE DECLARACION LA HONORABLE CÁMARA DE DIPUTADOS DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES DECLARA Que vería con agrado que el Poder Ejecutivo de la Provincia de Buenos Aires, declare de Interés Provincial, el trabajo de investigación titulado “ANGIOGÈNESIS Y CÉLULAS MADRE EN EL DESARROLLO DE LOS ADENOMAS HIPOFISIARIOS HUMANOS” desarrollado por la Investigadora Dra. Carolina Cristina, Profesora en Química Biológica de la UNNOBA (Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Buenos Aires) Regional Pergamino. FUNDAMENTACIÒN El proyecto de angiogénesis y células madre en adenomas hipofisarios se encuadra en el marco de Promoción de la Ciencia en Medicina, es decir Ciencia Básica cuyos resultados son publicados en revistas internacionales y nacionales y fueron objeto de premios y distinciones. Los tumores o adenomas hipofisarios son los neoplasmas intracraneales primarios más frecuentes. Se consideran benignos por ser no metastásicos, aunque pueden volverse agresivos y crecer en forma expansiva invadiendo el tejido cerebral circundante. La importancia del estudio de la génesis de los adenomas de hipófisis radica en la alta incidencia de estos tumores y la necesidad de hallar marcadores moleculares que pronostiquen el comportamiento tumoral y la posibilidad de desarrollo de recidivas. En este sentido dicho laboratorio tiene estrechos contactos con médicos endocrinólogos que estudian los distintos tipos de adenomas hipofisarios. Se ha generado una colaboración de los investigadores del laboratorio de la UNNOBA con hospitales de la región y de la Ciudad de Buenos Aires, y los conocimientos generados son plasmados en disertaciones y ateneos, intercambiando discusiones sobre los casos enriqueciendo el conocimiento en la especialidad. Asimismo, el presente trabajo se realiza en colaboración con el laboratorio de Regulación Hipofisaria del Instituto de Biología y Medicina Experimental (IBYME-CONICET) de la ciudad de Bs As, instituto de investigación dependiente del CONICET que apoya la actividad de investigación incipiente en la Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Bs As. La UNNOBA es una Universidad joven, por lo que la investigación científica es una actividad de suma importancia para el desarrollo de la misma y en ella se llevan a cabo tesis de alumnos de las distintas carreras quienes se entrenan en distintas técnicas, y pueden acceder de esta manera a una iniciación en investigación científica. En el marco de este conocimiento de la patología hipofisaria, nos proponemos estudiar a través de una nueva línea en el laboratorio, la incidencia de los adenomas hipofisarios subclínicos en la población del Noroeste de la Provincia de Bs As. No tenemos conocimiento de la existencia de estudios científicos de este tipo en la región de modo que nuestro trabajo aportará datos certeros y provechosos respecto a la incidencia y características anátomopatológicas de los adenomas de hipófisis de la región. Por lo expuesto, solicito a los señores Legisladores se sirvan acompañar con su voto la presente iniciativa. UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NOROESTE DE LA PROVINCIA DE BUENOS AIRES (UNNOBA) ANGIOGÉNESIS Y CÉLULAS MADRE EN EL DESARROLLO DE LOS ADENOMAS HIPOFISARIOS HUMANOS Investigador responsable del proyecto: Dra. Carolina Cristina CONTENIDOS INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 6 ANTECEDENTES. MARCO TEÓRICO................................................................ 6 TUMOROGÉNESIS HIPOFISARIA .................................................................. 6 ANGIOGÉNESIS EN TUMORES HIPOFISARIOS ........................................... 7 CÉLULAS MADRE EN PROLACTINOMAS Y OTROS TUMORES HIPOFISARIOS ................................................................................................ 7 RESULTADOS PREVIOS DEL GRUPO DE TRABAJO ........................................ 8 OBJETIVOS DEL PROYECTO............................................................................... 9 INVESTIGADORES PARTICIPANTES ................................................................ 10 UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NOROESTE DE LA PROVINCIA DE BS. AS. (UNNOBA) ......................................................................................................... 10 INSTITUTO DE BIOLOGÍA Y MEDICINA EXPERIMENTAL (IBYMECONICET) ......................................................................................................... 11 METODOLOGÍA A APLICAR ............................................................................... 11 SELECCIÓN DE LOS PACIENTES ............................................................................. 11 OBTENCIÓN DE LAS MUESTRAS .............................................................................. 11 MÉTODOS BIOQUÍMICOS Y MOLECULARES ESPECÍFICOS ........................................... 12 RECURSOS FINANCIEROS PARA EL PROYECTO ........................................... 12 CONSIDERACIONES BIOÉTICAS ....................................................................... 13 BIBLIOGRAFÍA .................................................................................................... 14 INTRODUCCIÓN Los tumores o adenomas hipofisarios constituyen el 10% de los tumores intracraneales; suelen ser benignos, pero causan considerable morbilidad y mortalidad debido a su localización crítica, su secreción hormonal exacerbada y su posible expansión hacia zonas contiguas comprometiendo la visión y otras funciones cerebrales. Dentro de los adenomas hipofisarios, los prolactinomas o adenomas secretores de prolactina son los más frecuentes, reuniendo el 3040% de los casos. Los pacientes con prolactinomas son tratados en forma eficaz con agonistas dopaminérgicos, sin embargo un 15% de ellos son resistentes o intolerantes a la terapia y deben recurrir a la cirugía. ANTECEDENTES. MARCO TEÓRICO TUMOROGÉNESIS HIPOFISARIA Las dos teorías principales que intentan explicar los mecanismos de tumorogénesis hipofisaria confrontan la estimulación hormonal contra un defecto genético intrínseco. Un esquema integrado concilia ambas teorías donde, el evento iniciador sería una alteración genética que transforma a una única célula mientras que las hormonas y factores de crecimiento participarían en la promoción de la proliferación celular (Asa and Ezzat, 1998). La formación de adenomas hipofisarios, por tanto, resultaría de la acumulación de varias alteraciones que son las que van a determinar el fenotipo tumoral. Todavía existen importantes cuestiones por resolver en el tema como por qué la mayoría de estos tumores son de tipo benigno, qué hace que algunos tumores se vuelvan invasivos y más agresivos, o resistentes a dopamina (en el caso de los prolactinomas si fueron sensibles en un comienzo), y el hecho de que menos del 0,5% de ellos produzca metástasis. ANGIOGÉNESIS EN TUMORES HIPOFISARIOS En 1984 Elias y Weiner propusieron que la angiogénesis era necesaria para la inducción y el crecimiento de los prolactinomas generados por estrógenos en ratas Fisher 344 (Elias and Weiner, 1984). El VEGF, factor de crecimiento del endotelio vascular, es el principal mediador del proceso angiogénico en distintos tipos de tumores, sin embargo su rol y el de otros factores angiogénicos como el FGF-2 (factor de crecimiento fibroblástico 2) no ha sido estudiado en profundidad en la tumorogénesis hipofisaria humana. Si bien el grado de vascularización alcanzado por el tejido hipofisario tumoral humano es controvertido, varios estudios han demostrado que la angiogénesis en los adenomas hipofisarios está relacionada con el comportamiento y la respuesta tumoral (Turner et al., 2000c) (Jugenburg et al., 1995;Turner et al., 2000b) (Turner et al., 2000a) (Vidal et al., 2001). Por otra parte se ha sugerido que el FGF-2 podría participar en el proceso de tumorogénesis en algunos adenomas hipofisarios humanos (Ezzat et al., 1995;Zimering et al., 1993). El FGF-2 es un mitógeno potente de muchos tipos celulares y se lo ha identificado tanto en la hipófisis humana normal como tumoral (Li et al., 1992) (Gospodarowicz et al., 1984). CÉLULAS MADRE EN PROLACTINOMAS Y OTROS TUMORES HIPOFISARIOS Las células madre son progenitores multipotentes con capacidad de autorenovación. Han sido descriptas en prácticamente todos los tejidos adultos además del hematopoyético. La hipófisis tiene la capacidad de adaptar la proporción de los distintos tipos de células endócrinas según las demandas hormonales a lo largo de la vida (Melmed, 2003). Parte de esta plasticidad puede entenderse por variaciones en la velocidad de división y muerte de las poblaciones de células altamente diferenciadas, pero existen también evidencias directas de la existencia de progenitores multipotentes capaces de dar origen a estos cambios celulares (Nolan and Levy, 2006) situación compatible con el hecho de que el número de células productoras de hormonas que se dividen en la hipófisis normal es por lejos demasiado pequeño para explicar los grandes cambios observados en las poblaciones celulares ante situaciones determinadas(Levy, 2008). Recientemente se demostró la existencia de células madre en hipófisis de ratones adultos mediante la generación de ratones transgénicos que expresan la proteína verde fluorescente bajo elementos regulatorios del gen de nestina, gen expresado en células madre de distintos tejidos adultos (Gleiberman et al., 2008). Pero, si bien muchos autores suponen la participación de células madre en la génesis de los tumores de hipófisis, no existen al respecto, datos consistentes en la literatura. RESULTADOS PREVIOS DEL GRUPO DE TRABAJO El presente proyecto se desprende de los resultados que obtuvimos con los ratones deficientes en el receptor dopaminérgico D2 (Cristina et al., 2005;Cristina et al., 2006;Cristina et al., 2007a;Cristina et al., 2007b) los cuales, al carecer del receptor D2 para la dopamina, desarrollan prolactinomas y son un buen modelo animal de los prolactinomas humanos resistentes a agonistas dopaminérgicos. En este modelo describimos un aumento en la expresión de VEGF en las hipófisis hiperplásicas e hipertróficas de las hembras knockout (ko) respecto a sus pares wt (Cristina et al., 2005;Cristina et al., 2006) con existencia de grandes zonas de peliosis o glóbulos rojos extravasados en ausencia de una contención de endotelio para las hipófisis ko. La peliosis se ha relacionado en otros tejidos con el aumento de permeabilidad vascular que promueve VEGF (Park et al., 2000). Demostramos también una regulación del VEGF por el sistema dopaminérgico en hipófisis de ratón a través del tratamiento crónico con el antagonista del RD2, haloperidol, en ratones wt (Cristina et al., 2005;Cristina et al., 2006). Esta es la primera vez que se describe el control dopaminérgico de VEGF en la hipófisis y podría ser importante en la acción de los agentes dopaminérgicos. Nosotros creemos que tanto el VEGF como sus receptores podrían convertirse en blancos terapéuticos importantes en los prolactinomas resistentes a Dopamina. Dada la participación de VEGF en el desarrollo de la hiperplasia de lactotropos en las hembras ko para el RD2, aplicamos un tratamiento antiangiogénico in vivo con un inhibidor de VEGF, el VEGF-Trap (receptor soluble de VEGF que lo captura e impide su unión al receptor de membrana). Para el tratamiento se diseñó un modelo de trasplantes de los prolactinomas en ratones. Observamos una disminución en el crecimiento del tumor tratado y una menor tortuosidad y mayor integridad de los vasos sanguíneos en las hipófisis transplantadas y tratadas en comparación con las controles, indicando probablemente que el bloqueo de la acción de VEGF sobre el endotelio modificaría las características de los vasos en hipófisis ko. Asimismo determinamos un menor contenido de prolactina en los tumores tratados con el inhibidor respecto a los inyectados con vehículo (Luque et al., 2008), (Luque et al., 2009). Estos resultados son de gran interés para dilucidar las consecuencias que tendría el bloqueo de la angiogénesis en hipófisis tumorales ya que VEGF podría convertirse en un futuro en el blanco terapéutico para aquellos adenomas de hipófisis que no responden a los tratamientos convencionales. Por otro lado, describimos que en diversos prolactinomas experimentales, así como en macroprolactinomas humanos el gen transformante tumoral hipofisario (pttg) no está regulado por el RD2, y sí por estrógenos (Cristina et al., 2007b). En la patología humana tenemos nuestros primeros resultados en marcadores angiogénicos para un macroprolactinoma extraído en el Hospital Militar de la ciudad de Bs. As. que se volvió resistente a la terapia con agonistas dopaminérgicos (Mallea-Gil et al., 2009) en el que detectamos células adenomatosas mediana y fuertemente positivas para VEGF y un engrosamiento de los vasos sanguíneos tumorales evidenciado por la tinción para CD31. Además contamos con un moderado número de muestras de tumores hipofisarios humanos analizadas, provenientes del Servicio de neurocirugía del Hospital Santa Lucía de la ciudad de Bs. As a partir de las cuales hemos obtenidos datos interesantes volcados en un manuscrito en preparación (ver más adelante aprobación del plan por el Comité de Bioética) OBJETIVOS DEL PROYECTO Nos interesa estudiar en el marco de nuestro proyecto, la participación de FGF2 junto con la de VEGF en la génesis de los adenomas hipofisarios humanos. Para otros tipos de tumores ya se encuentra implementada la terapia antiangiogénica, pero no hay datos sobre estos tratamientos para los adenomas hipofisarios. Asimismo investigaremos el grado de vascularización alcanzado por los tumores a través de la determinación de marcadores de células endoteliales (CD31, CD34 y α-SMA). Apoyados en nuestra experiencia en la patogénesis hipofisaria y en la búsqueda de blancos alternativos (Cristina et al., 2006), exploraremos el nuevo campo de las células madre tumorales ya que analizaremos la existencia e implicancia de células madre en prolactinomas resistentes a dopamina y otros adenomas hipofisarios humanos. Éste es un tema ya abordado para otros tipos de cáncer, habiéndose aislado células madre tumorales en leucemias (Bonnet and Dick, 1997) , mieloma múltiple y también en tumores sólidos como el cáncer de mama (Dontu et al., 2003), de pulmón (Jordan, 2004) y distintos tumores cerebrales (Singh et al., 2003). El estudio de células madre en adenomas hipofisarios resulta interesante al momento de comprender los mecanismos de generación de este tipo de tumores y la falta de respuesta a drogas convencionales en ciertos casos (Massard et al., 2006). Finalmente se procederá al estudio del comportamiento tumoral a partir de la determinación de marcadores de proliferación celular, índices que se analizarán en conjunto con el grado de angiogénesis y existencia de células madre (nestin+) en los tumores hipofisarios. A través del presente proyecto se pretende, por lo tanto, dilucidar los distintos mecanismos que inician y perpetúan la proliferación y función anómala de los lactotropos en los prolactinomas como así también de los demás tipos celulares en el resto de los adenomas hipofisarios. INVESTIGADORES PARTICIPANTES UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NOROESTE DE LA PROVINCIA DE BS. AS. (UNNOBA) Dra. Carolina Cristina: Investigador responsable del proyecto. Agustín Baricalla: Estudiante de Lic. en Genética cursando su tesina de grado bajo la dirección de la Dra. Cristina. La Dra. Cristina ha tomado contacto con los neurocirujanos del Hospital Interzonal Gral. de Agudos ¨Dr. Abrahan F. Piñeyro¨ de Junín y del Hospital Interzonal de Pergamino con el objetivo de hacerles conocer el proyecto e intercambiar ideas relacionadas a la factibilidad y alcances del mismo. Integrantes del grupo colaborador: Dra. Damasia Becú (Investigadora principal del CONICET), Dra. Graciela Díaz (Investigadora adjunta del CONICET) en el INSTITUTO DE BIOLOGÍA Y MEDICINA EXPERIMENTAL de Buenos Aires (IBYME-CONICET) Dra. Silvia Berner, jefa del Servicio de Neurocirugia del HOSPITAL SANTA LUCIA de la Ciudad de Bs As. METODOLOGÍA A APLICAR Selección de los Pacientes Pacientes del Hospital Interzonal General de Agudos de la ciudad de Junín y de la ciudad de Pergamino que sean derivados a cirugía por tumor hipofisario. Se clasificarán los adenomas de acuerdo a la secreción hormonal en somototropinomas, prolactinomas, gonadotropinomas, adenomas secretores de ACTH y adenomas no funcionantes. Además, según su tamaño se clasificarán en microadenomas (< 10 mm) y macroadenomas (> 10mm). El paciente será informado por el cirujano interviniente de los estudios que se realizarán, firmando el respectivo consentimiento (documento anexo al presente plan). La privacidad del paciente será siempre preservada. Obtención de las muestras Durante la cirugía trans-esfenoidal parte del tejido hipofisario tumoral será enviado para su estudio anátomo-patológico (como de rutina lo hace el servicio de Neurocirugía) y parte será fraccionado en buffer Tris- EDTA con inhibidores de proteasas para determinación de factores angiogénicos, marcadores del endotelio vascular, de proliferación celular y proteínas expresadas por células madre por las técnicas de Western blot y/o ELISA. Estas fracciones de congelarán de manera inmediata a -20˚C para su adecuada conservación hasta el momento de su procesamiento. Otra porción se recogerá en formalina para estudios de inmunohistoquímica (IHQ). En este caso las muestras se conservan a 4˚C y en un plazo no mayor a una semana se procederá a su deshidratación para la inclusión en parafina. Además, si el tamaño del tumor lo permite, se reservará - Una fracción en Trizol para extracción de ARN y análisis del ARNm de los factores angiogénicos. - Otra porción se colocará en medio de cultivo para su inmediato procesamiento y obtención de células dispersas in vitro para estudio de la proliferación celular y secreción de hormonas en respuesta a los factores angiogénicos. Asimismo se guardará una alícuota de las muestras de sangre periférica que de rutina se toman como control pre-quirúrgico, y una alícuota de las muestras de sangre que se toman para control de la prolactina/u otras hormonas al mes de la cirugía. El procedimiento no involucrará extracciones adicionales de sangre más allá de las realizadas de rutina. En sangre se determinarán VEGF por Radioinmunoensayo (RIA) o ELISA, y FGF-2 por ELISA. De lo expuesto anteriormente se comprende que no hay riesgo posible para el paciente, ya que se trabajará sobre el material obtenido en la cirugía, en lugar de proceder a su descarte. Los sujetos están en libertad de abstenerse de participar y son libres de retirar su consentimiento en cualquier momento del estudio. Métodos bioquímicos y moleculares específicos La Metodología de RT-PCR, Western blot, RIA, ELISA e IHQ fue descripta por nosotros en detalle en nuestros trabajos previos (Cristina et al. 2005; Gonzalez Iglesias et al. 2000; Gonzalez Iglesias et al. 1999; Suarez et al. 2004; DiazTorga et al. 2002). Para la realización del presente proyecto se utilizarán anticuerpos específicos para muestras humanas, y se diseñarán los primers para PRC correspondientes a la secuencia de VEGF y nestin humanos. Las muestras para inmunohistoquímica de hipófisis controles se obtendrán en Labvision Co, o en Abcam (UK). RECURSOS FINANCIEROS PARA EL PROYECTO -Subsidio ANPCYT Jóvenes Investigadores PICT 2008 Nro 1326. Otorgado Dic 2009. (Dra. Carolina Cristina Investigador responsable UNNOBA) Proyecto en colaboración UNNOBA-IBYME CONICET. - Subsidio de la Fundación Florencio Fiorini para Investigación en Cs. Biomédicas 2010. - Se presentó el proyecto a la Convocatoria Interna para Subsidios de Investigación de UNNOBA 2010. No existe relación alguna entre los investigadores y empresas farmacéuticas privadas para el desarrollo del proyecto. CONSIDERACIONES BIOÉTICAS A) Este plan sigue los lineamientos del “MARCO ÉTICO DE REFERENCIA PARA LAS INVESTIGACIONES BIOMÉDICAS”, publicado por el CONICET (RESOLUCION D N° 1047/05), en todos sus puntos. http://www.conicet.gov.ar/INSTITUCIONAL/sistema_de_evaluacion/documents/ comite_etica_resolucion_marco_para_bioetica_axo3.doc Punto I Encuadra en investigación biomédica básica. Cada sujeto da su consentimiento informado, tiene la libertad de abstenerse de participar y es libre de retirar su consentimiento en cualquier momento quedando fuera del estudio. No hay riesgos predecibles para el paciente, y se respeta su privacidad. El transporte y procesamiento de las muestras será financiado exclusivamente a través de los subsidios ya asignados y a asignar al proyecto. No existen relaciones entre los investigadores y las fuentes de financiación. B) El presente proyecto cuenta con un subsidio asignado (PICT 2008 #1326) en el cual se han evaluado aspectos éticos de la experimentación planteada con muestras humanas con resultados satisfactorios. C) Cabe destacar que el modelo de Consentimiento Informado que aquí se presenta y la realización de un proyecto de investigación previo y estrechamente relacionado al presente plan cuentan con la aprobación de los Comités de Bioética del Hospital Santa Lucía y del Instituto de Biología y Medicina Experimental – CONICET de la ciudad de Bs. As. El mencionado proyecto ha sido aprobado también por el Comité de Docencia e Investigación del Hospital Santa Lucía de la ciudad de Buenos Aires. BIBLIOGRAFÍA Reference List 1. Asa,S.L. and Ezzat,S. (1998). The Cytogenesis and Pathogenesis of Pituitary Adenomas. Endocrine reviews 19, 798-827. 2. Bonnet,D. and Dick,J.E. (1997). Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nat.Med. 3, 730-737. 3. Cristina,C., Diaz-Torga,G., Baldi,A., Gongora,A., Rubinstein,M., Low,M.J., and Becu-Villalobos,D. (2005). Increased pituitary vascular endothelial growth factor-A in dopaminergic D2 receptor knockout female mice. Endocrinology 146, 2952-2962. 4. Cristina,C., Diaz-Torga,G., Gongora,A., Guida,M.C., Perez-Millan,M.I., Baldi,A., and Becu-Villalobos,D. (2007a). Fibroblast Growth Factor-2 in hyperplastic pituitaries of D2R knockout female mice. American Journal of Physiology, Endocrinology and Metabolism 293, E1341-E1351. 5. Cristina,C., Diaz-Torga,G.S., Goya,R.G., Kakar,S.S., Perez-Millan,M.I., Passos,V.Q., Gianella-Neto,D., Bronstein,M.D., and Becu-Villalobos,D. (2007b). PTTG expression in different experimental and human prolactinomas in relation to dopaminergic control of lactotropes. Mol.Cancer 6, 4. 6. Cristina,C., García-Tornadú,I., Diaz-Torga,G., Rubinstein,M., Low,M.J., and Becu-Villalobos,D. (2006). The dopaminergic D2 receptor knockout mouse: an animal model of prolactinoma. Frontiers of Hormone Research 35, 50-63. 7. Dontu,G., Al Hajj,M., Abdallah,W.M., Clarke,M.F., and Wicha,M.S. (2003). Stem cells in normal breast development and breast cancer. Cell Prolif. 36 Suppl 1, 59-72. 8. Elias,K.A. and Weiner,R.I. (1984). Direct arterial vascularization of estrogen-induced prolactin-secreting anterior pituitary tumors. Proceedings of the National Academy of Science.U.S.A. 81, 4549-4553. 9. Ezzat,S., Smyth,H.S., Ramyar,L., and Asa,S.L. (1995). Heterogeneous in vivo and in vitro expression of basic fibroblast growth factor by human pituitary adenomas. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 80, 878-884. 10. Gleiberman,A.S., Michurina,T., Encinas,J.M., Roig,J.L., Krasnov,P., Balordi,F., Fishell,G., Rosenfeld,M.G., and Enikolopov,G. (2008). Genetic approaches identify adult pituitary stem cells. Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A 105, 6332-6337. 11. Gospodarowicz,D., Cheng,J., Lui,G.M., Baird,A., and Bohlen,P. (1984). Isolation of brain fibroblast growth factor by heparin-Sepharose affinity chromatography: identity with pituitary fibroblast growth factor. Proceedings of the National Academy of Science.U.S.A. 81, 6963-6967. 12. Jordan,C.T. (2004). Cancer stem cell biology: from leukemia to solid tumors. Curr.Opin.Cell Biol. 16, 708-712. 13. Jugenburg,M., Kovacs,K., Stefaneanu,L., and Scheithauer,B.W. (1995). Vasculature in Nontumorous Hypophyses, Pituitary Adenomas, and Carcinomas: A Quantitative Morphologic Study. Endocr.Pathol. 6, 115124. 14. Levy,A. (2008). Stem cells, hormones and pituitary adenomas. J Neuroendocrinol. 20, 139-140. 15. Li,Y., Koga,M., Kasayama,S., Matsumoto,K., Arita,N., Hayakawa,T., and Sato,B. (1992). Identification and characterization of high molecular weight forms of basic fibroblast growth factor in human pituitary adenomas. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 75, 14361441. 16. Luque,G., OrnsteinA.M., Perez-Millan,M.I., Cristina,C., and BecuVillalobos,D. (2009). Tratamiento antiagniogéncio en prolactinomas experimentales. Medicina (B Aires) 69, 64. 17. Luque,G.M., OrnsteinA.M., Cristina,C., and Becu-Villalobos,D. Antiogangiogenic treatment of experimental prolactinomas. Biocell In press. 2008. Ref Type: Abstract 18. Mallea-Gil,M.S., Cristina,C., Perez-Millan,M.I., Ballarino,M.C., Rodriguez Villafañe,A.M., Stalldecker,G., and Becu-Villalobos,D. (2009). Invasive giant prolactinoma with loss of therapeutic response to cabergoline: expression of angiogenic markers. Endocr Pathol 20, 35-50. 19. Massard,C., Deutsch,E., and Soria,J.C. (2006). Tumour stem celltargeted treatment: elimination or differentiation. Ann.Oncol. 17, 16201624. 20. Melmed,S. (2003). Mechanisms for pituitary tumorigenesis: the plastic pituitary. Journal of clinical investigation 112, 1603-1618. 21. Nolan,L.A. and Levy,A. (2006). A population of non-luteinising hormone/non-adrenocorticotrophic hormone-positive cells in the male rat anterior pituitary responds mitotically to both gonadectomy and adrenalectomy. J Neuroendocrinol. 18, 655-661. 22. Park,Y.N., Kim,Y.B., Yang,K.M., and Park,C. (2000). Increased expression of vascular endothelial growth factor and angiogenesis in the early stage of multistep hepatocarcinogenesis. Arch Pathol Lab Med 124, 1061-1065. 23. Singh,S.K., Clarke,I.D., Terasaki,M., Bonn,V.E., Hawkins,C., Squire,J., and Dirks,P.B. (2003). Identification of a cancer stem cell in human brain tumors. Cancer Res. 63, 5821-5828. 24. Turner,H.E., Nagy,Z., Esiri,M.M., Harris,A.L., and Wass,J.A. (2000a). Role of matrix metalloproteinase 9 in pituitary tumor behavior. J.Clin.Endocrinol.Metab 85, 2931-2935. 25. Turner,H.E., Nagy,Z., Gatter,K.C., Esiri,M.M., Harris,A.L., and Wass,J.A. (2000b). Angiogenesis in pituitary adenomas - relationship to endocrine function, treatment and outcome. Journal of Endocrinology 165, 475-481. 26. Turner,H.E., Nagy,Z., Gatter,K.C., Esiri,M.M., Harris,A.L., and Wass,J.A. (2000c). Angiogenesis in pituitary adenomas and the normal pituitary gland. J.Clin.Endocrinol.Metab 85, 1159-1162. 27. Vidal,S., Kovacs,K., Horvath,E., Scheithauer,B.W., Kuroki,T., and Lloyd,R.V. (2001). Microvessel density in pituitary adenomas and carcinomas. Virchows Arch 438, 595-602. 28. Zimering,M.B., Katsumato,N., Sato,Y., Brandi,M.L., Aurbach,G.D., Marx,S.J., and Friesen,H.G. (1993). Increased basic fiblobast growth factor in plasma from multiple endocrine neoplasia type 1: relation to pituitary tumor. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism 76, 1182-1187.