Microbiota de la leche materna - Asociación Española de Bancos de

Microbiota de la leche materna
Nadia Raquel García Lara
IV REUNIÓN BANCOS DE LECHE HUMANA
¿Podemos hablar de una
microbiota de la leche
materna?
Diversidad bacteriana
leche materna
•  La leche materna NO es un fluido estéril
•  Tradicionalmente aislamiento de bacterias
en LM se consideraba contaminación
•  Parto intestino/vagina madre boca
neonato contaminación LM o piel pecho
•  Estudios flora LM e intestino lactante
(vaginal/cesárea) se aíslan las mismas
bacterias ácido lácticas que no se aíslan
en piel del pecho ni vagina
Martín R. J Pediatrics 2003
Diversidad bacteriana
leche materna
Nº AISLAMIENTOS IDÉNTICOS (perfil RAPD idéntico)
Martín R. J Pediatrics 2003
Diversidad bacteriana
leche materna
•  En estudios de muestras de LM
(extracción manual) de mujeres sanas,
hijos a término sanos, se objetivan
especies bacterianas que se aíslan de
forma constante
•  Resultados similares en estudios
realizados en diferentes partes del
mundoverdadera microbiota de LM
Diversidad bacteriana
leche materna
•  Medios cultivo, actualmente técnicas
moleculares mucho más sensibles
•  Especies bacterianas que se aíslan
repetidamente
•  Gran variabilidad interindividual
•  La leche de cada mujer tiene una
composición bacteriana única, similar a lo
que ocurre con la microbiota intestinal de
niños y adultos
Diversidad bacteriana
leche materna
•  Estudios con métodos de cultivo
 recuentos totales 103-105
Martín R. J Pediatrics 2003
Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003
•  Origen de las bacterias de la leche
materna es el tracto gastrointestinal
materno RUTA ENTEROMAMARIA
Pérez P.F. Pediatrics 2006
Ruta enteromamaria
Probisearch®
Diversidad bacteriana
leche materna
 Género Staphyloccus
–  Principal S. epidermidis
–  También otros S. coagulasa negativo y
S. aureus
–  El más frecuente (≈100% de las mujeres)
–  El más numeroso (recuentos>103 UFC/ml)
*Presencia de S. epidermidis en heces es un
rasgo diferencial de lactantes amamantados
Adlerberth. Ped Res 2006
Diversidad bacteriana
leche materna
 Género Streptococcus
–  Principal S. viridans (S. salivaris, mutis)
–  También S. agalactiae
 Género Enterococcus
–  Principal E. faecium
–  También E. faecalis
•  No expresión de factores virulentos ni
resistencia vancomicina E. faecium
Reviriego C. J. Human Lact. 2005
Diversidad bacteriana
leche materna
 Bacterias ácido lácticas
o Lactobacillus, Leuconoctoc, Lactococcus,
Weisella, Bifidobacterias
 Bacilos Gram negativos entéricos
o Eschirichia Coli, cepas comensales
  E. Coli se encuentra entre las primeras
especies aisladas en el intestino del neonato
o Pseudomonas, Serratia, Acinetobacter,
Salmonella
Martín R. Res Microbiol 2007
Favier et al. Appl Environ Microbiol 2002
Tannock W. J Clin Microbiol 1990
Diversidad bacteriana
leche materna
N=40 muestras de LM
Medios cultivo anaerobios (estrictos y facultativos)
Recuento 102-104; 10-21 especies por muestra
Grupo bacteriano
Grupo Staphylococci
(S. epidermidis)
Grupo Streptococcus
(S. salivarius, mitis)
Enterococcus
(E. faecium)
Prevalencia
en muestras
97,5%
72,5%
7,5%
Bacterias Acido Lácticas
(Lactobacillus rhamnosus, Lact. crispatus,
Lactococcus lactis, Leuconoctoc
mesenteroides)
12,5%
Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003
Diversidad bacteriana
leche materna
N=50 muestras LM. PCR cuantitativa tiempo real
Grupo bacteriano
Prevalencia
Media±DS
(log10/ml)
RECUENTO TOTAL
50/50
6.03±0.75
Grupo Staphylococcus
50/50
3.55±0.84
Grupo Bifidobacterium
50/50
3.56±0.23
Grupo Lactobacillus
50/50
3.74±0.47
Grupo Enterococcus
38/50
2.56±0.71
Grupo Streptococcus
50/50
4.50±0.81
Grupo Bacteroides
20/50
2.02±0.51
Clostridium Cluster XIVa-XIVb
48/50
3.32±0.60
Clostridium Cluster IV
2/50
1±60±0.17
Collado M.C. Letters Appl Microbiol 2009
¿Tiene la microbiota de
la leche materna
propiedades
probióticas?
La flora de la LM tiene
capacidad probiótica
Grupo bacteriano
Grupo Staphylococci
(S. epidermidis)
Grupo Streptococcus
(S. salivarius, mitis)
Enterococcus
(E. faecium)
Prevalencia
en muestras
Capacidad
bactericida
frente St aureus
97,5%
23%
72,5%
41% S. salivarius
23% otros
7,5%
100%
12,5%
100%
Bacterias ácido lácticas
(Lactobacillus rhamnosus, Lact.
crispatus, Lactococcus lactis,
Leuconoctoc mesenteroides)
Heikkila M.P. J Appl Microbiol 2003
La flora de la LM tiene
capacidad probiótica
 Lactobacillus, Bifidibacterium,
Lactococcus
o Variedades de Lactobacillus de LM
tienen potencial probiótico igual o
superior que variedades que contienen
probióticos comercializados
Martín R. Appl Environ Microbiol 2009
Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007
Olivares M. J Appl Microbiol 2006
Martín R.J Hum Lact 2005
La flora de la LM tiene
capacidad probiótica
 Lactobacillus, Bifidibacterium,
Lactococcus
o Forman barrera microbiológica primaria
importante para prevenir infecciones
o Capacidad adherirse a mucosas
o Productor sustancias antimicrobianas
o Además efecto inmunomodulador y
antiinflamatorio
Martín R. Appl Environ Microbiol 2009
Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007
Olivares M. J Appl Microbiol 2006
Martín R.J Hum Lact 2005
La flora de la LM tiene
capacidad probiótica
 Streptococcus viridans
o Inhibe la colonización cavidad oral por
S. aureus meticilín resistente en
neonatos hospitalizados
Uehara Y. Clin Infect Dis 2001
o Presencia en heces factor protector
Kiriavainen Immunol Med Microbiol 2001
atopia
o S. sanguis antagonista caries,
enfermedad periodontal
Becker M.R. J Clin Microbiol 2002
La flora de la LM tiene
capacidad probiótica
 Enterobacterias
o Formas comensales E. Coli presentes de
forma importante en las superficies
mucosas del humano
Grozdanov L. J Bacteriol 2004
o E. coli variedad Nissle 1917 (O6:K5:H1)
forma parte de un probiótico diseñado
para recién nacidos
Lodinova R. Biol Neonatol 1997
MECANISMOS ANTIINFECTIVOS BACTERIAS
PROBIÓTICAS INTESTINALES
Competencia por nutrientes
Inducción IgA
Competencia
lugares adhesión
Producción
mucina
Producción de
sustancias
antimicrobianas
Uniones intercelulares
más fuertes
Inmunomodulación
Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007
¿Qué infuencia tiene la
microbiota de la leche
materna en la
microbiota intestinal
del recién nacido?
LM y flora microbiana
intestinal del neonato
•  La colonización intestinal del neonato
comienza inmediatamente tras el
nacimiento
•  Es esencial para la maduración del tejido
linfoide asociado al intestino, mantener la
homeostasis del epitelio intestinal y la
regulación de la fisiología intestinal
Grönlund MM. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed 2000
LM y flora microbiana
intestinal del neonato
•  La alteración de la flora microbiana en el
neonato se relaciona con un estado
proinflamatorio (enterocolitis necrosante,
broncodisplasia, leucomalacia ventricular)
y mayor riesgo de sepsis nosocomial
•  Asimismo, se relaciona con otras
enfermedades a largo plazo (alergias)
Kalliomaki M. J Allergy Clin Immunol 2001
LM y flora microbiana
intestinal del neonato
•  La flora bacteriana fecal de los lactantes
sanos amantados refleja la composición
bacteriana de la leche materna.
Se han aislado las mismas variedades de
Bifidobacterias, Lactobacillus y
Staphylococcus en pares madre-lactante
•  La leche materna supone una fuente
constante de bacterias comensales para el
intestino del lactante
Martín V. J Hum Lact 2012
Donnet-Hughes A. Proc Nutr Soc 2010
Pérez PF. Pediatrics 2007
¿Cuál es el riesgo de
alimentar a los recién
nacidos con leche
materna con altos
recuentos bacterianos?
Cultivos LM y
patología neonatal
•  161 madres de prematuros ingresados
<30 semanas EG
•  Cultivo semanal de muestra extraída
durante 24 horas ; N= 813 muestras LM
•  Sacaleches eléctrico
•  Columbia CNA Agar para Gram positivos
•  Agar Mac Conkey para Gram negativos
Schanler R. J. Perinatol 2011
Cultivos LM y
patología neonatal
TIPO CRECIMIENTO BACTERIANO
Número (%)
No crecimiento
4,3%
GRAM POSITIVOS
Bajo recuento (<104 UFC/ml)
48,7%
Alto recuento (≥104 UFC/ml)
5,4%
BACILOS GRAM NEGATIVOS
Bajo recuento (<104 UFC/ml)
0%
Alto recuento (≥104 UFC/ml)
0,4%
FLORA MIXTA
Bajo recuento Gram positivos y negativos
17,5%
Alto recuento Gram positivos y negativos
7%
Alto recuento Gram positivos /Bajo Gram negativos
2,5%
Bajo recuento Gram positivos /Alto Gram negativos
14,5%
Schanler R. J. Perinatol 2011
Cultivos LM y
patología neonatal
Grupos bacterianos
Número (%)
Staphylococcus aureus
65 (5)
Grupo Staphylococcus
coagulasa negativo
637(49,3)
Grupo Enterococcus (faecalis)
152 (11,8)
Grupo Streptococcus (agalactiae) 5 (0,4)
Bacilos Gram negativos entéricos
423 (42,4)
Candida sp
11 (0,9)
Schanler R. J. Perinatol 2011
Cultivos LM y
patología neonatal
Especies Bacterianas
Número (%)
Bacilos Gram Negativos
423 (42,4)
Acinetobacter sp
127 (9,8)
Citrobacter sp
8 (0,6)
Enterobacter sp
69 (5,3)
Escherichia coli
8 (0,6)
Klebsiella sp
45 (3,5)
Pseudomonas sp
62 (4,8)
Serratia sp
25 (1,9)
Stenotrophomonas maltophilia
79 (6,1)
Schanler R. J. Perinatol 2011
Cultivos LM y
patología neonatal
NO SIGNIFICATIVO PARA NINGÚN GERMEN
GRAM POSITIVO
NO SIGNIFICATIVO PARA E.COLI,
KLEBISIELLA, ENTEROBACTER
SIGNIFICATIVO PARA SERRATIA (2 sepsis)
1 sepsis 67ddv; cultivo + en LM día 14; negativo 10,20,28
2sepsis 11ddv; cultivo + día7; negativos 7 posteriores
Odds Ratio del aislamiento del mismo germen en la
LM y RN en cualquier momento de la hospitalización
Cultivos LM y
patología neonatal
•  7610 muestras LM procedentes de 96
mujeres
•  Toda LM administrada en las 2 primeras
semanas de vida a prematuros ingresados
en 2 unidades neonatales 1 año
•  Correlación carga bacteriana- intolerancia
digestiva y sepsis
•  Extracción manual o sacaleches eléctrico
•  Cultivos agar sangre y McConkey
Law BJ J Clin Microbiol 1989; 27:1560-6
Cultivos LM y
patología neonatal
•  19,1% no aislamientos
•  74,3% sólo Gram positivos
25% excedían límites aceptabilidad
•  1,1% sólo Gram negativos
4,7% excedían límites aceptabilidad
Flora mixta 5,7%
•  NO se encontró relación entre el recuento
bacteriano de la leche materna y episodios
de sepsis ni intolerancia digestiva
Law BJ J Clin Microbiol 1989; 27:1560-6
Cultivos LM y
patología neonatal
•  272 muestras LM
–  76 cultivadas antes de ser
administradas por sonda
•  36% crecimiento enterobacterias
–  196 cultivadas al final del recorrido de la
sonda
•  60% crecimiento enterobacterias
–  Correlación positiva crecimiento
enterobacterias (>106)-sepsis?
Botsford KB.. J Pediatr 1986; 109:707-10.
Cultivos LM y
patología neonatal
•  ¿Correlación positiva crecimiento
enterobacterias (>106)-sepsis?
•  En ninguna de los 6 episodios de sepsis
se aisló la enterobacteria en sangre del
neonato (sepsis clínica)
•  No especifican cuándo se habían
realizado dichos cultivos (antes o
después de administración por sonda)
Botsford KB.. J Pediatr 1986; 109:707-10.
¿Implicaciones para los
bancos de leche?
¿Implicaciones para
los bancos de leche?
•  Potencial probiótico demostrado de las
bacterias que contiene la leche materna
•  Capacidad bactericida,
imnunomoduladora, antiinflamatoria
•  Los criterios microbiológicos para
descartar leche antes de la pasteurización
se extrapolaron de la industria alimentaria
y no están basados en la evidencia
científica
¿Implicaciones para
los bancos de leche?
•  El desconocimiento previo acerca de la
flora microbiana normal de la LM ha
llevado a desechar muestras de leche con
contenidos 103 y 105 UFC/ml, recuentos
normales en la LM de las mujeres sanas
•  Además la mera presencia de
enterobacterias, Staphylococcus aureus,
Enterococcus es motivo en algunos bancos
para descartarla
¿Implicaciones para
los bancos de leche?
•  Algunos autores han señalado que parte
de la pérdida de capacidad bactericida de
la leche materna pasteurizada pueda
deberse a la erradicación de la flora
normal de la LM
Martín R. Appl Environ Microbiol 2009
Collado M.C. Letters Appl Microbiol 2009
Lara-Villoslada F. Br J Nutr. 2007
¿Implicaciones para
los bancos de leche?
Además del valor
nutricional e
inmunológico es
importante considerar
el valor
microbiológico de la
leche materna