INSTRUCCIONES DE USO – MEDIOS EN PLACA LISTOS PARA USAR PA-254480.02 Rev.: Junio de 2003 BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin USO PREVISTO BD Bacteroides Bile Esculin Agar (=BBE) with Amikacin es un medio selectivo para el aislamiento e identificación presuntiva del grupo Bacteroides fragilis. PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO Método microbiológico. Entre los anaerobios detectados con mayor frecuencia en infecciones clínicas humanas se encuentran los miembros del grupo Bacteroides fragilis. Es importante obtener una detección e identificación rápidas de estos organismos, dado que se han determinado como más resistentes al tratamiento antimicrobiano en comparación con otros anaerobios1,2. B. fragilis y B. thetaiotaomicron son las especies de mayor importancia clínica1-3. Otras especies incluidas en el grupo: B. caccae, B. distasonis, B. eggerthii, B. merdae, B. ovatus, B. stercoris, B. uniformis y B. vulgatus. Se han recomendado como apropiados para aislamiento primario los medios selectivos tales como CDC Anaerobe 5% Sheep Blood Agar with Kanamycin and Vancomycin3-6. Sin embargo, se proporcionó una evidencia limitada para la identificación presuntiva del grupo B. fragilis. En 1978, Livingston et al describieron un medio en placa primario (BBE) que se determinó que proporcionaba recuperación selectiva del grupo B. fragilis y también evidencia de identificación presuntiva4. Mientras las versiones anteriores de los medios contenían gentamicina5, se ha demostrado que la amicacina proporciona una mejor inhibición de determinados organismos anaerobios facultativos. BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin se basa en el agar de soja Trypticase II, que proporciona nutrientes. Mediante la amicacina y la bilis de buey, se obtiene una inhibición selectiva de anaerobios facultativos y de la mayoría de los organismos anaerobios gram positivos. La diferenciación del grupo B. fragilis se basa en la hidrólisis de la esculina, durante la que se producen esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con la sal férrica (citrato férrico amónico) para producir un complejo de marrón oscuro a negro que aparece en el medio alrededor de las colonias de los miembros del grupo B. fragilis. REACTIVOS BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin Fórmula* por litro de agua purificada Digerido pancreático de caseína 14,5 g Digerido papaico de harina de soja 5,0 Cloruro sódico 5,0 Esculina 1,0 Citrato férrico de amonio 0,5 Bilis de buey 15,0 Hemina 0,01 Amicacina 0,075 Vitamina K1 0,01 Agar 14,0 Factores de crecimiento 1,8 pH 7,0 ± 0,2 *Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento. PA-254480.02 -1- PRECAUCIONES . Solamente para uso profesional. No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración, deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro. Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO. ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados. Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 – 8 °C. CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO Inocular muestras representativas con las cepas indicadas a continuación (para obtener los detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 48 h en una atmósfera anaerobia (por ejemplo, sistema anaerobio BD GasPak) a 35 – 37 °C. Cepas Bacteroides fragilis ATCC 25285 Bacteroides thetaiotaomicron ATCC 29741 Clostridium perfringens ATCC 13124 Escherichia coli ATCC 25922 Proteus mirabilis ATCC 12453 Peptostreptococcus anaerobius ATCC 27337 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Sin inocular Resultados del crecimiento Crecimiento de bueno a excelente; colonias grises rodeadas por zonas de marrón a negro Crecimiento de bueno a excelente; colonias grises rodeadas por zonas de marrón a negro Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa Inhibición de parcial a completa Inhibición completa Inhibición completa Beige oscuro PROCEDIMIENTO Materiales suministrados BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin (placas Stacker de 90 mm). Controladas microbiológicamente. Material no suministrado Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera. Tipos de muestras Es un medio selectivo para el aislamiento e identificación presuntivas del grupo Bacteroides fragilis. Puede utilizarse con todos los tipos de muestras clínicas (véase también CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Emplear las técnicas aprobadas para la recogida y el transporte de muestras anaerobias 1,3,6-8. Durante la recogida, evitar la contaminación de las muestras con flora fecal, dado que albergan organismos del grupo B. fragilis. PROCEDIMIENTO DE ANALISIS Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. Dado que algunas cepas del grupo B. fragilis tal vez no crezcan bien debido a las propiedades selectivas del medio, y con el fin de detectar otros patógenos anaerobios en la muestra, también debe incluirse un medio de agar sangre no selectivo tal como BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood. Asimismo, debe inocularse una placa de BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood incubada en atmósfera aerobia para garantizar la detección de patógenos aerobios y facultativos presentes en la muestra. PA-254480.02 -2- Incubar BD Bacteroides Bile Esculin Agar With Amikacin y BD Schaedler Agar with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood sin demora en condiciones anaerobias (por ejemplo, mediante el uso de un sistema anaerobio BD GasPak), a 35 ± 2 °C durante al menos 48 h. Independientemente del sistema anaerobio utilizado, es importante incluir un indicador de anaerobiosis tal como el indicador anaerobio desechable BD GasPak. Resultados Después de 48 h de incubación, las colonias del grupo B. fragilis deben medir más de 1 mm de diámetro y tener un aspecto grisáceo, circular, entero y elevado. Se debe realizar una tinción de Gram para facilitar la identificación. La hidrólisis de esculina se indica mediante el oscurecimiento del medio alrededor de las colonias. Se inhibe la mayoría de los anaerobios diferentes del grupo B. fragilis. CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Este medio se utiliza para el aislamiento selectivo e identificación presuntiva del grupo Bacteroides fragilis, tal como B. fragilis, B. thetaiotaomicron, B. caccae, B. distasonis, B. eggerthii, B. merdae, B. ovatus, B. stercoris, B. uniformis y B. vulgatus. No permite la diferenciación de las especies dentro de este grupo. Para identificar las especies, se requieren pruebas bioquímicas adicionales3. Se ha reseñado que algunas cepas de Bacteroides vulgatus tal vez no produzcan hidrólisis de la esculina1-3. En este medio no se inhiben los anaerobios facultativos con una alta resistencia a los aminoglucósidos. Las especies de Enterococcus pueden crecer en el medio y pueden ser similares en apariencia al grupo B. fragilis. Por tanto, es obligatorio incluir una placa de agar sangre incubada en atmósfera aerobia para mostrar la relación de los aislados con respecto al oxígeno. Los enterococos también crecen en atmósfera aerobia. Una tinción de Gram también permite la diferenciación entre Enterococcus y el grupo B. fragilis. Bilophila wadsworthia, que fue aislada en agar bilis esculina para Bacteroides9, por lo general es inhibida por la amicacina contenida en BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin. REFERENCIAS 1. Hammann, R., and Werner, H. 1992. Bacteroidaceae, p. 195-204. In: F. Burkhardt (ed.), Mikrobiologische Diagnostik. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, New York. 2. Reischelderfer, C., and J.I. Mangels. 1992. Culture media for anaerobes, p.2.3.1-p.2.3.8 In for Microbiology, Washington, D.C.H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures handbook, vol. 1. American Society 3. Jousimies-Somer, H.R., et al. 2003. Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella, Fusobacterium, and other anaerobic gram-negative bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 4. Livingston, S.J., S.D. Kominos, and R.B. Yee. 1978. New medium for selection and presumptive identification of the Bacteroides fragilis group. J. Clin. Microbiol. 7:448-453. 5. Dowell, V.R., Jr., G.L. Lombard, F.S. Thompson, and A.Y. Armfield. 1977. Media for isolation, characterization, and identification of obligately anaerobic bacteria. CDC laboratory manual. Center for Disease Control, Atlanta. 6. Dowell, V.R., Jr., and T.M. Hawkins. 1987. Laboratory methods in anaerobic bacteriology. CDC laboratory manual. HHS Publication No. (CDC) 87-8272. Centers for Disease Control, Atlanta. 7. Murray, P.R., and D.M. Citron. 1991. General processing of specimens for anaerobic bacteria, p. 488-504. In A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. PA-254480.02 -3- 8. Murray, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F.C., and R.H. Yolken (ed.). 1995. Manual of clinical microbiology, 6th ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Baron EJ, Summanen P, Downes J, Roberts MC, Wexler H, Finegold SM. 1989. Bilophila wadsworthia, gen. nov. and sp. nov., a unique gram-negative anaerobic rod recovered from appendicitis specimens and human faeces. J. Gen. Microbiol. 135: 3405-3411 ENVASE/DISPONIBILIDAD BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin Nº de cat. 254480 Medios en placa listos para usar, 20 placas INFORMACIÓN ADICIONAL Para obtener más información, diríjase a su representante local de BD. BD Diagnostic Systems Tullastrasse 8 – 12 D-69126 Heidelberg/Germany Phone: +49-62 21-30 50 Fax: +49-62 21-30 52 16 Reception_Germany@europe.bd.com BD Diagnostic Systems Europe Becton Dickinson France SA 11 rue Aristide Bergès 38800 Le Pont de Claix/France Tel: +33-476 68 3636 Fax: +33-476 68 3292 http://www.bd.com BD, BD logo, GasPak and Stacker are trademarks of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection 2003 Becton, Dickinson and Company PA-254480.02 -4-