IDENTIFICACIÓN DEL DOLOR, PUNTO FINAL Y EUTANASIA A ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN Dr. Martín Breijo Unidad de Reactivos y Biomodelos de Experimentación Facultad de Medicina A lo largo del curso teórico pretendimos comunicar: • El uso de animales con fines científicos no es por sí deseable. • Siempre que sea posible deben utilizarse otros métodos. • En el estado actual de los conocimientos es inevitable recurrir al uso de animales. • Valorar y respetar al animal de experimentación es nuestra principal responsabilidad como investigadores. Principios Generales (Russell y Burch, 1959) Principio de las eplacement • No utilizar animales, o eduction • Utilizar los menos posibles y efinement • Con técnicas más adecuadas para evitar al máximo el sufrimiento Utilización de animales vertebrados en investigación y docencia a partir de Protocolos aprobados en la Universidad de la República durante el año 2011 Animales Tradicionales Animales No Tradicionales Animales Productivos Roedores Lagomorfos Felinos Canes Anfibios Peces Roedores Aves Mamíferos Marinos Suinos Ovinos Bovinos Aves de Corral N° Protocolos 40 7 1 1 3 9 2 1 1 3 2 10 1 N° Animales 2712 94 30 15 180 1783 200 80 180 71 453 1036 88 Tipo de tratamiento Utilización de animales vertebrados en investigación y docencia a partir de Protocolos aprobados en la Universidad de la República durante el año 2011 Agudo Crónico 65% 35% Nivel de stress Bajo Moderado Alto 10.5% 72% 17.5% Que registro tenemos de uso de analgésicos? Definición de dolor (IASP, 1979), Experiencia sensorial y emocional no placentera asociada con un real o potencial daño tisular. Existe un acuerdo de que tiene dos componentes • registro del estimulo • dolor como una emoción que lleva al sufrimiento El concepto dolor se ha ido modificando en el tiempo • En Pennsylvania en 1860s el 30% de las amputaciones en humanos se hacían sin anestesia: se consideraba que se deberia usar en los pacientes mas sensibles al dolor (blancos, mujeres y los ricos). Dentro de los insensibles se incluían inmigrantes, negros y alcoholicos). • El dolor en niños: los niños menores de un año no experimentan dolor (Derbishyre, 2003). • Un relevamiento de artículos científicos donde se usaban roedores entre los 90s y el año 2000, sugieren que el uso de analgésicos se ha incrementado en el tiempo y que las dosis utilizadas fueron subterapeuticas (Richardson, 2005). Identificación del dolor esta basada en • Cantidad de alimento y agua que toman • Ganancia de peso • Mediciones de respuestas fisiológicas (cortisol) • Mediciones del comportamiento (ej, vocalizaciones). Debemos validar la respuesta al dolor: La prueba estándar es examimar la respuesta al dolor por causa de la manipulacion (P) y sin (p) y usando el analgesico (A) y sin (a). La mayoria de los ensayos el tratamiento lo comparan con Pa pero deben considerar PA, pA y pa. SE DEBERIAN VALIDAR CADA UNO DE LOS PROCEDIMIENTOS VALORACIÓN DEL SUFRIMIENTO EN PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Por analogía Existen dos métodos de valorar sufrimiento Severidad Alta Severidad Intermedia Escalas de severidad Severidad Baja Analgesia Medidas correctivas Sedación Punto final y eutanasia ¿En que momento debemos tomar la decisión de determinar el punto final de un animal en un proceso experimental? Siempre que un animal manifieste un estado clínico de angustia que no puede ser corregido con tratamientos paliativos Día 0 Debe poder beber y comer por sus propios medios EXPERIMENTO TODO PROTOCOLO EXPERIMENTAL DEBE DESCRIBIR LOS CRITERIOS DE PUNTO FINAL Y EL MÉTODO DE EUTANASIA A SER UTILIZADO EN UN ENSAYO Eliminación del reactivo y toma de muestras Final EUTANASIA La palabra eutanasia significa etimológicamente "muerte sin dolor", y en sentido aplicativo, "arte de sacrificar o matar animales de forma piadosa, evitando el sufrimiento físico y psíquico". Obviamente esto no se logra si el animal lucha o presenta síntomas de miedo durante la maniobra empleada o, si recupera el conocimiento durante el proceso. Se podría calificar de buen método de eutanasia aquél en el que se alcanza con rapidez el estado de inconsciencia y éste se mantiene hasta el momento de la muerte ,es decir, la verdadera eutanasia supone una insensibilización rápida mantenida hasta que se produzca la muerte. El proceso de EUTANASIA debe caracterizarse por ser: • Libre de dolor, temor o lucha • Seguro para el personal de laboratorio • Fácil de realizar y rápido en su acción • Apropiado para la edad, especie, salud y número de animales. • Libre de impactos ambientales negativos. • Libre de efectos químicos a nivel tisular e incapaz de inducir alteraciones histológicas en el animal de estudio. MÉTODOS DE EUTANASIA FÍSICOS Ejemplos: Dislocación cervical Decapitación Electrocución Exanguinación QUÍMICOS Ejemplos: Sobredosis de anestésicos Gases depresores de SNC Rata y Ratón FÍSICOS Dislocación cervical Decapitación (solo animales pequeños) Rata y Ratón QUÍMICOS • Dióxido de Carbono (CO2) El CO2 es 1.5 veces más pesado que el oxígeno, no es combustible, no huele y es incoloro. • Sobredosis anestésica Tiopental sódico: dosis letal es tres veces la anestésica vías IV o IP; no usar SC Rata y Ratón ¿SE RECOMIENDA USAR ETER ? ¿Y URETANO? NO!!!!!!!!!!!! Peligroso para los operadores e investigadores COBAYOS QUÍMICOS FÍSICOS IMPACTACIÓN CERVICAL Dióxido de Carbono (CO2) Barbitúricos: Tiopental sodico CONEJOS IMPACTACIÓN CERVICAL ( SOLO PERSONAL ENTRENADO) SOBREDOSIS ANESTÉSICA BOVINOS Y OVINOS FÍSICOS QUÍMICOS QUÍMICOS FÍSICOS FÍSICOS ARMA DE FUEGO Y/O PERNO CAUTIVO EN RESUMEN DAR MUERTE A UN SER VIVO ES RELATIVAMENTE FÁCIL LO DIFICIL EN UN TRABAJO EXPERIMENTAL ES: • DEFINIR CUANDO • HACERLO ADECUADAMENTE, EN UN MARCO DE RESPETO POR EL ANIMAL Y EVITANDO RIESGOS PARA LOS OPERADORES