BD MacConkey Agar without Salt

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-256009.01
Rev.: Abr 2013
BD MacConkey Agar without Salt
USO PREVISTO
BD MacConkey Agar without Salt (agar MacConkey sin sal) es un medio de diferenciación
para el aislamiento de Enterobacteriaceae, estafilococos y enterococos a partir de muestras
clínicas tales como la orina.
PRINCIPIOS Y EXPLICACIÓN DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
El agar MacConkey común, tal como BD MacConkey II Agar, se utiliza para el aislamiento
selectivo de Enterobacteriaceae y determinados organismos no fermentadores1,2. La inhibición
de bacterias gram positivas se debe principalmente a la presencia de cristal violeta. En
comparación con el agar MacConkey común, BD MacConkey Agar without Salt no inhibe
bacterias gram positivas tales como los enterococos y los estafilococos, dado que no contienen
cristal violeta2.
En BD MacConkey Agar without Salt, las peptonas proporcionan los nutrientes. Las sales
biliares actúan como inhibidores suaves de las bacterias no intestinales y contribuyen a inhibir la
proliferación de Proteus. La lactosa junto con el rojo neutro conforman el sistema indicador para
la fermentación de lactosa. En ambos medios, se producen colonias incoloras o de color
naranja o rosa, según la capacidad de la cepa aislada para fermentar lactosa. Se obtiene una
mejor inhibición de la proliferación de Proteus debido a la ausencia de sal. Por tanto, este medio
se recomienda especialmente para el análisis bacteriológico cuantitativo de orina.
REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
Peptonas
20,0 g
Lactosa
10,0
Sales biliares
5,0
Rojo neutro
0,075
Agar
12,0
pH
7,4 ± 0,2
*Ajustada y/o complementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y eliminación del
producto en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA ÚTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 a 8 °C en su
envase original hasta justo antes de su uso. Evitar la congelación y el sobrecalentamiento. Las
placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la etiqueta del paquete) e
incubarse durante los tiempos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades almacenadas en un área limpia a una temperatura
de 2 a 8 °C pueden utilizarse durante una semana.
PA-256009.01
-1-
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas siguientes (para obtener más datos, véase el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar en atmósfera aerobia a 35 a 37 °C
durante 18 a 14 horas. No incubar en atmósfera enriquecida con dióxido de carbono.
Cepas
Escherichia coli
ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 12453
Salmonella Typhimurium
ATCC 14028
Shigella flexneri
ATCC 12022
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Sin inocular
Crecimiento
Colonias de color rosa a rojo; posiblemente rodeadas de
zonas de precipitación biliar, medio de rosa a rojo
Colonias de color marrón claro; inhibición de la proliferación;
medio de amarillo a naranja
Colonias de color marrón claro, medio de amarillo a naranja
Colonias de color marrón claro; medio naranja
Colonias pequeñas y rojizas
Colonias rosadas de pequeñas a medianas
Naranja rojizo, ligeramente opalescente
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD MacConkey Agar Without Salt, suministrado en placas Stacker de 90 mm. Con control
microbiológico.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliares, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
BD MacConkey Agar Without Salt puede utilizarse para todos los tipos de muestras clínicas.
Sin embargo, se utiliza principalmente para análisis de orina (véase también
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO). Se
puede utilizar la orina de la parte media de la micción, de la sonda o recogida mediante punción
vesical suprapúbica. Emplear técnicas asépticas al recoger las muestras urinarias. Es preciso
realizar una siembra en estrías de la orina directamente en el medio (no más tarde de las 2
horas siguientes a la recogida de la muestra) o bien refrigerarla (durante menos de 24 horas)
para evitar el crecimiento excesivo de los agentes infecciosos o contaminantes previamente a la
inoculación del medio.
Procedimiento de análisis
Recoger con un asa calibrada (0,01 o 0,001 mL) una muestra de orina no diluida, adecuadamente
mezclada. Comprobar que el asa se cargue correctamente. Inocular la muestra en el centro de
la placa en una única siembra en estrías a partir de la cual se efectúa la dispersión del inóculo. 6-9.
Si en estos medios se cultivan muestras diferentes de orina, realizar una siembra en estrías
para su aislamiento. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una
torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde; realizar luego la siembra en
estrías a partir de este área inoculada.
Todas las muestras también deben cultivarse en una placa de agar sangre, tal como BD
Columbia Agar with 5% Sheep Blood, para detectar colonias aisladas exigentes que tal vez
no crezcan en BD MacConkey Agar Without Salt. Incubar la placa de agar sangre en una
atmósfera aerobia enriquecida con CO2 e incubar el medio de agar MacConkey en aire
ambiente a una temperatura de 35 a 37 °C durante 24 a 48 horas.
Resultados
Después de la incubación, los organismos fermentadores de lactosa tales como E. coli
aparecerán de color rosado o de rosa a rojo y pueden estar rodeados de una precipitación biliar
turbia y rosada. Los organismos no fermentadores de lactosa tales como Proteus spp. serán
PA-256009.01
-2-
incoloros. Los organismos no fermentadores de lactosa pueden cambiar el color del medio a
beige amarillento, mientras que la coloración naranja rojiza cambia a rosa con el crecimiento de
los organismos fermentadores de lactosa. Los estafilococos en ambos medios producen
colonias de rosa pálido a rosado, mientras que los enterococos producen colonias pequeñas de
color rojo. Se requieren más pruebas bioquímicas para la identificación final de las cepas
aisladas.
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
BD MacConkey Agar Without Salt es adecuado para el aislamiento de numerosos
microorganismos de crecimiento aerobio, tales como Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros
bacilos gram negativos no fermentadores, enterococos, estafilococos y muchos otros
organismos aislados de la orina o de otras muestras clínicas y materiales no clínicos tales como
alimentos2-6.
Es posible que los estreptococos y otros organismos que precisan sangre o suero para su
crecimiento no crezcan o no sean recuperados suficientemente en este medio. Por tanto, si se
espera hallar tales organismos, se debe cultivar la muestra también en una placa de agar
sangre o chocolate.
Los patógenos genitourinarios, como Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia,
Ureaplasma y otros organismos exigentes, no crecen en este medio. Consultar las referencias
para conocer las técnicas de detección adecuadas para estos organismos7-9.
Aunque en este medio puede efectuarse la diferenciación conforme a la fermentación de
lactosa y determinadas pruebas de diagnóstico, se precisa el análisis bioquímico y, en caso
indicado, inmunológico empleando cultivos puros para lograr la identificación completa.
Se ha notificado que la incubación de las placas de agar MacConkey en atmósfera con CO2
aumentado reduce el crecimiento y la recuperación de un número de cepas de bacilos gram
negativos10.
Se requieren pruebas bioquímicas y/o serológicas adicionales para identificar las cepas aisladas
obtenidas en estos medios.
REFERENCIAS
1. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in feces. J. Hyg. 5:333-379.
2. MacFaddin, 1985. Media for the isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria: Williams and Wilkins, Baltimore.
3. Hitchins, A. D., P. A. Hartman, and E. C. D. Todd. 1992. Coliforms-Escherichia coli and its
Toxins, p. 325-369. In C. Vanderzant, and D. F. Splittstoesser (ed.), Compendium of
methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health
Association, Washington. D.C.
4. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8th ed. AOAC
International. Gaithersburg, MD.
5. WHO. 1963. International Standards for Drinking Waters, 7th ed., Churchill Ltd. London.
6. DGHM. 1983. Verfahrensrichtlinien für die mikrobiologische Diagnostik, chapter 2.1. Fischer
Verlag, Stuttgart, Germany.
7. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract
infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington,
D.C.
8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
9. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of
urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
10. Mazura-Reetz, G. T. Neblett, and J. M. Galperin. 1979. MacConkey Agar: CO2 vs. ambient
incubation. Abst. Ann. Mtg. American Society for Microbiology. C179.
PA-256009.01
-3-
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD MacConkey Agar Without Salt
Nº de cat. 256009
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 257286
Medios en placa listos para usar, 120 placas
INFORMACIÓN ADICIONAL
Para obtener más información, póngase en contacto con su representante local de BD.
Becton Dickinson GmbH
Tullastrasse 8 – 12
D-69126 Heidelberg/Germany
Phone: +49-62 21-30 50
Fax: +49-62 21-30 52 16
Reception_Germany@europe.bd.com
http://www.bd.com
http://www.bd.com/europe/regulatory/
ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection
BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company.
PA-256009.01
-4-
© 2013 BD