BD Sabouraud Glucose Agar BD Sabouraud Agar with

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254039.07
Rev.: April 2013
BD Sabouraud Glucose Agar ●
BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol ●
BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol ●
BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin
USO PREVISTO
BD Sabouraud Glucose Agar se utiliza para el aislamiento y el cultivo de hongos (levaduras,
mohos y dermatofitos) a partir de muestras clínicas. BD Sabouraud Agar with
Chloramphenicol, BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol y BD
Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin son medios selectivos para el aislamiento
de hongos a partir de muestras clínicas.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Sabouraud Glucose Agar es un medio de uso general para el cultivo de dermatofitos1,2. Hoy en
día se utiliza para el aislamiento y cultivo de todos los hongos3-5. Las peptonas en Sabouraud
Glucose Agar son fuentes de factores de crecimiento nitrogenoso. La glucosa aporta una
fuente de energía para el crecimiento de microorganismos. La alta concentración de glucosa
presenta una ventaja para el crecimiento de hongos (estables osmóticamente), mientras que la
mayoría de las bacterias no tolera la alta concentración de azúcar. Además, el bajo pH es
óptimo para los hongos pero no para muchas bacterias3. Sabouraud Glucose Agar es sólo
levemente selectivo frente a las bacterias.
BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol BD Sabouraud Agar with Gentamicin and
Chloramphenicol y BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin son medios
selectivos para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas y no clínicas. Se han
añadido agentes selectivos para inhibir las bacterias. El cloranfenicol es un antibiótico de amplio
espectro que inhibe una amplia variedad de bacterias gram negativas y gram positivas, pero
puede tener un efecto inhibidor en numerosos hongos patógenos4. Se ha demostrado que los
antimicrobianos como la penicilina, la gentamicina y la estreptomicina, o una combinación de las
mismas, son eficaces en la inhibición de bacterias sin afectar el crecimiento fúngico2-5.
Estos medios se utilizan para el aislamiento de hongos a partir de muestras clínicas o
materiales en los que se sospeche la presencia de contaminantes bacterianos. Sabouraud
Glucose Agar es uno de los medios utilizados en las pruebas de límites microbianos en USP y
EP. 6,12
REACTIVOS
Fórmulas: consultar la Tabla 1
PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, agrietamientos o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biólogicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura entre 2 y 8 °C,
envueltas en su envase original, hasta justo antes de usarlas. Evitar la congelación y el
calentamiento excesivo. Las placas pueden inocularse hasta su fecha de caducidad (ver la
etiqueta en el paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
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Las placas de grupos de 10 placas ya abiertos pueden usarse durante una semana siempre
que se almacenen en un lugar limpio a una temperatura entre 2 y 8 °C.
Tabla 1: REACTIVOS
Fórmulas* por litro de agua purificada
Nombre del
producto
Ingredientes
Digerido
pancreático de
caseína
Digerido péptico de
tejido animal
Glucosa
Agar
Penicilina G
Estreptomicina
Gentamicina
Cloranfenicol
pH
BD Sabouraud
Glucose Agar
BD Sabouraud
Agar with
Penicillin and
Streptomycin
BD Sabouraud
Agar with
Gentamicin and
Chloramphenicol
BD Sabouraud
Glucose Agar with
Chloramphenicol
5,0 g
5,0 g
5,0 g
5,0 g
5,0 g
5,0 g
5,0 g
5,0 g
40,0
15,0
–
–
–
–
pH 5,6 ± 0,2
40,0
15,0
60000 UI
0,06 g
–
–
5,6 ± 0,2
40,0
15,0
–
–
0,04
0,4
5,6 ± 0,2
40,0
15,0
–
–
–
0,4
5,6 ± 0,2
* Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las siguientes cepas (para más detalles, consultar el
documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Véase la información de incubación en
la nota al pie.
Nombre del
producto
BD Sabouraud
Glucose Agar
BD Sabouraud
Agar with
Penicillin and
Streptomycin
BD Sabouraud
Agar with
Gentamicin and
Chloramphenicol
BD Sabouraud
Agar with
Chloramphenicol
Cepas de prueba
**Candida
Crecimiento de
bueno a
Crecimiento de bueno a excelente
albicans
ATCC 10231
excelente
**Saccharomyces
Crecimiento de
Crecimiento de bueno a excelente
bueno a
cerevisiae
excelente
DSM 1333
Crecimiento de
** Aspergillus
Crecimiento de bueno a excelente
bueno a
brasiliensis
excelente
ATCC16404
** Penicillium
Crecimiento de
bueno a
Crecimiento de bueno a excelente
roquefortii
ATCC 9295
excelente
Crecimiento de
***Trichophyton
Crecimiento de bueno a excelente
bueno a
mentagrophytes
excelente
ATCC 9533
*Staphylococcus
Sin inhibición
Inhibición completa.
aureus
ATCC 25923
*Escherichia coli
Sin inhibición
Inhibición completa.
ATCC 25922
Sin inocular
Ámbar claro
Incubación: *48 h 35-37° C / **</= 5 days, 20-25° C, atmósfera aerobia
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PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados:
BD Sabouraud Glucose Agar,
BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol,
BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol, o
BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin, todos suministrados en placas
Stacker de 90 mm. Controladas microbiológicamente.
Materiales no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Los productos descritos en este documento son medios de aislamiento para hongos y pueden
utilizarse (alternativamente o en combinación de dos de dichos medios) para todas las muestras
clínicas (véase también CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL
PROCEDIMIENTO). Los medios también se pueden utilizar en muchas áreas de microbiología
industrial y en el control de la higiene.
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio. La
placa de extensión se utiliza principalmente para aislar cultivos puros de las muestras que
contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva directamente empleando una
torunda, hacerla girar en una sección pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de
esta área inoculada.
 Si las muestras están formadas por raspados de piel, cabello o uñas, colocar el material en
el centro de la superficie del medio. Si es posible, las partículas más grandes deben
presionarse levemente sobre la superficie mediante pinzas estériles para proporcionar
contacto con el medio.
 Para la detección de dermatofitos, también se incluye BD Dermatophyte Agar o BD
Mycosel Agar.
 Si se utiliza BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol, BD Sabouraud Agar with
Gentamicin and Chloramphenicol o BD Sabouraud Agar with Penicillin and
Streptomycin, utilizar además una placa de BD Sabouraud Glucose Agar.
 También debe inocularse un medio no selectivo tal como BD Columbia Agar with 5%
Sheep Blood para proporcionar una indicación de los patógenos bacterianos presentes en
la muestra.
Si se utiliza para la detección de levaduras (por ejemplo, la especie Candida) en las muestras
clínicas, incubar durante 48 horas a 30 – 35 °C. Si se sospechan hongos filamentosos, incluidos
los dermatofitos, incubar hasta un máximo de una semana a 25 – 30 °C. Los dermatofitos a
veces necesitan tres semanas o más para producir crecimiento. Si se utiliza para control de la
higiene, incubar durante un máximo de 7 días a 20 – 25 °C. Si la incubación es más prolongada
que 3 días, proporcionar la humedad adecuada. Las placas pueden sellarse con cinta de
plástico adhesiva para evitar la deshidratación. Para obtener detalles acerca de la temperatura
de incubación para crecimiento, consultar las referencias5,7-10.
Resultados
Después de una incubación suficiente, las placas pueden mostrar colonias aisladas en las áreas
extendidas y crecimiento confluente en áreas de inoculación densa.
Examinar la posible presencia de colonias fúngicas con color y morfología habituales en las
placas. Realizar pruebas bioquímicas y procedimientos microscópicos y serológicos para
confirmar los resultados 6-9.
Dado el gran número de hongos patógenos existentes, no se dan detalles acerca de su
apariencia en este documento. Consultar las referencias2,3, 5-9.
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CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Los medios presentados en este documento son medios estándar para el aislamiento y cultivo
de hongos para todo tipo de muestras clínicas y no clínicas4-11.
Debido al amplio intervalo de temperaturas de crecimiento de los hongos, puede ser necesario
inocular varias placas con el mismo medio e incubarlas a diferentes temperaturas. Consultar la
sección Procedimiento de análisis y las referencias correspondientes5, 7-10.
Dado que BD Sabouraud Glucose Agares presenta selectividad débil, crecerán bacterias en el
medio, en especial después de un periodo de incubación prolongado. Si se sospecha
contaminación bacteriana de las muestras, materiales o áreas objeto de investigación, deben
utilizarse medios con una selectividad mayor, por ejemplo BD Sabouraud Agar with
Chloramphenicol, BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol o BD
Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin para el cultivo de la muestra.
Nocardia y Actinomyces son bacterias filamentosas (¡no son hongos!) y, por lo tanto, no crecen
en todos los medios Sabouraud con inhibidores bacterianos.
REFERENCIAS
1. Sabouraud, R. 1892. Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique,
microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann.
Dermatol. Syphil. 3: 1061-1087.
2. Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle. 1980. Cumitech 11, Practical methods for culture
and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C.
Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman. 1963. CDC laboratory manual for
medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington,
D.C.
4. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical
bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore.
5. Sutton, D.A. 2003. Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray,
P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc. 2009. The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary
27--2009. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA
7. Larone, D.H. 2002. Medically important fungi: a guide to identification. 4th ed. American
Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Summerbell, R.C. 2003. Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of
superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H.
Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett. 1992. Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia.
10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.). 2003. Mycology. In: Murray, P. R., E. J.
Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical
microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
11. Brun, S., et al. 2001. Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol
agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: 718-723.
12. Council of Europe, 2008. European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia
Secretariat. Strasbourg/France.
ENVASE/DISPONIBILIDAD
BD Sabouraud Glucose Agar
Nº de cat. 254039
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 254083
Medios en placa listos para usar, 120 placas
BD Sabouraud Agar with Chloramphenicol
Nº de cat. 254091
Medios en placa listos para usar, 20 placas
PA-254039.07
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BD Sabouraud Agar with Gentamicin and Chloramphenicol
Nº de cat. 254041
Medios en placa listos para usar, 20 placas
Nº de cat. 254096
Medios en placa listos para usar, 120 placas
BD Sabouraud Agar with Penicillin and Streptomycin
Nº de cat. 254451
Medios en placa listos para usar, 20 placas
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