Terapia génica. Vectores de expresión - Universidad de Castilla

ÁMBITO FARMACÉUTICO
GENÉTICA
Terapia génica. Vectores de expresión
JUANA ROZALÉNa, VALENTÍN CEÑAb Y JOAQUÍN JORDÁNc
a
Licenciada en Químicas.
Catedrático de Farmacología en la UCLM.
c
Profesor titular de Farmacología en la UCLM.
Centro Regional de Investigaciones Biomédicas. Universidad de Castilla-La Mancha (joaquin.jordan@uclm.es).
b
En las últimas décadas se ha producido el desarrollo de una de las ramas
más fascinantes de la biología: la tecnología del ADN recombinante,
que permite la manipulación del genoma de un individuo,
con aplicaciones tanto desde el punto de vista terapéutico como comercial,
al ofrecernos no sólo el desarrollo de nuevos métodos de diagnóstico,
sino también la transferencia de información genética.
A
unque la mayor parte de los
avances que ha hecho posible
el desarrollo de la tecnología del
ADN recombinante son resultado
de investigaciones realizadas en las
cuatro o cinco últimas décadas
(tabla 1), la historia realmente se
inició cuando los babilinios y egipcios produjeron frutos por fecundación artificial y aunque Sócrates
(420 a.C.) hipotetizó que los padres
no se parecían a los hijos, «los hijos
de grandes hombres de estado
generalmente son perezosos o bue102 OFFARM
nos para nada», ya Hipócrates (400
a.C.) afirmó que el hombre transmite las características hereditarias
en el semen (semilla) y que debe
haber otro fluido en la mujer, siendo el aporte aproximadamente
igual. Más tarde, los hindúes observaron que ciertas enfermedades
aparecían en las familias y Manú
(100-300 d.C.) nos dijo que «el
hombre no puede escapar a sus orígenes». Aunque no fue hasta
mediados del siglo XIX , con las
investigaciones independientes de
Charles Darwin y Gregor Mendel,
cuando realmente comenzó el concepto actual de genética.
Charles Darwin (1809-1882),
conocido como padre de la biología
moderna, fue el primero en describir que las especies no eran fijas e
inalterables, sino capaces de evolucionar durante el tiempo, y que
sólo los individuos cuyos rasgos
favorecieran la supervivencia y la
reproducción se mantendrían y se
propagarían. De forma casi simultánea, Gregor Mendel (1823-1884)
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GENÉTICA
estableció los fundamentos de la
genética moderna, realizando
experimentos con plantas y estudiando las leyes básicas que controlan la herencia, llegando a la
conclusión de que los rasgos o
características hereditarias son
transportados y transmitidos a los
descendientes como unidades discretas, originando el concepto de
gen, aunque el término propiamente dicho no se utilizara hasta
comienzos del siglo XX.
Quizás, debido a que Mendel
sólo describió el comportamiento
esencial de los genes sin revelar su
naturaleza química, ni identificar
el material genético, el punto de
inflexión de la sucesión imparable
de descubrimientos fue la descripción de la estructura del ADN por
Watson y Crick (1953). De esta
forma, comenzó el conocimiento y
la comprensión de la estructura y
funciones del ADN hacia la
segunda mitad del siglo XX, desarrollándose el concepto de ácido
nucleico como macromolécula
básica que contiene la información
genética o interviene en su descodificación y describiéndose dos clases, el ácido desoxirribonucleico
(ADN) y el ácido ribonucleico
(ARN). Estos avances permitieron
a los científicos, en la década de los
setenta, el desarrollo de técnicas
capaces de combinar segmentos y
transferir porciones de ADN de un
organismo a otro, dando lugar a la
aparición de la Genética Molecular.
Esta ciencia abarca desde la replicación del ADN, pasando por la trascripción, o copia del ADN a ARN,
hasta la traducción o síntesis de
proteínas que son en realidad las
efectoras de la función codificada
en el ADN. El perfeccionamiento
de estas técnicas ha permitido
conocer que el origen de numerosas
enfermedades es el resultado de
alteraciones en la expresión y funcionalidad de proteínas, por lo que
hoy día se utilizan para el diagnóstico de enfermedades que presentan desórdenes genéticos.
La transducción de genes foráneos
en organismos vivos comenzó con la
observación de que el ADN aislado
podía ser introducido en células en
cultivo y éste se integraba al genoma y sintetizaba la proteína correspondiente en la célula receptora.
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Durante este trabajo revisaremos
los avances que han tenido lugar
en las técnicas y vectores utilizados
en la aplicación terapéutica, dejando para un segundo artículo las
aplicaciones que se están llevando
a cabo en este campo.
La terapia génica presenta tres
componentes indisociables y necesarios: el primero, un gen de interés del cual se espera que la expresión en una célula normal se acompañe de un efecto terapéutico. El
segundo lo constituye la célula
blanco, sobre la cual hay que realizar la modificación y el tercero es
el vector, vehículo que transporta
el material genético y permite su
introducción en la célula blanco.
Entendemos por vectores
a los sistemas
que utilizamos como
ayuda en el proceso
de transferencia de
un gen exógeno
al interior de la célula
dimiento se utiliza cuando las
células diana son células o tejidos
que presentan la capacidad de
renovarse a partir de células precursoras, como es el caso de la piel,
los endotelios, el hígado o los mioblastos musculares. Ejemplos de
esta estrategia están representados
por la modificación de linfocitos T
en el tratamiento de la deficiencia
en adenosina desaminasa de hepatocitos en la hipercolesterolemia
familiar y de linfocitos infiltradores
de tumores en algunas enfermedades neoplásicas. La tercera y última
estrategia la constituye la terapia
génica in situ o somática que consiste en la introducción de las modificaciones genéticas en las células
somáticas de un organismo sin
modificar las células germinales.
Vectores
Entendemos por vectores a los sistemas que utilizamos como ayuda
en el proceso de transferencia de
un gen exógeno al interior de la
célula. Ellos facilitan la entrada y
biodisponibilidad intracelular del
material genético a transducir y,
por consiguiente, su funcionamiento correcto. Se ha utilizado
una gran variedad de vectores con
fines experimentales y de forma
Los diferentes modelos experi- genérica los podemos clasificar en:
mentales sobre los que se lleva a vectores no virales y vectores viracabo la manipulación genética se les (tabla 2).
clasifican, en in vivo, ex vivo e in
situ, dependiendo del tipo de Vectores no virales
muestra y del método utilizado. Los vectores no virales engloban
En el procedimiento in vivo se ino- aquellas técnicas de transducción
cula al paciente directamente con donde el material genético es introel vector y los genes a transducir ducido utilizando tanto métodos
alcanzan las células diana a través químicos (fosfato cálcico, liposodel torrente circulatorio, utilizán- mas) como físicos (biobalística,
dose este método para el trata- electroporación, microinyección).
miento de enfermedades tales
Los vectores químicos fueron los
como la fibrosis quística y algunas primeros en utilizarse, alguno de
neoplasias. En el proceso ex vivo se ellos, como el fosfato de calcio y
realiza la corrección del defecto los liposomas, en la década de los
genético en células extraídas del sesenta y setenta del siglo pasado
propio paciente que son cultivadas aunque no se lograron buenas efiy modificadas genéticamente en el ciencias en la transducción hasta
laboratorio y que, al dividirse, mediados de los ochenta. La utilitransmiten el transgén a sus célu- zación del fosfato de calcio se basa
las hijas, devolviéndose al paciente en la capacidad que presentan los
sólo aquellas poblaciones celulares iones calcio para precipitar el
en las que se ha comprobado la ADN provocando que la célula,
integración y funcionamiento mediante endocitosis, introduzca
correcto del transgén. Este proce- el ADN en su interior. No es una
OFFARM
103
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Tabla 1. Hitos de la biotecnología y de la tecnología del ADN recombinante
1859
1865
1869
1902
1939
1941
1944
1946
1948
1950
1953
1970
1972
1973
1976
1977
1978
1979
1982
1983
1985
1987
1988
1990
1991
1994
1995
1997
1998
2000
2003
Darwin publica El origen de las especies
Mendel demuestra que las características heredadas son llevadas en
unidades discretas que se reparten por separado en cada generación
Miescher descubre los ácidos nucleicos
De Vries denomina mutaciones a los cambios hereditarios repentinos
Se crea la expresión «biología molecular»
Se demuestra que los genes controlan la síntesis de enzimas
Se descubre que el ADN es material genético
Se sabe que Escherichia coli transfiere material genético de un organismo a otro
Los investigadores descubren que el código genético determina el tipo de
proteína a ser sintetizada
Se da con la composición química de los ácidos nucleicos
Descubrimiento de la estructura de la doble hélice
– Se sintetiza in vitro un gen completo
– Descubrimiento de la primera endonucleasa de restricción específica de
secuencia y de la enzima transcriptasa inversa
Se consiguen las primeras moléculas de ADN recombinante
Se comienzan a utilizar los vectores plasmídicos para la donación de genes
Primer diagnóstico prenatal utilizando una sonda específica de gen
Se desarrollan los métodos de secuenciación rápida del ADN
Se construye la primera genoteca humana
– Se sintetiza la insulina utilizando ADN recombinante
– Clonación del primer antígeno viral humano (hepatitis B)
Producción comercial por E. coli de insulina humana
Se utilizan plásmidos Ti diseñados mediante ingeniería genética para
transformar plantas
Se desarrolla la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa
La inserción de un gen funcional en un óvulo de ratón fertilizado cura la
enfermedad por mutación de Shiverer
Primera producción de un cultivo de soja
– Primer maíz fértil transformado con un gen foráneo
– Se inicia el Proyecto Genoma Humano
– Primeros cerdos y cabras transgénicos capaces de fabricar proteínas
como la hemoglobina humana
– Primera prueba de terapia génica en pacientes humanos con cáncer
– Tomate Flavr Savr es el primer alimento completo elaborado mediante
ingeniería genética aprobado para la venta
– Producción de anticuerpos monoclonales totalmente humanos en ratones
diseñados mediante ingeniería genética
Se descubre la secuencia del genoma de Haemophilus influenzae
Ensayos clínicos con fármacos antisentido y vacunas de ADN
Clonación del primer mamífero (oveja Dolly)
Secuenciación del genoma de C. elegans
– Primer borrador del genoma humano
– Secuenciación del genoma de Drosophila
– Muere la oveja Dolly
– Reprogramación de las células adultas con las técnicas de clonación
técnica que provoque toxicidad en
las células, pero la expresión del
transgén es transitoria y con una
eficacia de transfección cercana al
10%. Su utilización se ve reducida
a cultivos celulares en aplicaciones
ex vivo. Los liposomas constituyen
bolsas rodeadas de una membrana
lipídica, a semejanza de una célula
eucariota animal, capaces de introducir ADN en la célula diana. Los
liposomas catiónicos interaccionan
tanto con el material genético a
transferir como con las membranas
celulares que deben atravesar,
debido a la presencia de cargas
netas negativas originadas por los
104 OFFARM
grupos fosfato en el ADN y por
residuos del ácido siálico de la
superficie celular. Así, los lípidos
catiónicos condensan el ADN y, ya
en forma de complejos transfectantes, se unen a las proteínas azucaradas de la membrana plasmática
mediante enlaces electrostáticos.
Los complejos transfectantes con
carga neta positiva utilizan las proteínas azucaradas de la membrana
plasmática para fijarse en la célula.
Los lípidos catiónicos interaccionan
con las cargas negativas del ADN
condensándolo, mientras que los
transportadores catiónicos interaccionan con las cargas negativas que
presenta la membrana celular gracias al exceso de cargas positivas,
mediante enlaces electrostáticos.
Una condensación controlada del
ADN permite la formación de partículas, con un diámetro de 50-150
nanómetros, que contienen una sola
molécula de ADN, hecho que facilita notablemente la penetración en las
células y posteriormente en el
núcleo. Se produce la captura del
100% de los complejos estables de
polinucleótidos por atracción de cargas y los lípidos se absorben a la
membrana celular debido a propiedades de fusión, liberando el ácido
nucleico directamente dentro del
citoplasma. De esta manera se evita
la degradación lisosomal. Este vector
no plantea problemas en modelos in
vitro, sin embargo, in vivo su eficacia
se encuentra disminuida, llegando
incluso en algunas ocasiones a una
eficacia nula. Entre ellos destacan el
DMRIE (dimiristiloxi-propil-3dimetil-hidroxietilamonio/DOPE),
o las combinaciones DMRIE/DOPE
y DC-chol/DOPE. En cultivos de
células eucariotas se utiliza con frecuencia la lipofectamina, un liposoma de formulación 3:1 (w/w) del
lípido policatiónico 2,3-dioleiloxiN-[2(sperminecarboxamido)etil]N,N-dimetil-1-propanaminio trifluoroacetato (DOSPA) y el lípido
neutro dioleoil fosfatidil etanolamina (DOPE) en agua.
La buena eficiencia en el reparto
de ADN in vivo de liposomas policatiónicos aunque presentan una
baja eficiencia de transfección,
constituye una alternativa atractiva
a los métodos de transferencia viral
al no presentar limitaciones en el
tamaño del ADN a transducir y
tener una baja inmunogenicidad.
Los liposomas suelen ser administrados por vía intravenosa, con la
ayuda de catéteres, presentando
muy buenos resultados en las células de pulmón e hígado, quizás
debido a que los complejos transfectantes se unen a partículas de
gran tamaño, lo que impide que
puedan abandonar eficazmente el
sistema vascular, siendo retenidas
mecánicamente por filtros naturales, como los pulmones y el hígado.
Como último ejemplo de los
vectores químicos, citaremos la
transferencia de genes mediante
receptores. La inserción de moléVOL 22 NÚM 8 SEPTIEMBRE 2003
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culas, que serán reconocidas por
receptores presentes en el tipo
celular elegido al vector del material génico, hace de esta técnica un
método direccionable, al ser posible establecer una interacción vector/célula muy específica. La naturaleza de los ligandos es muy
variada y comprende azúcares,
péptidos y hormonas. Hoy día, se
utilizan ligandos capaces de desestabilizar las membranas de los
endosomas sólo a pH ácidos, con
lo que se evita la degradación de
los vectores por los complejos
enzimáticos del lisosoma.
El primero de los vectores físicos
que vamos a estudiar se conoce
como disparo de partículas, biolística o bombardeo de microproyectiles.
En él, el plásmido de ADN a transferir es situado sobre la superficie de
pequeñas gotas de 1 a 3 micras de
diámetro de oro o tungsteno que
posteriormente son aceleradas, «disparadas» bien mediante una descarga eléctrica o por un pulso de gas,
hacia la célula diana. La fuerza física
del impacto supera la barrera de la
membrana celular. Aún así, la capacidad de penetración es limitada y se
utilizan con frecuencia en cultivos
de líneas celulares, epidermis, músculo e hígado.
Los microproyectiles constituyen
un método efectivo de transferir
genes en modelos tanto in vitro
como in vivo. Entre las ventajas
que presenta este método, y que le
confieren un potencial de aplicabilidad general, destacan su fácil
manejo y que un único disparo
puede producir integraciones múltiples. Sin embargo, presenta algunas desventajas, como que en la
zona de descarga se produce muerte celular; además, dependiendo de
la rigidez de los tejidos, la procedencia del ADN extraño y la capacidad de transcripción intrínseca
aparecen grandes variaciones en la
eficiencia de la expresión de los
genes. Así, la expresión conseguida suele ser transitoria y con una
frecuencia relativamente baja, cercana a 10 –4, tan sólo se logra la
integración efectiva en el genoma
10-8 de las células expuestas, lo que
hace que se requieran grandes
dosis para alcanzar el éxito. Este
hecho limita la biobalística en la
aplicación de la terapia génica. Sin
embargo, ensayos con animales
muestran que podría ser aplicado
de forma directa como parte de
protocolos de vacunación. Además,
presenta una utilización potencial
en la transformación de células
vegetales, en la creación de plantas
transgénicas tanto monocotiledóneas (maíz, arroz, trigo, avena y
caña de azúcar) como en dicotiledóneas (soja, tabaco y algodón).
Cuando se lleva
a cabo la inyección
directa de la parte
codificadora a un tejido
se conoce como técnica
«ADN desnudo»
Otro método físico es la microinyección, en el que el ADN es
introducido por inyección directamente en el núcleo de las células
gracias a la ayuda de un micromanipulador, evitando de este modo
la degradación citoplasmática y
lisosomal. Las células que sobreviven este daño y han insertado el
material genético presentan una
alta eficacia de su expresión. Esta
técnica es muy laboriosa y necesita
células aisladas para su realización.
Tabla 2. Vectores utilizados en terapia génica
Físicos
Vectores no virales
Químicos
Vectores virales
Biobalística
Electroporación
Microinyección
Fosfato cálcico
Liposomas
Receptores
106 OFFARM
Retrovirus
Adenovirus
Virus asociados a adenovirus
Herpes simples
Se suele utilizar con frecuencia en
estudios ex vivo, aunque también
en la terapia génica germinal, un
método in vivo donde se lleva a
cabo la microinyección directa de
«ADN desnudo» en los pronúcleos
del óvulo recién fecundado o en el
citoplasma. En vertebrados inferiores e invertebrados es la técnica de
transferencia de genes más utilizada
y en mamíferos ha resultado exitosa. Los embriones suelen tolerar la
microinyección de genes para, posteriormente, ser cultivados in vitro
hasta un estado de desarrollo más
avanzado, blastocito, y ser transferidos en las hembras adoptivas. Aunque los primeros individuos transgénicos obtenidos mediante este método fueron ratones, se realiza con
éxito en vacunos, ovejas, cabras,
conejos y cerdos. La eficiencia inicial
de integración génica obtenida fue
tan sólo de un 2%, aunque hoy día
se alcanzan niveles cercanos al 30%
del total de embriones tratados.
Cuando se lleva a cabo la inyección directa de la parte codificadora a un tejido se conoce como técnica «ADN desnudo». En ella, el
ADN es vehiculizado en una solución salina o sérica y normalmente
administrado mediante inyección
intramuscular. El mecanismo por
el que entra en la célula diana permanece siendo un enigma. Esta
técnica presenta un porcentaje
bajo de transfección y no se logra
la integración en el genoma. Se
utiliza en la terapia génica in vivo,
aunque los calores y persistencia
de la expresión de genes son probablemente demasiado cortos
(días). Entre sus ventajas destacan
el ser un método directo, simple,
económico y con una baja toxicidad. El «ADN desnudo» está siendo utilizado como procedimiento
de vacunación, ya que aunque el
valor de expresión de los genes es
bajo, resulta suficiente para alcanzar una respuesta inmunológica.
Como último ejemplo de vector
físico citaremos la electroporación.
La aplicación de una corriente eléctrica a células es capaz de abrir
poros en la membrana celular que
permiten la entrada del gen en su
interior. Entre sus ventajas se
encuentran que las células pueden
ser aisladas del organismo y sometidas a un control de calidad en el que
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Tabla 3. Ventajas e inconvenientes de los vectores virales
Vector
Ventajas
Inconvenientes
Retrovirus
– Integración estable
– Fácil manejo
– No provocan respuesta inmune
– Transducción eficiente
Adenovirus
– Células en reposo o replicación
– Episomales
– Estables in vivo
– Títulos altos
Adenoasociados – Células en reposo o replicación
– Posible integración específica
– Poco inmunogénicos
– Títulos altos
– No son patógenos en humanos
Herpes virus
– Células en reposo
– Episomales
– Adecuados para el sistema
nervioso
se realiza una selección de las mejores células que son cultivadas en el
laboratorio antes de ser implantadas
en el paciente. Entre sus desventajas
está el hecho de que muchas células
mueren al no soportar el choque
eléctrico, por lo que no es la forma
más indicada en algunos tipos celulares, aunque sí en células con una
alta tasa de proliferación.
Vectores virales
Hasta hace unos años, cuando pensábamos en los virus nos imaginábamos un agente infeccioso responsable de numerosas enfermedades o unas partículas extremadamente pequeñas que sólo pueden
observarse gracias al microscopio
electrónico y que, aunque presentan material genético propio, son
incapaces de replicarse por sí mismos. Sin embargo, hoy día este
concepto empieza a cambiar y los
virus empiezan a ser considerados
como herramientas de trabajo, vectores, que sirven para introducir
material genético con fines terapéuticos en las células diana.
En la tabla 3 se resumen las ventajas y desventajas presentadas por
los vectores virales utilizados en
terapia génica entre los que destacaremos los retrovirus, adenovirus
y el herpes simple.
Los virus no pueden ser utilizados directamente como se encuentran en la naturaleza, necesitan ser
modificados para poder ser utilizados como vectores. Es necesario
convertirlos en entes deficientes en
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– Bajo título
– Posible mutación insercional
– Extinción del transgén in vivo
– Requieren proliferación celular
– Respuesta inmune e inflamatoria
– Direccionabilidad difícil
– Difícil manejo
– Poca longitud del transgén
– Difíciles de producir en gran
cantidad
– No parecen transducir a todo
tipo de células in vivo
– Posible mutación insercional
– Patogenicidad
– Difícil manejo
replicación en el interior de la
célula diana. Se trata, por tanto, de
producir una anulación parcial del
genoma viral. Frecuentemente se
retiran regiones codificadoras de
algunas proteínas estructurales
como gag, pol y env en los vectores
retrovirales, o de los elementos E1
en adenovirus, que son remplazadas por el gen o genes de interés.
Estas partículas son incapaces de
Los vectores
retrovirales fueron
la estrategia pionera
en la terapia genética,
en las técnicas ex vivo
replicarse, pero mantienen la capacidad de infectar. Así, el vector
viral sólo podrá multiplicarse o
crecer en cultivos de líneas celulares modificadas genéticamente que
sobreexpresan la parte genoma
viral que ha sido delecionado; a
estas células se las conoce como
«células de empaquetamiento». La
cantidad de ADN que puede ser
insertado en un vector viral varía
dependiendo del tipo. Con todo,
los vectores virales presentan el
inconveniente de que, junto a la
información genética que pretendemos transducir, se encuentra el
material genético propio del virus
y que, en algunos casos, al igual
que los adenovirus, pueden resultar inmunogenéticas.
De forma muy breve revisaremos
algunas de las características más
interesantes de los vectores virales
más utilizados. En la tabla 3 se
muestra una relación de esas ventajas e inconvenientes.
Los vectores retrovirales fueron la
estrategia pionera en la terapia genética, en las técnicas ex vivo. Sin
embargo, los niveles de expresión en
una variedad de tipos celulares eran
considerablemente mayores en cultivo que después de ser trasplantados,
presentando además una expresión
transitoria en las células transducidas in vivo. Las formas deficientes en
replicación de estos vectores se
obtienen remplazando las regiones
codificadoras para las proteínas
estructurales gag, pol y env por el gen
o genes de interés, lo que permite la
incorporación de cADN de hasta 8
kb. El uso de vectores retrovirales
presenta entre sus principales ventajas su eficaz transducción, su integración genómica y la expresión persistente. Cabe resaltar que estos vectores presentan como desventajas la
derivación oncogénica, rara inserción
y dependencia de la división celular.
Los vectores adenovirales son virus
no envueltos de doble cadena de
ADN. Son deficientes en replicación
y requieren de un sistema de complementación que es la línea celular
HEK293 (Human Embryonic Kidney
293) modificada para que produzca
constitutivamente los elementos E1
virales, que son suprimidos en el
vector adenoviral.
Entre las ventajas de este vector
viral destacamos que pueden insertar hasta 20 kb de gen, además de
transducir células con gran número de partículas virales y de infectar células tanto en reposo como
en división. Sin embargo, presentan el inconveniente de expresar
varias proteínas virales que resultan inmunogenéticas, lo que conduce a una separación más rápida
del vector y las células transducidas. Además, la transducción repetida no es satisfactoria normalmente, a menos que la exposición
inicial esté acompañada de una
OFFARM
107
GENÉTICA
modulación inmunológica para
suprimir la respuesta inicial a las
proteínas de la cápsula adenoviral.
Debido a la falta de integración
del vector, la expresión de los niveles disminuye en el curso de pocas
semanas hasta varios meses, haciendo necesaria la administración reiterada de vectores adenovirales en
algún momento que puede resultar en respuestas inmunes e inactivación del vector.
Los vectores no virales
resultan más económicos
y más fáciles de producir
que los virales
Hoy día, disponemos de virus asociados a los adenovirus que son capaces de integrar de forma específica
en el cromosoma 19 humano. Sin
embargo, éstos se han visto relegados a un plano más discreto cuando
se observó que esta integración específica no ocurría con los vectores
derivados de estos virus, el tamaño
del gen a transducir es bastante
limitado (menos de 4 kb), y sólo
transducirían células en presencia de
un adenovirus. Actualmente se están
construyendo vectores VAA adenovirales híbridos, que presentan la
habilidad de los vectores VAA de
integrar con la ventaja de poder acomodar grandes fragmentos de ADN.
Como último ejemplo de vector
viral estudiaremos aquellos que
derivan del herpes virus, que
resultan interesantes debido a su
tropismo específico por el sistema
nervioso central, el tamaño del gen
que pueden vectorizar y su alto
título. Sin embargo, es un sistema
que apenas está desarrollado; los
producidos hasta el momento sólo
permiten expresión transitoria del
gen de interés y su eficiencia de
transducción es baja.
Conclusiones
El éxito de la terapia génica se
fundamenta en los siguientes
requisitos:
108 OFFARM
– Una transferencia eficaz en las
células diana.
– La estabilidad de los genes
introducidos, que deben integrarse,
preferiblemente, en un lugar específico del genoma de la célula blanco.
– La consecución de una expresión estable y apropiada de la
información genética introducida.
A pesar de los avances obtenidos
en el diseño de los diferentes tipos
de vectores, hasta el momento ningún sistema vectorial cumple con
todas las condiciones para convertirlo en ideal. Los vectores no virales
resultan más económicos y más fáciles de producir que los virales; además, su falta de antigenicidad hace
posible que puedan ser administrados repetidamente y con menores
riesgos patológicos que los vectores
virales. Con todo, los sistemas virales resultan más eficientes y presentan niveles de expresión más altos y
duraderos en el tiempo. Los vectores
retrovirales son los más utilizados,
por lo que debido a su eficiencia y
seguridad se han iniciado ya los primeros ensayos clínicos. ■
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