N Antisera to Human Immunoglobulins (IgG, IgA and IgM)

N Antisera to Human Immunoglobulins (IgG, IgA and IgM)
Intended Use
In vitro diagnostic reagents for the quantitative determination of immunoglobulins (IgG, IgA and IgM) in
human serum as well as of IgG in human urine and cerebrospinal fluid (CSF) using the BN* Systems.
Summary and Explanation
Immunoglobulins are formed by plasma cells as a humoral immune response to contact of the
immune system with antigens. The primary reaction after the initial contact is the formation of antibodies of the IgM class followed later by IgG and also IgA antibodies. Quantitative determination of
the immunoglobulins can provide important information on the humoral immune status. Decreased
serum immunoglobulin concentrations occur in primary immunodeficiency conditions (1, 2) as well
as in secondary immune insufficiencies (3), e.g. in advanced malignant tumours, lymphatic leukaemia, multiple myeloma and Waldenstrom’s disease. Increased serum immunoglobulinconcentrations occur due to polyclonal or oligoclonal Ig proliferation, e.g. in hepatic diseases (hepatitis,
liver cirrhosis), acute and chronic infections, autoimmune diseases as well as in the cord blood of
neonates with intra-uterine and perinatal infections (4, 5). Monoclonal immunoglobulin proliferations
in the serum are found e.g. in plasmacytomas, Waldenstrom’s disease and heavy-chain disease
(6). Monoclonal immunoglobulinaemia requires detailed differential diagnostic investigations in addition to the quantitative determination. Local immune reactions result in elevated immunoglobulin
levels, particularly IgG, in the cerebrospinal fluid (7). Elevated urinary concentrations of IgG are
found in patients with non-selective glomerular proteinuria (8).
Principle of the Method
Reagents
Materials provided
N Antiserum to Human IgG, Code No. OSAS or
N Antiserum to Human IgA, Code No. OSAR or
N Antiserum to Human IgM, Code No. OSAT
1 vial each, containing 5 mL or 2 mL
Composition
N Antisera are liquid animal sera and are produced by immunization of rabbits with highly purified
human immunoglobulin (IgG, IgA or IgM). Labile components are removed from the antisera by a
special procedure. Microbial contamination is essentially excluded by filtration and addition of sodium azide as a preservative (< 1 g/L). After solid phase immunoadsorption, the purified, specific
antisera are specially tested and adjusted such that optimal suitability for use on the BN* Systems is
guaranteed. The antibody titers (T) are determined by radial immunodiffusion and are printed on the
vial labels. The titers indicate the quantity of antigen in mg which will be precipitated in an agarose
gel by 1 mL of the corresponding antiserum.
Warnings and Precautions
1. For in vitro diagnostic use.
2. Reagents containing sodium azide must be handled with due caution:
Do not ingest or allow to contact skin or mucous membranes! Sodium azide can form explosive
azides when contacting heavy metals such as copper or lead.
Preparation of Reagents
The N Antisera are ready-for-use as supplied and require no additional preparation.
Storage and Stability
Shelf life at +2 to +8 °C:
see expiration date given on the label;
Stability once opened:
four weeks if stored at +2 to +8 °C securely capped immediately after each use and contamination (e.g., by
microorganisms) is precluded; During storage, N Antisera can develop precipitates or turbidity which are
not caused by microbial contamination and which do not affect their activity. In such cases, the antiserum
should be filtered prior to use. Disposable filters with a pore size of 0.45 µm are suitable for this purpose.
Do not freeze.
On-board stability:
five days at 8 hours each or a comparable period of time (maximum 40 hours);
BN* II System: on-board stability may be extended by the use of BN* II Evaporation Stoppers (Code
No. OVLE) as given in the Instruction Manual;
BN ProSpec** System: on-board stability as given in the Instruction Manual.
Materials required but not provided
BN* System
N Protein Standard SL (human), Code No. OQIM
N/T Protein Control SL/L, M and H (human), Code Nos. OQIN, OQIO and OQIP
N/T Protein Control LC (human), Code No. OQLW
N Reaction Buffer, Code No. OUMS
N Diluent, Code No. OUMT
N Supplementary Reagent/Precipitation, Code No. OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (optional), Code No. OVLE
Other materials and supplies as described in the respective BN* System Instruction Manual.
Specimens
Suitable samples are human serum, as fresh as possible (stored no more than 8 days at +2 to +8 °C) or
stored deep-frozen. Fresh human urine and CSF samples are also suitable. Serum samples can be
stored at below -20 °C for up to 1 year if they are frozen within 24 hours after collection and if repeated
freeze-thaw cycles are avoided. The serum samples must be completely coagulated and, after centrifugation, must not contain any particles or traces of fibrin. Lipemic samples or frozen samples which
became turbid after thawing must be clarified by centrifugation (10 minutes at approximately 15,000 x g)
prior to testing. Random and timed urine collections are suitable specimens for testing IgG in urine.
Urine samples must not be frozen. Each urine and CSF sample must be centrifuged prior to testing.
Procedure
Notes
1. Consult your BN* System Instruction Manual for details regarding operation of the instrument.
2. The reagents must not be used beyond the expiry date.
3. Allow reagents and samples to equilibrate to room temperature (+15 to +25 °C) before use on
the BN* A/BN* 100 System. This equilibration step is not required prior to testing on the BN* II or
BN ProSpec** System.
Assay Protocols for BN* Systems
The assay protocols are given in the Instruction Manual and software of the instrument. All steps are
performed automatically by the system.
Establishment of the Reference Curve
Reference curves are constructed by multi-point calibration. Serial dilutions of N Protein Standard
SL are automatically prepared by the instrument using N Diluent.
The reference curves can be used for as long as the accuracy controls, e.g. N/T Protein Control SL/
L, M and H or N/T Protein Control LC are reproduced within their respective confidence intervals. If
a different lot of antiserum is used, a new reference curve must be recorded.
Assay of Specimens
Serum samples are automatically diluted 1:400 (IgG), 1:20 (IgA, IgM) or 1:5 in the sensitive assay
protocols (IgA, IgM) with N Diluent and measured. IgG in urine or CSF is measured from undiluted
samples using separate assay protocols.
1
Limitations of the Procedure
Turbidity and particles in the sample may interfere with the determination. Therefore, samples containing particles must be centrifuged prior to testing.
Due to technical manufacturing reasons and/or aged samples, the results obtained for control samples and interlaboratory survey samples may differ depending on the assay method used. It may
therefore be necessary to assess these results in relation to method-specific target values.
Expected Values
The following reference intervals apply for serum samples from healthy adults (9):
In an immunochemical reaction, the proteins contained in the human serum, urine or CSF sample form
immune complexes with specific antibodies. These complexes scatter a beam of light passed through
the sample. The intensity of the scattered light is proportional to the concentration of the relevant
protein in the sample. The result is evaluated by comparison with a standard of known concentration.
OSAR G09 C0540 (414) H
If the readings obtained are outside the measuring range, the assay can be repeated using a higher
or lower dilution of the sample (IgG in the serum assay protocol). Refer to BN* System’s Instruction
Manual for information on repeat measurements using other dilutions.
Internal Quality Control
Assay N/T Protein Controls SL/L, M and H after each establishment of a reference curve, the first
opening of an antiserum vial as well as with each run of serum samples. For the determination of
IgG in urine or CSF samples the N/T Protein Control LC should be used. The controls are assayed
and evaluated as for patient samples. The assigned values and confidence intervals are listed in the
Table of Assigned Values of the respective control.
Results
The results are evaluated automatically by means of a logit-log function.
Edition January 2002
Protein
IgG
IgA
IgM
2.5th - 97.5th Percentile
7.0 - 16.0 g/L
0.7 - 4.0 g/L
0.4 - 2.3 g/L
Reference interval for IgG in urine samples:
IgG in second morning urine below 9.6 mg/L according to (8); value recalculated with reference to
protein reference preparation CRM 470.
Reference interval for IgG in CSF samples:
IgG in the CSF below 34 mg/L according to (10); value recalculated with reference to protein reference preparation CRM 470.
Nevertheless, each laboratory should determine its own reference intervals since values may vary
depending on the population studied.
Specific Performance Characteristics
Sensitivity and Measuring Range
The sensitivity of the assay is established by the lower limit of the reference curve and depends
therefore upon the concentrations of the proteins in the N Protein Standard SL. Typical measuring
ranges are given in the BN* System’s Instruction Manual.
Specificity
N Antisera are specific for the respective protein.
Precision
The following coefficients of variation (CV) were obtained with N Antisera to Human Immunoglobulins on the BN* System:
Protein
IgG
IgA
IgM
Intra-Assay
(n = 20)
Mean Value
[g/L]
13.5
2.78
1.13
CV
[%]
2.1
2.0
2.7
Inter-Assay
(n = 10)
Mean Value
[g/L]
13.2
2.96
1.17
CV
[%]
2.7
3.5
1.9
Method Comparison
One hundred (100) serum samples were assayed with N Antisera to Human Immunoglobulins on
the BN* System (y) and radial immunodiffusion (x) (NOR Partigen***). Correlation of the results
yielded the following data:
Protein
IgG
IgA
IgM
Passing Bablok Regression (11)
y (BN*) = 1.09 x (RID) - 0.12 g/L
y (BN*) = 0.99 x (RID) +0.06 g/L
y (BN*) = 1.08 x (RID) - 0.06 g/L
Coefficient of
Correlation
0.97
0.99
0.99
Note
The values cited for specific performance characteristics of the test represent typical results and are
not to be regarded as specifications for the N Antisera to Human IgG, IgA and IgM.
Bibliography
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Chem Clin Biochem 1989; 27: 589-600.
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10.Felgenhauer K. Laboratory diagnosis of neurological diseases. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998: 1308-26.
11. Passing H, Bablok W. A new biometrical procedure for testing the equality of measurements
from two different analytical methods. Application of linear regression procedures for method
comparison studies in clinical chemistry, Part I. J Clin Chem Clin Biochem 1983; 21: 709-20.
* BN is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.
** BN ProSpec is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other
countries and is a trademark of Dade Behring Marburg GmbH in the USA.
*** Partigen is a registered trademark of Dade Behring Marburg GmbH in Germany and other countries.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
USA Distributor: Dade Behring Inc.
Newark, DE 19714 U.S.A.
N Antisera gegen HumanImmunglobuline (IgG, IgA
und IgM)
Anwendungsbereich
In-vitro-Diagnostica zur quantitativen Bestimmung von Immunglobulinen (IgG, IgA und IgM) in Humanserum sowie von IgG in humanem Urin und Liquor mit den BN* Systemen.
Diagnostische Bedeutung
Immunglobuline werden von Plasmazellen als humorale Immunantwort auf einen Kontakt des Immunsystems mit Antigenen gebildet. Bei Erstkontakt werden als Primärreaktion zunächst Antikörper der Klasse IgM erzeugt, denen die Bildung von IgG- und auch IgA-Antikörpern folgt. Die quantitative Bestimmung der Immunglobuline kann wichtige Hinweise auf den humoralen Immunstatus
liefern. Erniedrigte Immunglobulinkonzentrationen im Serum treten bei primären Immunmangelzuständen (1, 2) sowie bei sekundären Immuninsuffizienzen (3) auf, z. B. bei fortgeschrittenen malignen Tumoren, lymphatischer Leukämie, multiplem Myelom und Morbus Waldenström. Erhöhte
Immunglobulinkonzentrationen im Serum treten aufgrund polyklonaler oder oligoklonaler Ig-Vermehrung bei z. B. Lebererkrankungen (Hepatitiden, Leberzirrhose), akuten und chronischen Infektionen, Autoimmunerkrankungen sowie bei Neugeborenen im Nabelschnurblut bei intrauterinen
und perinatalen Infektionen auf (4, 5). Monoklonale Immunglobulinvermehrungen im Serum werden
z. B. bei Plasmozytomen, Morbus Waldenström und Schwerketten Erkrankungen gefunden (6). Bei
Vorliegen einer monoklonalen Immunglobulinämie sind zusätzlich zur quantitativen Bestimmung
eingehende differentialdiagnostische Untersuchungen notwendig. Bei lokalen Immunrektionen resultieren im Liquor ebenfalls erhöhte Werte der Immunglobuline, insbesondere von IgG (7). Erhöhte
Konzentrationen von IgG im Urin findet man bei nicht selektiver glomerulärer Proteinurie (8).
Prinzip der Methode
Die im menschlichen Serum, Urin oder Liquor enthaltenen Proteine bilden in einer immunchemischen Reaktion mit spezifischen Antikörpern Immunkomplexe, an denen eingestrahltes Licht gestreut wird. Die Intensität des Streulichts ist abhängig von der Konzentration des jeweiligen Proteins
in der Probe. Die Auswertung erfolgt durch Vergleich mit einem Standard bekannter Konzentration.
Reagenzien
Inhalt der Handelspackung
N Antiserum gegen Human-IgG, Bestell-Nr. OSAS oder
N Antiserum gegen Human-IgA, Bestell-Nr. OSAR oder
N Antiserum gegen Human-IgM, Bestell-Nr. OSAT
je 1 Flasche mit 5 ml oder 2 ml
Zusammensetzung
Die N Antisera sind flüssige, tierische Sera und werden durch Immunisierung von Kaninchen mit
hochgereinigten humanen Immunglobulinen (IgG, IgA bzw. IgM) hergestellt. Durch ein besonderes
Stabilisierungsverfahren werden labile Bestandteile aus den Antisera entfernt. Mikrobielle Verunreinigungen werden durch Filtration und den Zusatz von Natriumazid (< 1 g/l) als Konservierungsmittel
weitgehend ausgeschlossen. Die mittels Festphasenimmunadsorption gereinigten, spezifischen
Antisera werden nach besonderer Prüfung so eingestellt, daß eine optimale Eignung für die Verwendung in den BN* Systemen gewährleistet ist. Die Antikörper-Titer (T) werden in der radialen
Immundiffusion ermittelt und sind auf den Flaschenetiketten ausgedruckt. Sie geben an, wieviel mg
des Antigens von 1 ml des jeweiligen Antiserums in einem Agarosegel präzipitiert werden.
Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen
1. Nur zur in-vitro-diagnostischen Anwendung.
2. Beim Umgang mit Natriumazid-haltigen In-vitro-Diagnostica ist zu beachten:
Verschlucken und Kontakt mit Haut oder Schleimhäuten vermeiden. Natriumazid kann mit
Schwermetallen, wie Kupfer oder Blei, explosive Azide bilden.
Vorbereitung der Reagenzien
Die N Antisera sind gebrauchsfertig und können ohne weitere Vorbehandlung eingesetzt werden.
Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen
Lagerungsdauer bei +2 bis +8 °C:
die Haltbarkeit ist auf dem Etikett angegeben;
Stabilität nach Öffnen:
4 Wochen, sofern unmittelbar nach Gebrauch wieder dicht verschlossen bei +2 bis +8 °C gelagert
und eine Kontamination (z. B. durch Mikroorganismen) vermieden wird;
N Antisera können bei Lagerung Ausflockungen oder Trübungen zeigen, die nicht durch mikrobielle
Kontamination verursacht sind und die die Aktivität in keiner Weise beeinträchtigen. In solchen
Fällen sollten die Antisera vor Gebrauch filtriert werden. Dazu eignen sich Einwegfilter mit einem
Porendurchmesser von 0,45 µm.
Die Reagenzien dürfen nicht eingefroren werden.
Stabilität auf den BN* Systemen:
5 Tage mit jeweils 8 Stunden, oder ein vergleichbarer Zeitraum (maximal 40 Stunden);
BN* II System: die erweiterte Stabilität der Reagenzien bei Verwendung von BN* II Evaporation
Stoppers (Bestell-Nr. OVLE) ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen;
BN ProSpec** System: die Stabilität der Reagenzien ist der Bedienungsanleitung zu entnehmen.
Zusätzlich benötigte Materialien
BN* System
N Protein-Standard-SL (human), Bestell-Nr. OQIM
N/T Protein-Kontrolle SL/L (human), M und H, Bestell-Nr. OQIN, OQIO und OQIP
N/T Protein-Kontrolle LC (human), Bestell-Nr. OQLW
N Reaktionspuffer, Bestell-Nr. OUMS
N Diluens, Bestell-Nr. OUMT
N Zusatzreagenz/Präzipitation, Bestell-Nr. OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (wahlweise), Bestell-Nr. OVLE
Verbrauchsmaterial und Ausrüstung wie in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.
Untersuchungsmaterial
Zur Messung sollen möglichst frische (max. 8 Tage bei +2 bis +8 °C aufbewahrte) oder tiefgefroren
gelagerte humane Serumproben sowie frische Urin- oder Liquorproben eingesetzt werden. Werden
Serumproben innerhalb von 24 Stunden nach Entnahme tiefgefroren, so ist eine Lagerung unterhalb -20 °C bis zu 1 Jahr möglich, wenn wiederholtes Auftauen und Einfrieren vermieden wird. Die
Serumproben sollten vollständig geronnen sein und nach Zentrifugation keine Partikel oder Spuren
von Fibrin enthalten. Lipämische Proben oder eingefrorene Proben, die nach dem Auftauen trüb
sind, müssen vor der Bestimmung durch Zentrifugation (10 min bei ca. 15 000 x g) geklärt werden.
Für die Bestimmung von IgG im Urin eignen sich Spontan- und Sammelurine. Urinproben dürfen
nicht tiefgefroren werden. Jede Urin- und Liquorprobe ist vor der Analyse zu zentrifugieren.
Testdurchführung
Hinweise
1. Einzelheiten zur Bedienung der BN* Systeme sind der entsprechenden Bedienungsanleitung zu
entnehmen.
2. Die Reagenzien dürfen nach dem angegebenen Verfalldatum nicht mehr verwendet werden.
3. Reagenzien und Proben sollen vor der Messung am BN* A/BN* 100 System Raumtemperatur
(+15 bis +25 °C) erreicht haben. Am BN* II/BN ProSpec** System können auch bei +2 bis +8 °C
gelagerte Reagenzien und Proben direkt zur Bestimmung eingesetzt werden.
Assay-Protokolle an den BN* Systemen
Die Assay-Protokolle sind in der Bedienungsanleitung sowie der Software des jeweiligen Gerätes
enthalten. Alle Schritte werden automatisch vom System durchgeführt.
OSAR G09 C0540 (414) H
2
Ausgabe Januar 2002
Erstellung der Referenzkurve
Referenzkurven werden über eine Mehrpunktkalibrierung aufgenommen. Für die Erstellung werden
automatisch Verdünnungsreihen des N Protein-Standard SL mit N Diluens hergestellt.
Die Referenzkurven können so lange verwendet werden, wie Richtigkeitskontrollen, z. B. N/T Protein-Kontrolle SL/L, M und H oder N/T Protein-Kontrolle LC innerhalb der jeweiligen Vertrauensbereiche wiedergefunden werden. Bei Verwendung einer anderen Antiserum-Charge muß eine neue
Referenzkurve aufgenommen werden.
Messung der Patientenproben
Serumproben werden automatisch 1 : 400 (IgG) bzw. 1 : 20 (IgA, IgM) oder, im sensitiven AssayProtokoll (IgA, IgM), 1 : 5 mit N Diluens verdünnt und gemessen. IgG in Urin- oder Liquorproben wird
aus unverdünnten Proben, jeweils in einem separaten Assay-Protokoll bestimmt. Bei Meßwerten,
die außerhalb des Meßbereichs liegen, kann die Messung aus einer höheren oder niedrigeren Probenverdünnung (IgG im Serum-Assay-Protokoll) wiederholt werden. Wiederholungsmessungen aus
weiteren Probenverdünnungen sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme beschrieben.
Interne Qualitätskontrolle
Die N/T Protein-Kontrollen SL/L, M und H sollten nach jeder Erstellung einer Referenzkurve, nach
erstmaligem Öffnen einer Antiserumabfüllung sowie bei jeder Serie von Serumproben eingesetzt
werden. Bei der Bestimmung von IgG im Urin oder Liquor sollte die N/T Protein-Kontrolle LC analog
eingesetzt werden. Die Kontrollen werden im Ansatz und bei der Auswertung wie Patientenproben
behandelt. Die Sollwerte und Vertrauensbereiche sind der Tabelle der Sollwerte der entsprechenden Kontrolle zu entnehmen.
Berechnung der Analysenergebnisse
Die Auswertung erfolgt automatisch mittels einer Logit-Log-Funktion.
Einschränkungen der Testdurchführung
Trübungen und Partikel in den Proben können die Bestimmungen stören. Deshalb sollten Proben,
die Partikel enthalten, vor der Bestimmung zentrifugiert werden.
Für Kontroll- und Ringversuchsproben können aufgrund der technischen Herstellung bzw. gealterter Proben unterschiedliche Ergebnisse in Abhängigkeit von der verwendeten Bestimmungsmethode resultieren. Es kann daher notwendig sein, die Bewertung dieser Ergebnisse an methodenspezifischen Zielwerten vorzunehmen.
Erwartete Werte
Für Serumproben gesunder erwachsener Probanden gelten folgende Referenzbereiche (9):
Protein
IgG
IgA
IgM
2,5. - 97,5. Perzentile
7,0 - 16,0 g/l
0,7 - 4,0 g/l
0,4 - 2,3 g/l
Referenzbereich für IgG im Urin:
IgG im zweiten Morgenurin unterhalb 9,6 mg/l nach (8);
Wert korrigiert unter Bezug auf die Referenzpräparation CRM 470.
Referenzbereich für IgG im Liquor:
IgG im Liquor unterhalb 34 mg/l nach (10);
Wert korrigiert unter Bezug auf die Referenzpräparation CRM 470.
Darüber hinaus sollte jedes Labor seine eigenen Referenzbereiche ermitteln, da diese vielen Einflußgrößen unterliegen, die für jedes untersuchte Kollektiv verschieden sein können.
Leistungsmerkmale der Teste
Empfindlichkeit und Meßbereich
Die Empfindlichkeit der Bestimmung wird durch die untere Grenze der Referenzkurve festgelegt
und hängt damit von den Konzentrationen der Proteine im N Protein-Standard SL ab. Typische
Meßbereiche sind in den Bedienungsanleitungen der BN* Systeme angegeben.
Spezifität
Die N Antisera sind spezifisch für das jeweilige Protein.
Präzision
Mit den N Antisera gegen die Human-Immunglobuline wurden am BN* System folgende Variationskoeffizienten (VK) ermittelt:
Intra-Assay
(n = 20)
Protein
IgG
IgA
IgM
Mittelwert
[g/l]
13,5
2,78
1,13
Inter-Assay
(n = 10)
VK
[%]
2,1
2,0
2,7
Mittelwert
[g/l]
13,2
2,96
1,17
VK
[%]
2,7
3,5
1,9
Methodenvergleich
Es wurden 100 Serumproben mit den N Antisera gegen die Human-Immunglobuline am BN* System (y) gemessen und vergleichend dazu mit der radialen Immundiffusion (x) (NOR-Partigen***)
bestimmt. Die Korrelation der Ergebnisse lieferte folgende Daten:
Protein
IgG
IgA
IgM
Passing Bablok- Regression (11)
y (BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l
y (BN*) = 0,99 x (RID) +0,06 g/l
y (BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l
Korrelationskoeffizient
0,97
0,99
0,99
Anmerkung
Die angegebenen Werte für die Leistungsmerkmale der Teste stellen typische Ergebnisse dar und sind
nicht als Spezifikation für die N Antisera gegen Human IgG, IgA und IgM anzusehen.
Literatur
Siehe Seite 1.
* BN ist ein Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den USA.
** BN ProSpec ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland und anderen Ländern und ist ein Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in den
USA.
*** Partigen ist ein eingetragenes Warenzeichen der Dade Behring Marburg GmbH in Deutschland
und anderen Ländern.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisérums antiimmunoglobulines humaines
(IgG, IgA et IgM)
Domaine d'utilisation
Réactifs pour le dosage des immunoglobulines (IgG, IgA ou IgM) dans le sérum humain, ainsi que
des IgG dans l’urine humaine et le LCR humain, à l’aide des systèmes BN*.
Intérêt diagnostique
Les immunoglobulines sont synthétisées par les cellules plasmatiques comme réponse immunitaire
humorale à un contact du système immunitaire avec des antigènes. En cas de premier contact, on
assiste tout d'abord comme primoréaction à la formation d'anticorps de la classe des IgM, puis à
celle des anticorps IgG et IgA. Le dosage des immunoglobulines peut apporter des éléments importants pour l'évaluation du statut immunitaire humoral.
On observe une diminution de la concentration sérique des immunoglobulines dans les états
d'insuffisance immunitaire primaires (1, 2), ainsi que dans les insuffisances immunitaires secondaires (3), par ex. en cas de tumeur maligne avancée, de leucémie lymphatique, de myélome multiple
ou encore de maladie de Waldenström. Les concentrations augmentées d'immunoglobulines dans
le sérum sont dues à une multiplication oligoclonale ou polyclonale des Ig, comme par ex. dans les
maladies du foie (hépatites, cirrhose du foie), les infections aiguës ou chroniques, les maladies
autoimmunes, ainsi que les infections intrautérines et périnatales dans le sang du cordon chez les
nouveau-nés (4, 5). La multiplication monoclonale des immunoglobulines dans le sérum est observée par ex. dans les plasmocytomes, la maladie de Waldenström et les affections des chaînes
lourdes (6). En cas d'immunoglobulinémie monoclonale, les dosages quantitatifs doivent être accompagnés d'autres tests permettant un diagnostic différentiel.
Les réactions immunitaires locales entraînent dans le LCR également des valeurs augmentées des
immunoglobulines, en particulier des IgG (7). On trouve des concentrations d'IgG dans l'urine augmentées en cas de protéinurie glomérulaire non sélective (8).
Principe de la méthode
Les protéines contenues dans le sérum, l’urine ou le LCR humain forment, dans le cadre d’une
réaction immunochimique avec des anticorps spécifiques, des immuncomplexes qui dispersent la
lumière projetée. L’intensité de la lumière dispersée est fonction de la concentration dans
l’échantillon de la protéine recherchée. L’exploitation se fait par rapport à un standard de concentration connue.
Réactifs
Conditionnements :
N Antisérum anti-IgG humaine, code OSAS ou
N Antisérum anti-IgA humaine, code OSAR ou
N Antisérum anti-IgM humaine, code OSAT
1 flacon de 5 ml ou de 2 ml
Composition :
Les N Antisérums sont des sérums liquides, d’origine animale, obtenus par immunisation de lapins
avec des immunoglobulines humaines hautement purifiées (IgG, IgA ou IgM).
Un procédé spécial de stabilisation permet d'éliminer les éléments labiles des antisérums. Une
filtration ainsi que l’addition d’azide de sodium (< 1 g/l) comme conservateur excluent pratiquement
toute contamination microbienne.
Les antisérums spécifiques, purifiés par immunoadsorption en phase solide, sont préparés de
façon à garantir des propriétés optimales pour leur utilisation sur les systèmes BN*. Le titre
d'anticorps (T), déterminé par immunodiffusion radiale, est imprimé sur l'étiquette du flacon. Il indique le nombre de mg d'antigène précipités par 1 ml d'antisérum dans un gel d'agarose.
Avertissements et mesures de précaution
1. A n'utiliser que pour un usage in vitro.
2. Les réactifs contenant de l'azide de sodium doivent être manipulés avec précaution :
Ne pas avaler et éviter tout contact avec la peau et les muqueuses. L'azide de sodium peut
devenir explosif au contact de métaux lourds comme le cuivre ou le plomb.
Préparation des réactifs
Les N Antisérums sont prêts à l'emploi et peuvent être utilisés sans aucun prétraitement.
Stabilités et conditions de conservation
Conservation à +2/+8°C :
La date de péremption est indiquée sur l’étiquette.
Stabilité après ouverture :
4 semaines, à condition de bien refermer les flacons immédiatement après emploi, de les replacer
à +2/+8°C, et d’éviter toute contamination (par ex. microbienne). Les N Antisérums peuvent devenir
troubles ou présenter une floculation, phénomènes qui n’indiquent pas une contamination microbienne et qui n’influencent en aucune façon leur activité. Dans ces cas-là, les filtrer à l’aide d’un filtre
à usage unique à pores de 0,45 µm de diamètre.
Ne pas les congeler.
Stabilité sur les systèmes BN* :
5 jours à raison de 8 heures par jour, ou durée équivalente (maximum 40 heures).
BN* II : l’utilisation de bouchons anti-évaporation (code OVLE) permet d’allonger la stabilité des
réactifs ; se reporter au manuel d’utilisation du système.
BN ProSpec** : pour la stabilité des réactifs, se reporter au manuel d’utilisation du système.
Autres réactifs et matériel nécessaires
Système BN*
N Standard Protéines SL (humain), code OQIM
N/T Contrôle Protéines SL/L,M,H (humain), codes OQIN, OQIO et OQIP
N/T Contrôle Protéines LC (humain), code OQLW
N Tampon de réaction, code OUMS
N Diluant, code OUMT
N Réactif complémentaire/Précipitation, code OUMU
Bouchons anti-évaporation pour BN* II, code OVLE (utilisation facultative)
Consommables et matériels complémentaires nécessaires selon les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Echantillons à tester
Utiliser de préférence des échantillons sériques, urinaires ou de LCR humains frais (conservés 8
jours maximum à +2/+8°C). Les échantillons sériques peuvent être conservés à au moins -20°C à
condition de les congeler dans les 24 heures qui suivent leur prélèvement ; ils se conservent alors 1
an ; ne les congeler qu’une seule fois. Les échantillons sériques doivent être totalement coagulés et
ne plus contenir aucune particule ni trace de fibrine après centrifugation. Les sérums lipémiques ou
devenus troubles après décongélation doivent être clarifiés par centrifugation (10 min à env. 15 000 g)
avant utilisation. Pour le dosage des IgG dans l’urine, utiliser des urines spontanées, ou de 24 heures.
Ne pas congeler les urines. Centrifuger chaque échantillon urinaire ou de LCR avant leur dosage.
Réalisation du test
Remarques :
1. Pour plus de détails concernant l’utilisation des systèmes BN*, se reporter au manuel
d’utilisation de l’appareil.
2. Ne pas utiliser les réactifs au-delà de leur date de péremption.
3. Porter réactifs et échantillons à la température ambiante (+15/+25°C) avant leur analyse sur le système
BN* A ou BN* 100. Sur le système BN* II ou BN ProSpec**, ils peuvent être testés directement à +2/+8°C.
Protocoles du test sur les systèmes BN* :
Les protocoles sont indiqués dans le manuel d’utilisation et la dernière version du logiciel de chaque
appareil. Toutes les étapes sont effectuées automatiquement par le système.
OSAR G09 C0540 (414) H
3
Edition Janvier 2002
Etablissement de la courbe d’étalonnage :
La courbe d'étalonnage est effectuée selon un étalonnage en plusieurs points. La série de dilutions
du N Standard protéines SL est établie automatiquement avec le N Diluant.
Les courbes d'étalonnage peuvent être utilisées tant que les contrôles d'exactitude, par ex. le N/T Contrôle Protéines SL/L, M et H ou le N/T Contrôle Protéines LC sont trouvés à l'intérieur de leur domaine de
confiance. Refaire une nouvelle courbe d’étalonnage à chaque changement de lot de l’antisérum.
Mesure des échantillons de patients :
Les échantillons sériques sont dilués automatiquement avec le N Diluant au 1/400 (IgG) ou au 1/20
(IgA, IgM), ou au 1/5 dans le cadre du protocole pédiatrique (IgA, IgM), puis mesurés. Dans les
protocoles urinaires et de LCR pour le dosage des IgG, les échantillons sont mesurés non dilués
selon un protocole séparé. Si des valeurs sortent du domaine de mesure (IgG dans le protocole
sérique), les échantillons peuvent être retestés à une dilution plus basse ou plus élevée. Le protocole pour retester les échantillons à une dilution différente est décrit dans les manuels d’utilisation
des systèmes BN*.
Contrôle de qualité interne
Tester les N/T Contrôles Protéines SL/M, M et H à chaque changement de courbe d’étalonnage ou
de flacon d’antisérum, ainsi qu’à chaque nouvelle série d’échantillons sériques. Pour le dosage des
IgG dans l’urine ou le LCR, tester le N/T Contrôle Protéines LC. Traiter les contrôles comme des
échantillons de patients, aussi bien dans le test que pour l’exploitation des résultats. Les valeurs
théoriques ainsi que les domaines de confiance sont indiqués dans le tableau des valeurs théoriques de chaque contrôle.
Calcul des résultats d'analyse
L'exploitation des résultats est effectuée automatiquement à l'aide d'une fonction log-logit.
Limites du test
Les échantillons troubles ou contenant des particules peuvent perturber le test. Dans ce cas, les
centrifuger avant le test.
Les échantillons testés dans le cadre d'un contrôle national ou d'une étude multicentrique peuvent
donner des résultats différents selon la méthode de dosage utilisée. Il peut donc être nécessaire de
procéder à l'exploitation des résultats selon les valeurs-cibles spécifiques à la méthode utilisée.
Valeurs normales
Les valeurs de référence suivantes ont été obtenues pour des échantillons sériques de sujets adultes sains (9) :
Protéine
IgG
IgA
IgM
2,5ème - 97,5ème percentiles
7,0 - 16,0 g/l
0,7 - 4,0 g/l
0,4 - 2,3 g/l
Valeurs de référence des IgG dans l’urine :
La valeur d’IgG dans la deuxième urine du matin est inférieure à 9,6 mg/l selon (8) ; la valeur est
corrigée par rapport à la préparation de référence CRM 470.
Valeurs de référence des IgG dans le LCR :
La valeur d’IgG dans le LCR est inférieure à 34 mg/l selon (10) ; la valeur est corrigée par rapport à
la préparation de référence CRM 470.
l est toutefois recommandé à chaque laboratoire d’établir ses propres valeurs de référence, dans la
mesure où les domaines de référence sont soumis à de nombreux facteurs d’influence qui peuvent
varier selon le collectif étudié.
Caractéristiques des tests
Domaine de mesure et sensibilité
La sensibilité du dosage est déterminée par la limite inférieure de la courbe d’étalonnage, et dépend
donc de la concentration en protéines du N Standard protéines SL. Les domaines de mesure types
sont indiqués dans les manuels d’utilisation des systèmes BN*.
Spécificité
Les N Antisérums sont spécifiques de la protéine indiquée.
Précision
Les N Antisérums anti-immunoglobulines humaines ont donné les coefficients de variation (CV)
suivants sur les système BN*:
protéine
IgG
IgA
IgM
intra-essai
(n = 20)
valeur moyenne
g/l
13,5
2,78
1,13
CV
%
2,1
2,0
2,7
inter-essais
(n = 10)
valeur moyenne
CV
g/l
%
13,2
2,7
2,96
3,5
1,17
1,9
Comparaison avec une autre méthode
100 échantillons sériques ont été testés en parallèle, d’une part sur le système BN* avec les N
Antisérums anti-immunoglobulines humaines (y), et d’autre part parimmunodiffusion radiale (NORPartigen***) (x). La corrélation des résultats a donné les valeurs suivantes :
protéine
IgG
IgA
IgM
Droite de régression selon Passing Bablok (11)
y (BN*) = 1,09 x (IDR) - 0,12 g/l
y (BN*) = 0,99 x (IDR) + 0,06 g/l
y (BN*) = 1,08 x (IDR) - 0,06 g/l
coefficient de
corrélation
0,97
0,99
0,99
Remarque :
Les valeurs indiquées comme caractéristiques du test représentent des résultats types, et ne doivent
pas être considérées comme des spécifications des N Antisérums anti humaines IgG, IgA et IgM.
Littérature
Voir page 1.
* BN est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH aux Etats-Unis.
** BN ProSpec est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans
d’autres pays, et une marque de Dade Behring Marburg GmbH aux USA.
*** Partigen est une marque déposée de Dade Behring Marburg GmbH en Allemagne et dans
d’autres pays.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisieri anti
immunoglobuline umane
(IgG, IgA e IgM)
Settori d'impiego
Diagnostici in vitro per la determinazione quantitativa delle immunoglobuline (IgG, IgA, IgM) nel
siero umano nonché delle IgG nelle urine umane e nel liquor con i sistemi BN*.
Significato diagnostico
Le immunoglobuline vengono sintetizzate dalle plasmacellule nel corso della risposta immunitaria
umorale seguente il contatto del sistema immunitario con l'antigene. Al primo contatto si formano
come reazione primaria gli anticorpi della classe IgM, ai quali segue la formazione degli anticorpi
IgG e IgA. La determinazione quantitativa delle immunoglobuline può fornire importanti indicazioni
sullo stato immunitario umorale.
Concentrazioni ridotte delle immunoglobuline nel siero si verificano negli stati di deficit immunitario
primario(1,2) e di insufficienza immunitaria secondaria,(3) ad es. tumori maligni progrediti, leucemia
linfatica, mieloma multiplo e morbo di Waldenström. Concentrazioni aumentate di immunoglobuline
nel siero si manifestano in seguito alla proliferazione immunoglobulinica policlonale o oligoclonale
ad esempio nelle malattie epatiche (epatiti, cirrosi epatica), infezioni acute e croniche, nelle malattie
autoimmuni e, nei neonati nel sangue del cordone ombelicale, nelle infezioni intrauterine e perinatali.(4,5) Proliferazioni monoclonali delle immunoglobuline nel siero sono state rilevate ad es. nel
plasmocitoma, nel morbo di Waldenström e nelle malattie delle catene pesanti.(6) In presenza di
immunoglobulinemia monoclonale sono necessari approfonditi esami diagnostici differenziali.
Nelle reazioni immunitarie locali anche i valori delle immunoglobuline nel liquor, in modo particolare
delle IgG,(7) risultano aumentati. Aumentate concentrazioni delle IgG nelle urine si riscontrano nelle
proteinurie glomerulari non selettive.(8)
Principio del metodo
Le proteine contenute nel campione di siero umano, urina o liquor formano, in una reazione immunochimica, con gli anticorpi specifici degli immunocomplessi che provocano la dispersione della luce
che attraversa il campione in esame. L’intensità della luce dispersa dipende dalla concentrazione
della corrispondente proteina nel campione. La valutazione quantitativa avviene per confronto con
uno standard a concentrazione nota.
Reagenti
Contenuto della confezione
N Antisiero anti IgG umane, codice SAS o
N Antisiero anti IgA umane, codice SAR o
N Antisiero anti IgM umane, codice SAT
1 flacone ciascuno da 5 mL o da 2 mL
Composizione
Gli N antisieri sono sieri liquidi di origine animale, prodotti per immunizzazione di conigli con immunoglobuline (IgG, IgA, IgM) altamente purificate. Le componenti labili dell’antisiero vengono rimosse con un particolare procedimento di stabilizzazione. Le contaminazioni microbiche vengono escluse essenzialmente mediante filtrazione ed aggiunta di sodio azide (< 1 g/l) come conservante.
Gli antisieri specifici, purificati tramite immuno-assorbimento vengono trattati in modo tale da assicurare un impiego ottimale con i sistemi BN*.
Il titolo (T) viene determinato con l’immuno diffusione radiale e si trova stampato sull’etichetta dei
relativi flaconi. Riporta quanti milligrammi di antigene vengono precipitati da 1 mL di ciascun antisiero in gel di agarosio.
Avvertenze e precauzioni
1. Solo per uso diagnostico in-vitro.
2. Quando si impiegano diagnostici in-vitro contenenti sodio azide, osservare le seguenti precauzioni:
non ingerire ed evitare contatti con la cute e le mucose! La sodio azide a contatto con metalli
pesanti, come rame e/o piombo, può formare azidi esplosive.
Preparazione dei reagenti
Gli N Antisieri sono pronti per l'uso e possono essere utilizzati senza ulteriore pretrattamento.
Conservazione e validità
Stabilità a +2/+8 °C:
vedere la data di scadenza sull’etichetta
Stabilità dopo apertura:
4 settimane, se conservati ben chiusi a+ 2/+ 8°C, evitando contaminazioni (ad es. da microrganismi).
Durante la conservazione, gli ‘N Antisieri possono presentare intorbidamenti o flocculazioni che non
dipendono da contaminazioni microbiche e che non influenzano in alcun modo l’attività. In questo
caso è necessario filtrare l’antisiero prima dell’uso. A questo scopo sono disponibili filtri monouso
con pori di 0,45 µm di diametro. Non congelare.
Stabilità sui sistemi BN*:
5 giorni per 8 ore al giorno o periodo di tempo equivalente (massimo 40 ore);
Sistema BN* II: la stabilità dei reagenti può essere aumentata usando gli Evaporation Stoppers per
BN* II (cod. VLE), come indicato nel manuale d’uso.
Sistema BN ProSpec**: la stabilità dei reagenti è indicata nel manuale d’uso.
Altro materiale necessario
Sistema BN*
N Standard Proteine SL (umano), codice QIM
N/T Controllo Proteine SL/L, M e H (umano), codice QIN, QIO e QIP
N/T Controllo Proteine LC (umano), codice QLW
N Tampone di reazione, codice UMS
N Diluente, codice UMT
N Reagente supplementare/precipitante, codice UMU
Evaporation Stoppers per BN* II (opzionale), codice VLE
Materiale di consumo ed accessori come descritto nei manuali d’uso dei sistemi BN*.
Campioni in esame
Utilizzare preferibilmente campioni di siero freschi (conservati per un massimo di 8 giorni a +2/
+8°C) o conservati congelati e campioni di urina umana e liquor freschi. Campioni di siero fresco, se
congelati entro 24 ore dal prelievo, possono essere conservati per un anno a -20 °C. Evitare ripetuti
congelamenti e scongelamenti !
I campioni di siero devono essere completamente coagulati e non devono presentare particelle in
sospensione o tracce di fibrina dopo la centrifugazione. I campioni fortemente lipemici o i campioni
congelati, che dopo scongelamento risultano torbidi, devono essere chiarificati, prima dell’ analisi,
mediante centrifugazione (10 minuti a ca. 15.000 x g).
Per la determinazione delle IgG nell’urina è possibile utilizzare sia urine spontanee che di raccolta.
I campioni di urina non devono essere congelati. Ogni campione di urina e di liquor deve essere
centrifugato prima del test.
Esecuzione del test
Nota:
1. Per informazioni dettagliate fare riferimento al manuale d’uso dei sistemi BN*.
2. Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza indicata.
3. Prima della determinazione sul sistema BN* A /BN* 100, portare i reagenti ed i campioni a temperatura ambiente (+15/+25°C). Sul sistema BN* II / BN ProSpec** i reagenti possono essere
analizzati direttamente a +2/+8°C.
OSAR G09 C0540 (414) H
4
Edizione Gennaio 2002
Schema di esecuzione del test con i sistemi BN*
Gli schemi per l’esecuzione del test sono riportati nei manuali d’uso e nel software dello strumento.
Tutte le fasi sono eseguite automaticamente dallo strumento.
Allestimento della curva di riferimento:
Le curve di riferimento vengono allestite mediante una calibrazione a più punti. Per la sua preparazione vengono realizzate automaticamente diluizioni seriali dell'N Proteine standard SL con N Diluente.
Le curve di calibrazione sono valide finchè i controlli di accuratezza, ad es. N/T Controllo per proteine SL/L, M ed H o N/T Controllo Proteine LC rimangono entro i rispettivi ambiti fiduciali. Quando si
utilizza un nuovo lotto di antisiero si deve allestire una nuova curva di riferimento.
Misurazione dei campioni
I campioni di siero di paziente vengono diluiti automaticamente 1:400 (IgG), 1:20 (IgA, IgM) o 1:5
nello schema di esecuzione sensibile (IgA, IgM) con N Diluente e quindi analizzati. Le IgG nei
campioni di urina o di liquor vengono determinate su campioni indiluiti mediante uno schema di
esecuzione separato. Se le letture ottenute si trovano al di fuori dell’ambito di misura, la misura può
essere ripetuta usando una diluizione superiore o inferiore del campione (IgG nello schema di esecuzione su siero). Per informazioni sulla ripetizione della misurazione con altre diluizioni consultare
il manuale d’uso dei sistemi BN*.
Controllo di qualità interno
I controlli N/T Siero Proteine SL/L, M e H devono essere analizzati dopo ogni preparazione delle
curve di riferimento, dopo aver iniziato un nuovo flacone di antisiero e con ogni serie di campioni.
Per la determinazione delle IgG nell’urina o nel liquor, utilizzare l’N/T Controllo Proteine LC. I controlli sono analizzati e valutati allo stesso modo dei campioni. I valori nominali e gli ambiti fiduciali
sono indicati nella tabella dei valori nominali del relativo controllo.
Calcolo dei risultati
La valutazione é eseguita in modo automatico mediante una funzione logit-log.
Limitazioni della esecuizione del test
I campioni torbidi o contenenti particelle possono interferire con la determinazione. Pertanto i campioni contenenti particelle devono essere centrifugati prima di essere analizzati.
Per ragioni tecniche legate alla produzione e/o all’invecchiamento dei campioni, i risultati ottenuti
con i sieri di controllo e con i sieri per il controllo di qualità inter-laboratori possono differire in
funzione del metodo utilizzato. Può quindi rendersi necessario valutare i risultati ottenuti facendo
riferimento a valori specifici per i diversi metodi utilizzati.
Valori attesi
I seguenti intervalli di riferimento si applicano ai campioni di siero di adulti sani (9):
Proteina
IgG
IgA
IgM
2,5 - 97,5 Percentile
7,0 - 16,0 g/L
0,7 - 4,0 g/L
0,4 - 2,3 g/L
Ambito di riferimento delle IgG nell’urina:
IgG nella seconda urina della mattina inferiore a 9,6 mg/L secondo (8); valore corretto in base al
preparato di riferimento CRM 470.
Ambito di riferimento delle IgG nel liquor:
IgG nel liquor inferiore a 34 mg/L secondo (10); valore corretto in base al preparato di riferimento
CRM 470.
Inoltre, ogni laboratorio dovrebbe determinare i propri intervalli di riferimento, poiché i valori possono risultare diversi a seconda della popolazione esaminata.
Caratteristiche del test
Ambito di misura e sensibilità
La sensibilità del test viene determinata dal limite inferiore della curva di riferimento e dipende
quindi dalla concentrazione delle proteine nell’ N Proteine Standard SL. Gli ambiti di misura tipici
sono riportati nel manuale d’uso dei sistemi BN*.
Specificità
Gli N antisieri sono specifici per la rispettiva proteina.
Precisione
Con gli N antisieri anti immunoglobuline umane sono stati determinati, impiegando dei sistemi BN*,
i seguenti coefficienti di variazione (CV):
Intra - serie
Inter - serie
(n = 20)
(n = 10)
Valore medio
CV
Valore medio
CV
[g/L]
[%]
[g/L]
[%]
IgG
13,5
2,1
13,2
2,7
IgA
2,78
2,0
2,96
3,5
IgM
1,13
2,7
1,17
1,9
Confronto tra i metodi
Sono stati esaminati 100 campioni di siero con N Antisieri anti immunoglobuline umane sul sistema
BN* (y) e con un metodo di immunodiffusione radiale (x) (NOR-Partigen***). La correlazione dei
risultati è la seguente:
Proteina
Proteina
IgG
IgA
IgM
Regressione Passing Bablok (11)
y (BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/L
y (BN*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/L
y (BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/L
Coefficiente
di correlazione
0,97
0,99
0,99
Nota:
I valori indicati come caratteristiche del test rappresentano dei risultati tipici e non devono essere
considerati come specifiche per l'N Antisieri anti umane IgG, IgA e IgM.
Bibliografia
Vedi pagina 1.
* BN è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti.
** BN ProSpec è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri
Paesi ed è un marchio della Dade Behring Marburg GmbH negli Stati Uniti.
*** Partigen è un marchio registrato della Dade Behring Marburg GmbH in Germania e negli altri
Paesi.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Antisueros contra las
Inmunoglobulinas humanas
(IgG, IgA e IgM)
Campos de aplicación
Reactivos de diagnóstico in vitro para la determinación cuantitativa de las inmunoglobulinas (IgG,
IgA e IgM) en suero humano, así como, de la IgG en orina y en líquido cefalorraquídeo, humanos,
usando los sistemas BN*.
Significado diagnóstico
Las inmunoglobulinas son producidas por células plasmáticas como respuesta inmunohumoral al
contacto del sistema inmunitario con un antígeno. Después del contacto inicial, en la reacción primaria, se forman los anticuerpos de la clase IgM, seguidos posteriormente por anticuerpos IgG e IgA. La
determinación cuantitativa de las inmunoglobulinas proporciona importantes indicaciones sobre el
estado actual del sistema inmunitario humoral. Concentraciones bajas de inmunoglobulinas en sueros se presentan en estados de inmunodeficiencia primarios (1, 2), como también en inmunodeficiencias secundarias (3), por ej. tumores malignos avanzados, leucemia linfática, mieloma múltiple y
macroglobulinemia de Waldenström. Concentraciones elevadas de inmunoglobulinas en sueros son
ocasionadas por aumentos policlonales y oligoclonales de las Igs como por ej. en enfermedades del
hígado (hepatitis, cirrocis hepática), infecciones agudas y crónicas, enfermedades autoinmunitarias,
como también, en el cordón umbilical de recien nacidos con infecciones intrauterinas y perinatales (4,
5). Aumentos monoclonales de inmunoglobulinas en sueros aparecen por ej. en plasmocitomas,
macroglobulinemia de Waldenström y en enfermedades de cadenas pesadas (6). Si existe una inmunoglobulemia monoclonal, es necesario además de la determinación cuantitativa, un estudio a fondo
de diagnóstico diferencial. Igualmente, en reacciones inmunológicas locales aparece en el líquido
cefalorraquídeo valores aumentados de inmunoglobulinas especialmente de IgG (7). En orina se
encuentran concentraciones altas de IgG en pacientes con proteinuria glomerular no selectiva (8).
Principio del método
Las proteínas contenidas en el suero, orina o líquido cefalorraquídeo, humanos, forman en una reacción
inmunoquímica con anticuerpos específicos inmunocomplejos, los cuales pueden dispersar un rayo de luz
incidente. La intensidad de la luz dispersada depende de la concentración de la correspondiente proteína
en la muestra. La valoración se hace por comparación con un estándar de concentración conocida.
Reactivos
Protocolos del test en los sistemas BN*
Los protocolos de elaboración de los ensayos vienen dados en el manual de operaciones, así como
en el software del aparato correspondiente. Todas las etapas son efectuadas automáticamente por
el sistema.
Preparación de la curva de referencia:
Las curvas de referencia se hacen sobre una calibración de varios puntos. Para su elaboración se
preparan automáticamente una serie de diluciones del N Proteína-estandar SL con el N diluyente.
Las curvas de referencia pueden ser utilizadas tanto tiempo como sea posible, siempre que al determinar de nuevo de los controles de exactitud, por ej., N/T proteína-controles SL/L, M y H o N/T
Proteína-control LC sus valores se encuentren dentro de los rangos de confianza correspondientes.
Al utilizar un nuevo lote de antisueros se deben preparar nuevas curvas de referencia.
Medida de las muestras de pacientes:
Las muestras de suero van a ser automáticamente diluidas con N diluyente, 1:400 (IgG), 1:20 (IgA
e IgM) o, en protocolos de ensayos sensibles, 1: 5 (IgA e IgM) y medidas. La determinación de la
IgG en muestras de orina y de líquido cefalorraquídeo se hace en las muestras sin diluir, siguiendo
respectivamente un protocolo de ensayo separado. Para valores que se encuentren por fuera de
rango de medida, se puede repetir la medida a una dilución mayor o menor de la muestra (IgG en
el protocolo de ensayo en suero). La repetición de las medidas a otras diluciones de las muestras
viene descrita en el manual de operaciones del sistema BN*.
Control de calidad interno
Los N/T proteína-controles SL/L, M y H se deben utilizar después de cada elaboración de una curva
de referencia, después de abrir un frasco de antisuero por primera vez, así como también, con cada
serie de muestras. Para la determinación de la IgG en orina o en líquido cefalorraquídeo se deben
utilizar de manera análoga los N/T proteína- controles LC. Los controles deben manejarse en el test
y en la evaluación como las muestras de pacientes. Los valores teóricos y los rangos de confianza
se deben tomar de la Tabla de valores teóricos correspondiente a cada control.
Cálculo de los resultados del análisis
La valoración se efectua automáticamente mediante una función log-logit.
Limitaciones del Procedimiento
La presencia de turbidez y de partículas en las muestras pueden alterar la determinación. Por lo tanto,
las muestras que contengan partículas deben ser centrifugadas antes de efectuar la determinación.
Para las muestras control y para las muestras empleadas en estudios en diferentes centros, debido
a la técnica de fabricación o al envejecimiento de las muestras, se obtienen resultados diferentes
dependiendo del método de determinación utilizado. Por esta razón, puede ser necesario efectuar
la valoración de estos resultados en relación con los valores objetivo del método correspondiente.
Valores esperados
Para sueros de sujetos adultos sanos son válidos los siguientes rangos de referencia (9):
Contenido del envase comercial:
N antisuero contra IgG-humana, N° de pedido OSAS o
N antisuero contra IgA-humana, N° de pedido OSAR o
N antisuero contra IgM-humana, N° de pedido OSAT
1 frasco con 5 ml o con 2 ml por cada uno
Composición
Los N antisueros son sueros animales, líquidos, producidos mediante inmunización de conejos con
las inmunoglobulinas humanas (IgG, IgA, e IgM) de alta pureza. Los componentes lábiles de los
antisueros se retiran utilizando un proceso especial de estabilización. Las impurezas microbiológicas
van a ser excluidas en general por medio de filtración y por la adición de azida de sodio (< 1 g/l) como
medio de conservación. Los antisueros espec’ficos, purificados mediante inmunoadsorción de fase
sólida, después de someterse a pruebas especiales se ajustan de tal forma que se obtenga una
óptima capacidad al usando los sistemas BN*. Los títulos de los anticuerpos (T) se obtiene por
inmunodifusión radial y vienen dados en la etiqueta del frasco correspondiente. Este valor indica
cuantos mg del antígeno por 1 ml del antisuero se pueden precipitar en un gel de agarosa.
Advertencias y medidas de seguridad
1. Sólo para ser utilizado en diagnósticos in-vitro.
2. En el manejo de diagnósticos in-vitro que contengan azida sódica debe observarse la siguiente
regla: No ingerir y evitar contacto con la piel y mucosas. La azida sódica puede formar azidas
explosivas con metales pesados como cobre y plomo.
Preparación de reactivos
Los N antisueros están listos para ser utilizados y pueden aplicarse sin ningún otro tratamiento preliminar.
Estabilidad y almacenaje
Tiempo de conservación entre +2 y +8°C:
La fecha de vencimiento viene dada en la etiqueta;
Estabilidad después de abierto:
4 semanas siempre que los frascos después de ser empleados se mantengan entre +2 y +8°C,
perfectamente cerrados y se eviten contaminaciones (por ej., por microorganismos);
Los N antisueros pueden presentar durante el almacenamiento floculación o turbidez que no son
ocasionadas por contaminación microbiológica y que no influyen de manera alguna en su actividad.En
estos casos los antisueros deben ser filtrados, antes de ser usados. Para esto son apropiados filtros
desechables con un diámetro de poro de 0,45 µm. No está permitida su congelación.
Estabilidad en los sistemas BN*:
5 días 8 horas cada día o un período de tiempo comparable (máximo 40 horas);
En el sistema BN* II el aumento de la estabilidad del reactivo, debido al uso del tapón protector de la
evaporación (N° de pedido, OVLE), viene dado en el manual de operaciones del aparato.
La estabilidad de los reactivos en el sistema BN ProSpec** se debe tomar del manual de operaciones.
Materiales adicionales necesarios
Sistema BN*
N Proteína-estándar SL (humana), N° de pedido OQIM
N/T Proteína-controles SL/L, M y H (humana), N° de pedido OQIN, OQIO y OQIP
N/T Proteína-control LC (humana), N° de pedido OQLW
N tampón para reacción, N° de pedido OUMS
N diluyente, N° de pedido OUMT
N Reactivo adicional/Precipitación, N° de pedido OUMU
Tampón protector de evaporación BN* II (opcional), N° de pedido OVLE
Otros materiales y equipos como está descrito en el manual de operaciones respectivos de los
sistemas BN*.
Proteína
IgG
IgA
IgM
2,5 - 97,5 Porcentile
7,0 - 16,0 g/l
0,7 - 4,0 g/l
0,4 - 2,3 g/l
Rango de referencia para la IgG en orina:
IgG en la segunda orina del día por debajo de 9,6 mg/l según (8);
Valores corregidos con relación a la preparación de referencia CRM 470.
Rango de referencia para la IgG en líquido cefalorraquídeo:
IgG en líquido cefalorraquídeo por debajo de 34 mg/l según (10);
Valores corregidos con relación a la preparación de referencia CRM 470.
Cada laboratorio debe además determinar sus propios rangos de referencia, ya que estos están
sujetos a diferentes factores, los cuales pueden ser diferentes para cada colectividad investigada.
Características del test
Rango de medida y sensibilidad
La sensibilidad de la determinación se fija de acuerdo al límite inferior de la curva de referencia y
depende de la concentración de proteínas en el N Proteína estándar SL.
Los rangos de medida típicos vienen dados en el manual de operaciones de los sistemas BN*.
Especificidad
Los N antisueros son específicos para la respectiva proteína.
Precisión
Los siguientes coeficientes de variación (CV) fueron obtenidos con los N antisueros contra las
inmunoglobulinas humanas en los sistemas BN*:
Intra-assay
(n = 20)
Proteína
IgG
IgA
IgM
Inter-assay
(n = 10)
promedio
[g/l]
CV
[%]
promedio
[g/l]
CV
[%]
13,5
2,78
1,13
2,1
2,0
2,7
13,2
2,96
1,17
2,7
3,5
1,9
Comparación de métodos
Se midieron 100 muestras de sueros con los N antisueros contra las inmunoglobulinas humanas en
el sistema BN* (y) y se compararon con la determinación por inmunodifusión radial (x) (NORPartigen***). La correlación de los resultados dio los siguientes datos:
Proteína
IgG
IgA
IgM
Regresión Passing Bablok (11)
y(BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l
y(BN*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/l
y(BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l
Coeficiente
de correlación
0,97
0,99
0,99
Nota:
Los valores dados para las características del test representan valores típicos y no se deben tomar
como especificaciones para los N Antisuero contra IgG, IgA e IgM humanas.
Material a investigar
Bibliografía
Para la medida se deben usar, en lo posible, muestras frescas (almacenadas máximo 8 días entre +2
y +8°C) o muestras de sueros humanos almacenadas congeladas a bajas temperaturas, así como,
muestras frescas de orina y de líquido cefalorraquídeo. Cuando las muestras frescas se congelan
dentro de las primeras 24 horas después de su recolección, es posible su almacenamiento hasta por
1 año a una temperatura menor de -20°C, siempre que se eviten continuas congelaciones y descongelaciones. Las muestras de suero deben estar completamente coaguladas y no presentar partículas
o restos de fibrina después de centrifugadas. Muestras altamente lipémicas o muestras congeladas
que presenten turbidez después de la descongelación, deben ser aclaradas por centrifugación (10
min. a aprox. 15 000 x g) antes de ser ensayadas. Para la determinación de la IgG en orina son
apropiadas muestras de orina espontánea y recolectada. Las muestras de orina no se deben congelar. Cada muestra de orina y de líquido cefalorraquídeo debe ser centrifugada antes del análisis.
* BN es una marca de fábrica de Dade Behring Marburg GmbH en USA.
** BN ProSpec es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en otros
países y es una marca de Dade Behring Marburg GmbH en USA.
*** Partigen es una marca registrada de Dade Behring Marburg GmbH en Alemania y en otros
países.
Procedimiento
Advertencias:
1. Los detalles sobre el manejo de los sistemas BN* se deben tomar de los correspondientes
manuales de operación.
2. Los reactivos no se deben utilizar una vez pasada la fecha de vencimiento.
3. Los reactivos y las muestras tienen que haber alcanzado la temperatura ambiente (entre +15 y +25°C)
antes de ser medidos en los sistemas BN* A/BN* 100. En los sistemas BN* II/BN ProSpec** los reactivos
y las muestras almacenados entre +2 y +8°C se pueden utilizar directamente para la determinación.
OSAR G09 C0540 (414) H
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Edición Enero 2002
Ver página 1.
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
N Anti-soros contra
imunoglobulinas humanas
(IgG, IgA, e IgM)
Campos de aplicação
Diagnósticos para a determinação quantitativa in vitro das imunoglobulinas (IgG, IgA e IgM) no soro
humano, bem como da IgG na urina humana e no líquido cefalorraquidiano nos sistemas BN*.
Significado diagnóstico
As imunoglobulinas são sintetizadas pelas células plasmáticas como resposta imunitária humoral a
um contacto do sistema imunitário com antígenos. Num primeiro contacto são produzidos, como
reacção primária, anticorpos da classe das IgM, depois anticorpos IgG e IgA. A determinação quantitativa pode fornecer elementos importantes para a avaliação do estatuto imunitário humoral.
Concentrações diminuídas de imunoglobulina sérica manifestam-se em estados de deficiência
imunológica primária (1, 2), assim como nas insuficiências imunitárias secundárias (3), p. ex. tumor
maligno avançado, leucemia linfática, mieloma múltiplo ou ainda no Mal de Waldenström. Concentrações aumentadas de imunoglobulinas no soro ocorrem, devido a uma multiplicação oligoclonal
ou policlonal das Ig, p. ex. nas hepatopatias (hepatites, cirrose hepática), em infecções agudas ou
crónicas, nas doenças auto-imunes, assim como no sangue do cordão umbilical dos recém-nascidos com infecções intra-uterinas ou perinatais (4, 5). A multiplicação monoclonal das imunoglobulinas séricas ocorre p. ex. nas plasmocitoses, no Mal de Waldenström e nas afecções das cadeias
pesadas (6). Na imunoglobulinemia monoclonal, as determinações quantitativas precisam de ser
acompanhadas de outros testes que permitam um diagnóstico diferencial.
Reacções imunitárias locais produzem também no líquido cefalorraquidiano (LCF) valores aumentados de imunoglobulinas, sobretudo das IgG (7). Concentrações aumentadas de IgG na urina
encontram-se na proteinúria glomerular não selectiva (8).
As curvas de referências permanecem válidas enquanto os controlos de exactidão, p. ex. N/T Controlos
de proteína SL/L, M e H ou N/T Controlo de proteína LC se encontrarem compreendidos nos respectivos escalões de confiança. Utilizando-se outro lote de anti-soro, é necessário definir uma nova curva.
Medição das amostras de paciente:
As amostras séricas são diluídas e medidas automaticamente com N diluente a 1 : 400 (IgG) ou 1 : 20
(IgA, IgM), ou no protocolo de ensaio de sensibilidade (IgA, IgM), a 1 : 5. A IgG nas amostras de urina
ou de líquido cefalorraquidiano é determinada sempre num protocolo de ensaio separado, a partir de
amostras não diluídas. Para os valores medidos que se encontrem fora do escalão de referência, a
medição pode ser repetida a partir de uma diluição de amostra superior ou inferior (IgG no protocolo
de ensaio do soro). As repetições de medição a partir de outras diluições de amostras estão descritas
nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Controlo interno de qualidade
Os N/T Controlos de proteína SL/L, M e H deverão ser utilizados após a preparação de uma curva
de referência, após a primeira abertura de um frasco de antisoro ou em cada série de amostras
séricas. Na determinação da IgG na urina ou no líquido cefalorraquidiano, o N/T Controlo de proteína LC deverá ser utilizado de forma análoga. Na preparação e na avaliação do teste, os controlos
são tratados como amostras de paciente. Os valores teóricos e os escalões de confiança deverão
ser retirados da tabela de valores teóricos do controlo respectivo
Cálculo dos resultados
O resultado é calculado automaticamente mediante uma função logit-log.
Limitações do procedimento
As turvações e as partículas nas amostras podem perturbar a determinação. Por isso, as amostras
que contêm partículas deverão ser centrifugadas antes da determinação.
Em amostras de controlo ou de ensaios interlaboratoriais pode acontecer obterem-se resultados
divergentes, conforme o método de análise utilizado, em virtude da elaboração técnica ou da idade
das amostras. Pode ser, por isso, necessário proceder a uma avaliação destes resultados em
função dos valores específicos do método utilizado.
Valores esperados
Escalões de referência válidos para amostras séricas de adultos sãos (9):
Proteína
IgG
IgA
IgM
Princípio do método
As proteínas contidas no soro humano, urina ou líquido cefalorraquidiano formam imunocomplexos numa reacção imunoquímica com anticorpos específicos, que dispersam a luz incidente. A
intensidade da luz difusa depende da concentração da respectiva proteína na amostra. A avaliação
faz-se comparando com um padrão conhecido da concentração.
Reagentes
Conteúdo da embalagem
N Anti-soro contra IgG humana, código OSAS ou
N Anti-soro contra IgA humana, código OSAR ou
N Anti-soro contra IgM humana, código OSAT
1 frasco de 5 ml ou 2ml de cada
Composição
Os N Antisoros são soros fluídos de origem animal e são produzidos mediante a imunização de
coelhos com imunoglobulinas humanas (IgG, IgA ou IgM) altamente purificadas. Um procedimento
especial de estabilização elimina os componentes lábeis. As impurezas microbianas são eliminadas,
de forma considerável, através da filtração e da adição de azida de sódio (< 1 g/l) como conservante.
Purificados por imunoadsorção na fase sólida, os anti-soros específicos são sujeitos a um controlo
especial e calibrados de forma a garantirem uma utilização óptima nos sistemas BN*. Os títulos de
anticorpos (T) são determinados por imunodifusão radial e vêm expressos no rótulo do frasco. Eles
indicam quantos mg de aní’geno são precipitados em gel de agarose por 1 ml do respectivo anti-soro.
Advertências e medidas de precaução
1. Só para uso diagnóstico in vitro.
2. Precauções a observar ao lidar com reagentes para diagnóstico in vitro com teor de azida sódica:
Evitar ingerir e todo o contacto com a pele ou mucosas! Com metais pesados, como cobre ou
chumbo, a azida de sódio pode formar azidas explosivas!
Preparação dos reagentes
Os N Anti-soros estão prontos para o uso e podem ser utilizados sem qualquer tratamento prévio.
Estabilidade e conservação
Conservação entre +2 e +8 °C:
A estabilidade está indicada no rótulo;
Estabilidade depois de aberto:
4 semanas desde que os frascos, imediatamente após o uso, sejam firmemente fechados e conservados entre +2 bis +8 °C para evitar a contaminação (p. ex., através de microorganismos);
Em caso de armazenagem, os N antisoros podem apresentar floculações ou turvações que não
são provocadas por contaminação microbiana e não prejudicam, de nenhum modo, a actividade.
Nesses casos, os antisoros deverão ser filtrados antes de serem usados. Para esse efeito, são
adequados os filtros descartáveis com um diâmetro de poros de 0,45 µm. Não congelar.
Estabilidade nos sistemas BN*:
5 dias com 8 horas ou um período de tempo equivalente (máximo de 40 horas);
Sistema BN* II: o aumento da estabilidade dos reagentes em caso de utilização de BN* II Evaporation Stoppers (N.º de pedido OVLE) deverá ser retirada da instruções de serviço;
Sistema BN ProSpec**: a estabilidade dos reagentes deverá ser retirada das instruções de serviço.
Materiais necessários mas não fornecidos
Sistema BN*
N Proteína Standard SL (humana), código OQIM
N/T Controlos de proteína SL/L, M e H (humana), códigos OQIN, OQIO e OQIP
N/T Controlo de proteína LC (humana), código OQLW
N Tampão de reacção, código OUMS
N Diluente, código OUMT
N Reagente complementar/Precipitação, código OUMU
BN* II Evaporation Stoppers (opcionais), N.º de pedido OVLE
Material de consumo e equipamento tal como descrito nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Amostras
Escalão de referência para a IgG na urina:
IgG na segunda urina da manhã inferior a 9,6 mg/l segundo (8); Valor corrigido por referência com
a preparação de referência CRM 470.
Escalão de referência para a IgG no líquido cefalorraquidiano:
IgG no líquido cefalorraquidiano inferior a 34 mg/l segundo (10); Valor corrigido por referência com
a preparação de referência CRM 470.
Além disso, cada laboratório deverá determinar os seus escalões de referência próprios, já que
estes dependem de muitos factores que podem variar consoante a população examinada.
Características do teste
Sensibilidade e âmbito de medição
A sensibilidade da determinação é definida pela curva inferior da curva de referência e depende,
assim, da concentração das proteínas no N Protein-Standard SL. Os escalões de medição típicos
estão indicados nas instruções de serviço dos sistemas BN*.
Especificidade
Os N Anti-soros são específicos da respectiva proteína.
Precisão
Os seguintes coeficientes (CV) de variação foram determinados com os N Anti-soros contra imunoglobulinas humanas, nos sistemas BN*:
Proteína
IgG
IgA
IgM
Notas:
1. Os pormenores para a manipulação dos sistemas BN* deverão ser retirados das instruções de
serviço respectivas.
2. Os reagentes não deverão ser mais usados após a data de expiração indicada.
3. Antes da medição no sistema BN* A/BN* 100, é necessário que os reagentes e as amostras tenham
atingido a temperatura ambiente (+15 a +25°C). Os reagentes e as amostras armazenadas entre +2
bis +8 °C podem ser utilizadas directamente no sistema BN* II/BN ProSpec** para a determinação.
Protocolos de ensaio nos sistemas BN*
Os protocolos de ensaio estão contidos nas instruções de serviço e no Software do aparelho respectivo. Todos os passos são executados automaticamente pelo sistema.
Definição da curva de referência:
As curvas de referência são obtidas por uma calibração de pontos múltiplos. As séries de diluição
do N Proteína Standard SL com o N Diluente são efectuadas automaticamente.
OSAR G09 C0540 (414) H
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Edição Janeiro 2002
Intra-Assay
(n = 20)
valor médio
[g/l]
13,5
2,78
1,13
Inter-Assay
(n = 10)
CV
[%]
valor médio
[g/l]
CV
[%]
2,1
2,0
2,7
13,2
2,96
1,17
2,7
3,5
1,9
Comparação de métodos
No sistema BN* (y) foram medidas 100 amostras séricas com os N antisoros contra a imunoglobulina humana e definidas, comparativamente, com um método de imunodifusão radial (x) (NORPartigen***). A correlação dos resultados apresentou os seguintes valores:
Proteína
IgG
IgA
IgM
Regressão segundo Passing Bablok (11)
y(BN*) = 1,09 x (RID) - 0,12 g/l
y(BN*) = 0,99 x (RID) + 0,06 g/l
y(BN*) = 1,08 x (RID) - 0,06 g/l
Coeficiente
de correlação
0,97
0,99
0,99
Nota
Os valores indicados para as características dos testes constituem resultados típicos e não deverão
ser encarados como uma especificação para os ensaios N Anti-soros contra IgG, IgA, e IgM humanas.
Bibliografia
Vide a página 1.
* BN é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.
** BN ProSpec e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros
países é uma marca de fábrica da Dade Behring Marburg GmbH nos EUA.
*** Partigen e uma marca registada da Dade Behring Marburg GmbH na Alemanha e noutros países.
Para a medição, utilizar amostras séricas humanas, tão frescas quanto possível (tempo máximo de
conservação: 8 dias entre +2 a 8 °C), ou conservadas congeladas, bem como amostras frescas de
urina e de líquido cefalorraquidiano. Se as amostras foram congeladas nas primeiras 24 horas a
contar do momento da colheita, elas podem ser conservadas a menos de -20 °C até 1 ano, desde
que se evite descongelar e congelar repetidamente. As amostras de soro devem estar completamente coaguladas e não apresentar partículas ou vestígios de fibrina após a centrifugação.
Amostras lipémicas, ou amostras congeladas que se apresentem turvas quando descongeladas,
têm de ser clarificadas por centrifugação (10 min a aprox. 15000 x g) antes da determinação. Para
a determinação da IgG na urina são adequadas amostras de urina espontânea e de urina recolhida. As amostras de urina não podem ser congeladas. Cada amostra de urina e de líquido cefalorraquidiano deverá ser centrifugada antes da análise.
Procedimento
2,5.° - 97,5.° percentil
7,0 - 16,0 g/l
0,7 - 4,0 g/l
0,4 - 2,3 g/l
Dade Behring Marburg GmbH
Emil-von-Behring-Str. 76
D-35041 Marburg
Symbols Key / Symbolschlüssel / Explication des Symboles /
Interpretazione simboli / Clave de los Símbolos / Chave dos Símbolos
Manufactured by / Hergestellt von / Fabriqué par / Prodotto da / Fabricado por
IVD
In Vitro Diagnostic Medical Device / In Vitro Diagnosticum / Dispositif Médical
Diagnostic In Vitro / Dispositivo Medico per Diagnostica In Vitro / Producto sanitario
para el Diagnóstico In Vitro
LOT
Lot Number / Chargenbezeichnung / Numéro de Lot / Numero di Lotto / Número de Lote
EXP
Expiration Date / Verfalldatum / Date de Péremtion / data di scadenza / Fecha de
vencimiento / até termo da validade
CCYY-MM-DD
8 C
2 C
Storage Temperature / Lagertemperatur / Température de Conservation / Temperatura
di conservazione / Temperatura de almacenamiento / Temperatura de armazenagem
CE Mark / CE-Zeichen / Marquage CE / Marchio CE / CE Marca / Marca CE
REF
Catalogue Number / Katalog Nummer / Référence / Codice Catalogo / Número de
Catálogo
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