Movilidad y variación de fase. Implicaciones en la colonización

Movilidad y variación de fase. Implicaciones en la
colonización competitiva de la rizosfera por
Pseudomonas fluorescens F113
A. Navazo, E. Barahona, RI Oruezábal, D. Aguirre de Cárcer, M. Redondo-Nieto,
R. Rivilla y M. Martín. Departamento de Biología UAM.
MEC BIO 2006 08596
gacSF113
gacSsadBWspR-
wspRgacS-
sadBgacS-
sadB-
wspR-
Porcentaje de colonias recuperadas (ápice de la raíz)
1. Estudiar la regulación de la síntesis del filamento flagelar y la
capacidad de movimiento en Pseudomonas fluorescens F113.
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
F113/F113km
F113/wspR
F113/GSW
F113/KSW
2. Estudiar el mecanismo de acción de las recombinasas específicas
de sitio para dar lugar a variantes de fase.
• Las recombinasas se sobreexpresan en fase estacionaria (MartínezGranero et al. Microbiology 2005).
• La rizosfera ejerce una presión selectiva hacia variantes de fase más
móviles que aparecen por acción de recombinasas específicas de sitio
(Martínez-Granero et al. Appl. Environ. Microbiol 2006).
• Los mutantes en mutS presentan el mismo fenotipo que las estirpes
que sobreexpresan las recombinasas específicas de sitio.
Futuros experimentos de etiquetado de las recombinasas, expresion
traduccional y posterior inmunoprecipitación de las recombinasas unidas al
ADN.
3. Estudiar el genotipo y fenotipo de los variantes de fase
provenientes de la sobreexpresión de las recombinasas específicas
de sitio (sss y xerD).
• Fenotipo: los variantes son mutantes en el sistema de dos componentes
GacA/GacS, mayor movilidad asociada a baja capacidad de formación de “biofilms”.
Form ación de biofilm
0,8
F113
100
v5
v12
0,6
0,4
v35
0,2
Percentage of recovered colonies
1
silvestre
variante
80
60
40
20
0
0
V5
V12
V35
Los variantes de fase colonizan la rizosfera desplazando a la estirpe silvestre en
análisis de competitividad.
• Genotipo:
- análisis proteómico de variantes, mutantes
GacA/GacS y estirpe silvestre.
- hibridación sustractiva de cDNAs
Para facilitar el análisis del genotipo, se ha
secuenciado el genoma de F113.
- Las regiones con las que trabajamos se
encuentran en la secuencia.
- Servidor blast privado para los grupos
colaboradores (Dowling, O’Gara).
4. Aplicaciones biotecnológicas: Biocontrol y Rizorremediación.
• Biocontrol, se están llevando a cabo en colaboración con la Dra. Rosa Mª Pérez
del Laboratorio de Patología Vegetal del IFAPA Churriana Málaga.
Fusarium oxysporum - tomate
Phytophthora cactorum - fresa
Estirpe silvestre
Variante 35
Triple mutante en sadB, wspR, KinB.
• Rizorremediación, una vez comprobada la eficacia de F113 modificada
genéticamente con los genes bph para degradar PCBs (Villacieros et al., Appl.
Environ, Microbiol. 2005).
Se ha analizado el impacto ocasionado por parte de la introducción de un sistema
integrado sauce-pseudomonas modificada genéticamente en las poblaciones de
la rizosfera y del suelo circundante.