detección de toxinas paralizante, diarreica y amnésica en mariscos

de toxinas en mariscos de la XI Región
Cienc. Tecnol. Mar, 27 (2): 33-42, Detección
2004
33
DETECCIÓN DE TOXINAS PARALIZANTE, DIARREICA Y AMNÉSICA EN MARISCOS DE LA XI
REGIÓN POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN (HPLC)
Y BIOENSAYO EN RATONES
DETECTION OF PSP, DSP AND ASP IN SHELLFISH COLLECTED ON XI REGION OF CHILE BY HPLCFLUOROMETRY AND MOUSE BIOASSAY
ORIALIS VILLARROEL G.
Subdepartamento Laboratorios del Ambiente
Instituto de Salud Pública de Chile
Casilla 48, Santiago, Chile.
e-mail:ovillarr@ispch.cl
Recepción: 20 de noviembre de 1999 – Versión corregida aceptada: 23 de diciembre de 2003.
RESUMEN
El objetivo de este trabajo fue determinar el nivel tóxico presente en los mariscos de la Región de
Aysén, tanto para la toxina paralizante (VPM) como para la toxina diarreica (VDM), mediante el bioensayo
de ratón. Además, investigar la presencia de toxina amnésica (VAM) por cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC). También se identificó la presencia de saxitoxina (STX), neosaxitoxina (neoSTX),
gonyautoxinas (GTX1-4), ácido okadaico (OA) y dinophysis toxina-1 (DTX-1) por HPLC en los mariscos
recolectados. Se detectó toxina paralizante en todas las estaciones del área geográfica estudiada por
HPLC. Además, se detectó en niveles bajos la toxina diarreica por HPLC solamente en la estación Nº 5
(Melinka). No se encontró toxina amnésica en ninguna de las muestras estudiadas. El per fil tóxico de la
toxina paralizante muestra la presencia de STX, neoSTX y GTX1-4.
Palabras claves: Marea roja, toxinas marinas, cromatografía líquida de alta resolución, bioensayo.
ABSTRACT
The objective of the present work was to determine the toxicological status of the amnesic, diarrheic
and paralytic shellfish poisons in the XI Region of Chile. This was achieved with the mouse bioassay, the
only international method accepted to certify shellfish wholeness for human consumption. Furthermore,
the presence and quantities of saxitoxin (STX), gonyautoxins (GTX1-4), okadaic acid (OA) and dinophysistoxin1 (DTX-1) was determined by high performance liquid chromatographic (HPLC) method in different shellfish
species from the Aysén Region. Our HPLC results show that paralytic toxin was found in shellfish from all
stations studied. Diarrheic toxin was found only in station No 5 (Melinka) but in low quantities, and amnesic
toxin was not detected at all. Paralytic toxin profile shows presence of STX, neoSTX and GTX1-4.
Key words: Red tide, marine toxins, high performance liquid chromatography, bioassay.
34
Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
INTRODUCCIÓN
Marea roja o floraciones algales nocivas se
refiere al fenómeno de proliferación de microalgas
nocivas en el fitoplancton. Conocer los perfiles
de los venenos presentes en las áreas afectadas
es de vital importancia epidemiológica, dado que
las toxinas paralizantes y diarreicas se han presentado en la X, XI y XII Regiones del país ocasionando numerosas intoxicaciones masivas por el
consumo de mariscos contaminados.
Toxina paralizante: se presentó por primera
vez en el país en 1972, en la Región de
Magallanes y desde 1993 en la Región de Aysén.
Es producido por Alexandrium catenella aunque
últimamente también se ha citado en el país a
Alexandrium ostenfeldi (Lembeye, G; Uribe, J. C.).
El mecanismo de acción de las toxinas paralizantes consiste en el bloqueo selectivo de los
canales de sodio, lo que impide el flujo necesario
de iones sodio para transmitir el potencial de acción de la membrana.
La intoxicación por PSP en el ser humano, produce desde un ligero adormecimiento u hormigueo
en la región peribucal hasta una parálisis total y
muerte por insuficiencia respiratoria, siendo lo
más frecuente la sensación de picazón alrededor
de los labios, de las encías y de la lengua al cabo
de los primeros 5 minutos.
En los casos moderados o graves, esta sensación en un período de 4 a 6 horas se extiende
a los brazos, piernas y cuello de manera que es
necesario un gran esfuerzo para realizar movimientos. En los casos mortales el paciente suele fallecer debido a parálisis respiratoria al cabo de 2
a 12 horas después de haber ingerido el alimento contaminado.
El tratamiento consiste en la administración
de suero glucosado al 10%. Adicionalmente, se
aconseja la administración de diuréticos con excepción de aquellos pacientes en que su uso está
contraindicado. En los casos de mayor gravedad
se requiere de ventilación mecánica permanente.
Toxina diarreica de los moluscos se presentó
por primera vez en la X Región durante 1979 y,
posteriormente, en la XI Región en febrero de 1984
causando numerosos casos de diarrea en la población siendo el agente causal Dinophysis acuta,
posteriormente reapareció en 1991 provocando la
intoxicación de aproximadamente 150 personas
por consumo de choritos, permaneciendo en forma endémica hasta la fecha en la Región de Aysén.
En Chile se pueden citar además de D. acuta,
a D. acuminata y D. rotundata en la bahía de Concepción; D. argus, D. caudata y D. operculata en
el archipiélago de Juan Fernández. Últimamente
también se ha detectado D. acuminata en la XI
Región. D. acuta es el organismo más frecuente
en nuestro país.
El mecanismo de acción del ácido okadaico
y sus derivados no ha sido completamente dilucidado hasta ahora, pero se sabe que son
potentes inhibidores de las proteínas fosfatasas, enzimas que revier ten los efectos de
las proteínas quinasas, removiendo grupos
fosfatos.
Luego de la ingestión de mariscos contaminados con toxina diarreica, los síntomas en humanos comienzan entre los 30 minutos y las 12 horas, con un promedio de 4 horas. Una vez que se
presentan éstos, el estado puede durar por 3 días.
Los síntomas más frecuentes son: escalofríos,
dolor abdominal difuso, náuseas, vómitos, diarrea
abundante y deshidratación.
El tratamiento es sintomático, se deben tomar las siguientes medidas: Si no se presenta
vómito, evacuar el veneno del estómago induciendo el vómito o efectuar un lavado gástrico con
suero fisiológico. En caso de dolor, administrar
antiespasmódicos inyectables.
Aparte de las consecuencias inmediatas de
la intoxicación por toxina diarreica, se ha reportado que el ácido okadaico y DTX-1 son potentes
promotores de tumores.
La yessotoxina (YTX) producida por Protoceratium reticulatum es una sustancia polietérea
disulfatada, está clasificada en el grupo de las
diarreicas a pesar que no tiene efectos diarreicos
ya que no inhibe la proteína fosfatasa, (en la
actualidad se está reevaluando esta clasificación). Aunque el mecanismo de acción no está
totalmente dilucidado, estudios con linfocitos humanos sugiere que actúa sobre los canales de
calcio celulares, aumentando los niveles de estos iones. Las dosis letales en ratón oscilan entre 100 y 400 µg/kg siendo el corazón el órgano
diana.
Las YTXs presentan menor toxicidad por vía
oral por lo que la legislación europea (Decisión
2002/225/CEE) permite un nivel de tolerancia
superior al establecido para el resto de las toxinas liposolubles, quedando el nivel máximo aceptado en 1 mg/kg de cuerpo entero o cualquier
parte comestible por separado del marisco.
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
Toxina amnésica. El ácido domoico, también
conocido como toxina amnésica es producido
por las diatomeas del plancton marino
Pseudonitzschia multiserie, Pseudonitzschia
australis y Pseudonitzschia pseudodelicatissima.
Cuando esta toxina, es consumida a través de
los moluscos por el ser humano, produce un cuadro de intoxicación que puede causar problemas
gastrointestinales y neurológicos como pérdida
de memoria de corto tiempo, ya que daña las
células del hipocampo y en aquellos casos de
intoxicaciones más graves, ha ocasionado la
muerte.
Los objetivos de este trabajo son:
*
Determinar el nivel tóxico de los mariscos tanto para la toxina paralizante como diarreica,
utilizando el bioensayo en ratón.
*
Investigar la presencia de toxina amnésica por
HPLC.
*
Identificar y cuantificar la presencia de
saxitoxina, neosaxitoxina y gonyautoxina 1, 2,
3 y 4 (VPM); ácido okadaico y dinofisistoxina1 (VDM) por HPLC en los mariscos recolectados en la Región de Aysén.
MATERIAL Y MÉTODOS
Las muestras se recolectaron durante el crucero oceanográfico Cimar 4 - Fiordos realizado en
los fiordos y canales comprendidos entre la Boca
del Guafo y el estero Elefantes (XI Región), a bordo del AGOR “Vidal Gormaz” embarcación de la
Armada de Chile, entre el 25 de febrero y el 9 de
marzo de 1999 (Fig. 1).
35
tón (UR) empleando la Tabla de Sommer y la
concentración de toxina se calcula usando el
Factor de Conversión, asumiendo que la toxina
corresponde a saxitoxina. El análisis se considera positivo si 2 de los 3 ratones inyectados
mueren en el lapso de 1 hora con los síntomas
característicos de la intoxicación.
El método es cuantitativo y el límite de detección en nuestro Laboratorio es de 32 µg STX
eq/100 g de carne. El estándar de STX es
suministrado por la FDA de EE.UU.
Valores superiores a 80 µg/100 g se considera peligroso y no apto para el consumo.
b) Cromatografía líquida de alta resolución
(Oshima et al., 1995). Las toxinas son
extraídas en medio ácido y a ebullición,
centrifugadas y purificadas a través de
cartridge Sep-pak C18. Posteriormente el extracto se analiza por HPLC provisto de un detector de fluorescencia mediante derivatización
post columna. Las condiciones cromatográficas fueron: columna RP C-8 (250 mm-4),
T° columna: 30 °C, T° de reactor: 78 °C, flujo
fase móvil: 0,8 ml/min, flujo de oxidante y
acidificante: 0,3 ml/min, λ de Ex: 330 nm y
de Em: 390 nm. Fase móvil para STX y NeoSTX:
1-heptanosulfonato de sodio 2 mM en fosfato
de amonio 30 mM, pH 7,1: acetonitrilo
(100+3) y para GTX1-GTX4: 1-heptanosulfonato de sodio 2mM en fosfato de amonio
10 mM, pH 7,1. Como reactivo oxidante se
usó ácido periódico 7 mM en buffer de fosfato
de potasio 50 mM, pH 9 y como reactivo
acidificante el ácido acético 0,5 M.
Toxina diarreica:
Se muestrearon 8 de las 11 estaciones programadas. Las muestras fueron recolectadas por
buzos mariscadores (Tabla I).
Los métodos utilizados fueron:
Toxina paralizante:
a) Bioensayo en ratón (A.O.A.C., 1984). Este método consiste en inyectar intraperitonealmente
1 ml del sobrenadante de un extracto ácido de
moluscos bivalvos a cada uno de 3 ratones de
la cepa CF-1 de 19 a 21 gramos de peso y la
determinación del tiempo de muerte. La sensibilidad de la colonia de ratones usada en el
ensayo debe determinarse calculando el Factor de Conversión (CF) después de la inyección
intraperitoneal del estándar de saxitoxina (STX).
El tiempo de muerte se convierte a unidad ra-
a) Bioensayo en ratón, (Yasumoto, 1984 modificado). Este procedimiento es aplicable a
los análisis de ácido okadaico (AO) y
dinofisistoxinas (DTXs), pectenotoxinas
(PTXs) y yesotoxinas (YTXs) en moluscos
bivalvos. Consiste en homogeneizar el
hepatopáncreas de mariscos y extraer con tres
volúmenes de acetona, evaporar y luego eliminar la toxina paralizante por partición en
diclorometano, evaporar este último solvente
y resuspender en tween 60, luego inyectar 1
mL intraperitoneal a cada uno de los tres ratones de 18 a 20 gramos de peso. El
bioensayo se considera positivo cuando se
produce la muerte de al menos 2 de 3 ratones inyectados en un período menor o igual a
24 horas tras la inyección. El límite de detección es 0,8 µg de AO eq/g de hepatopáncreas.
36
Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
74° W
73°
Golfo Corcovado
3
2
B.Tic-toc
4
1
5
44°
6
Canal Jacaf
P. Puyuguapi
7
8
P. Cisnes
9
10
Canal Puyuguapi
45°
11
I. Meninea
Canal Darwin
15
35
14
36
32
33
24
21a
31
23
46°
P. Chacabuco
Seno Aysén
22
34
21
19
16
30 Estero
Quitralco
80° W
an
lef
oE
ter
20°
Isla San Ambrosio
Isla Salas y Gómez
30°
30°
o
105 20’
109o 20’
Isla de Pascua
Arch. Juan Fernández
I.
60o 46’
o
dr
an
ej lkirk
Se
Al
o
33 37’
Es
Estero
Cupquelán
60° W
o
80 05’
Isla San Félix
o
26 27’
26
29
o
26 27’
tes
20° S
25
53o 46’
37
17 17a
18
12
13
I. Robins
on Crusoe
78o 49’
40°
40°
27
90°W
60°
53° W
rio Chileno Antártico
Territo
60°
50°
47°
47 S
Fig. 1: Posición de las estaciones de muestreo oceanográfico en el área de estudio.
Fig. 1: Locations of oceanographic sampling stations in the study area.
37
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
Tabla I. Procedencia y recursos muestreados.
Table I. Origin of shellfish samples collected.
Nº Estación
Fecha
5
27.02.99
Melinka
Localidad
43° 54’ S-73° 48’ W
18
01.03.99
Punta Tortuga
45° 20’ S-73° 06’ W
27
03.03.99
Islotes Ruiz – Punta Leopardo
46° 30’ S-73° 51’ W
30
04.03.99
Estero Quitralco
45° 46’ S-73° 32’ W
33
37
04.03.99
04.03.99
Puerto Harchy
Boca Estero Duble Norte
45° 43’ S-73° 53’ W
45° 29’ S-73° 18’ W
35
05.03.99
Punta San Emilio, Canal Darwin
45° 27’ S-73° 47’ W
11
05.03.99
Islote El Morro
45° 09’ S-73° 38’ W
Los síntomas que presenta el ratón debido a
las YTXs mediante inyección intraperitoneal son
similares a VPM con un tiempo de supervivencia por encima de 20 minutos, preferentemente entre 40 min y 5 h.
b) Cromatografía líquida de alta resolución para
detectar AO y DTXs (Lee et al., 1989). El método consiste en una extracción metanólica
de la toxina presente en el hepatopáncreas
del molusco, derivatización con 9-7antr yldiazometano (ADAM) y posterior separación
y cuantificación por cromatografía líquida de
alta resolución (HPLC) utilizando detector de
fluorescencia.
Las condiciones cromatográficas fueron: columna RP C-18 (4 µm, 250 mm x 4 mm); λ
excitación 365 y λ emisión 415 nm; fase móvil acetonitrilo-agua (75+25); flujo 1,1 mL/
min; temperatura 40 ºC.
Coordenadas
Recurso
almejas
locos
cholgas
picorocos
cholgas
choritos
cholgas
choritos
cholgas
choritos
choros
ostiones (músculo)
ostiones (vísceras)
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
almejas
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
siste en extraer la YTX desde la glándula digestiva (1 g) con metanol/agua (8+2), limpieza por sep-pak y derivatización con DMEQ-TAD.
El análisis se realiza mediante detector de fluorescencia, observándose en el cromatograma
dos peaks debido a la formación de dos
epímeros producidos por el reactivo de
derivatización.
El estándar de YTX y el reactivo DMEQ-TAD
fueron proporcionados por Dr. T. Yasumoto.
Toxina amnésica:
Método HPLC: Consiste en extraer el ácido
domoico de los mariscos con metanol (1+1),
siguiendo el procedimiento descrito por
Quilliam et al. (1995).
Los estándares fueron adquiridos en Wako
Chemicals USA y derivatizados de la misma
forma que las muestras.
El equipo utilizado fue un HPLC con detector
de arreglo de diodos, λ 242. Las condiciones
de trabajo fueron: columna RP C18 de 250 x
4,6 mm D. I., 40 ºC, fase móvil acetonitrilo:
0,1% ácido trifluoroacético (15+85) y volumen
de inyección 20 µl.
c) Cromatografía líquida de alta resolución para
detectar YTXs (Yasumoto & Takizawa). Con-
Se separó cromatográficamente el ácido
domoico del triptofano (aminoácido presente
38
Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
en los mariscos) ya que éste puede dar falsos positivos.
Este método permite confirmar la toxina ya
que el detector arreglo de diodos nos muestra el espectro de absorbancia del compuesto
y además nos indica su pureza.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Como consecuencia del brote ocurrido en enero de 1991 el Ser vicio de Salud Aysén y el Instituto de Salud Pública de Chile iniciaron un programa de vigilancia de la toxina diarreica en
moluscos bivalvos en todo el litoral de la región,
principalmente de los recursos choritos, cholgas
y almejas, detectándose en mayo de 1992 la
presencia de la toxina paralizante, hecho no descrito hasta ese momento en Aysén. Los resultados obtenidos hasta esta fecha nos indicaban
concentraciones globales de estas toxinas (método bioensayo en ratón), sin embargo ante la
adquisición de un cromatógrafo líquido de alta
resolución (HPLC) e implementación de nuevas
técnicas analíticas, el laboratorio tiene la oportunidad de conocer tanto las concentraciones
como los per files de las toxinas presentes en
base a los estándares disponibles en el Instituto de Salud Pública de Chile. Considerando estos antecedentes se estimó conveniente efectuar este estudio para conocer la realidad de las
toxinas durante el período en que se realizó este
crucero.
El crucero se realizó entre el 25 de febrero
al 9 de marzo de 1999 en el área geográfica
donde frecuentemente se detecta la presencia
de las toxinas paralizantes y diarreicas y contempló 8 estaciones de muestreo entre la Boca
del Guafo y el estero Elefantes de la XI Región
(Fig. 1). Los resultados obtenidos para la
cuantificación del VPM y VDM por bioensayo
en ratones y VAM por HPLC, se muestran en la
Tabla II.
Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) por
bioensayo en ratón: En Chile como en la mayor
Tabla II. Resultados
Table II. Results.
Nº Estación
Localidad
5
Melinka
18
Punta Tortuga
27
Islotes Ruiz – Punta Leopardo
30
Estero Quitralco
33
37
Puerto Harchy
Boca Estero Dublé Norte
35
Punta San Emilio, Canal Darwin
11
Islote El Morro
Recurso
almejas
locos
cholgas
picorocos
cholgas
choritos
cholgas
choritos
cholgas
choritos
choros
ostiones
(músculo)
ostiones
(vísceras)
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
almejas
locos (músculo)
locos (vísceras)
choritos
locos (músculo)
locos (vísceras)
VPM
VDM
VAM
bioensayo
HPLC
ND
ND
ND
ND
36
ND
ND
ND
450
158
52
35
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
-
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
42
ND
ND
41
55
129
165
42
35
142
54
35
ND
60
33
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
(mg/100g)
bioensayo
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
parte de los países que realizan control de toxinas VPM en los mariscos, se utiliza el bioensayo
en ratón.
Todas las estaciones desde el paralelo 45°
09’ S al sur, excepto la estación Nº 27 Islote
Ruiz-Punta Leopardo (46° 30’ S - 73° 51’ W)
ubicada en el extremo sur del estero Elefantes,
presentaron toxina paralizante por bioensayo en
ratón.
La concentración más alta de VPM correspondió al estero Quitralco (45° 46’ S - 73° 32’
W) con 450 µg/100 g de mariscos en el recurso cholguas. Se obser vó que en la misma estación el recurso más contaminado fue cholga
(Aulacomya ater) con 450 µg/100 g, seguida
de chorito (Mytilus chilensis) con 158 µg/100
g, choros (Choromytilus chorus) con 52 µg/100
g, locos (Concholepas concholepas) con 41 µg/
100 g de músculo) y ostiones (Argopecten
purpuratus) con 35 µg/100 g de músculo.
En las estaciones Nº 33, 35 y 37 solamente los choritos contenían concentraciones de
toxina paralizante por sobre los 80 µg/100 g,
límite máximo establecido en nuestra legislación.
La estación Nº 5 correspondiente a la localidad de Melinka no presentó VPM ni VDM por
bioensayo en ratón
Si comparamos estos resultados con los obtenidos durante el año 1992 en que los niveles
de VPM se encontraban entre 30 y 50 µg/100
gramos de carne y considerando que con el
transcurso de los años estas concentraciones
fueron aumentando, para alcanzar el año 1994
niveles de 550 µg/100 gramos y en 1998 niveles de 99.000 µg/100 gramos en choritos del
estero Quitralco, podemos concluir que esta
toxina se ha mantenido en forma endémica en
la región aunque en niveles más bajos que los
presentados en los últimos años.
Veneno Paralizante de Moluscos (VPM) por
HPLC: Se analizó por HPLC un recurso de cada
estación muestreada para conocer el per fil de
las toxinas paralizantes. Se obser va en todas
las muestras, incluida la Est Nº 5 saxitoxina,
neosaxitoxina, gonyautoxinas 1, 2, 3 y 4 (Figs.
2, 3). En todos los casos las concentraciones
encontradas de GTX 2 y GTX 3 fueron más altas
que GTX 1 y GTX 4. Estos resultados concuerdan con los encontrados por Lagos en choritos
recolectados en canal Errázuriz, XI Región, en
1994.
39
Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) por
bioensayo en raton: Para analizar el veneno
diarreico de los moluscos se usó el método
Yasumoto 1984 modificado ya que en el área
estudiada estaba presente la toxina paralizante, por lo que se tuvo que eliminar esta toxina
previo a la inyección intraperitoneal a los ratones. No se detectó veneno diarreico en ninguna de las muestras analizadas.
Veneno Diarreico de Moluscos (VDM) por
HPLC: En cuanto al análisis de ácido okadaico
(OA) y dinofisistoxina-1 (DTX-1) por HPLC, se detectó la toxina solamente en la muestra procedente de la Estación Nº 5 (Melinka) y en niveles
trazas.
Yesotoxina (YTX): Posteriormente y aunque
no estaba en los objetivos de este trabajo se
analizaron tres recursos correspondientes a
las estaciones 5, 27 y 35 para detectar esta
toxina considerada componente del VDM, encontrándola solamente en la Estación Nº 5
(Fig. 4).
Veneno Amnésico de Moluscos (VAM) por
HPLC: No se detectó la toxina amnésica en ninguna de las muestras analizadas.
Lamentablemente no se pudieron obtener las
muestras correspondientes al canal Puyuhuapi
y canal Yacaf localidades presumiblemente contaminadas con toxina diarreica y que se habían
programado en este crucero.
CONCLUSIONES
Se encontró toxina paralizante en todas las estaciones del área geográfica estudiada por HPLC.
Se detectó toxina diarreica (ácido okadaico y
dinophysis toxina-1) solamente en la estación Nº
5 (Melinka) y en niveles trazas.
No se detectó toxina amnésica en el período
de muestreo realizado entre el 25 de febrero y el
09 de marzo en la región de Aysén.
El per fil de las toxinas paralizantes evidenció
la presencia de saxitoxina, neosaxitoxina y
gonyautoxinas 1, 2, 3 y 4.
Los niveles de toxina paralizante fueron inferiores a los reportados con anterioridad por el
Servicio de Salud Aysén.
Se detectó yesotoxina en la estación Nº 5.
40
15,80, SAXITOXINA
5,42
6,05
2,25
40
2,98
3,38
3,87
Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
35
30
25
20
13,50, NEOSAXITOXINA
15
8,26
5
12,17
10
0
0
4
2
8
6
10
Retention Time (min)
12
14
16
18
20
Fig. 2: Cromatograma por HPLC de STX y neoSTX en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 2: HPLC chromatogram of STX and neoSTX in a sample of Aulacomya ater.
3,31
150
140
130
12,97, GTX 3
120
110
100
17,00, GTX 2
90
80
70
60
11,81
10
10,47
5,32
5,97
20
9,07, GTX 1
4,61
4,81
30
7,64, GTX 4
2,73
50
40
0
0
2
4
6
8
10
12
14
Retention Time (min)
16
Fig. 3: Cromatograma por HPLC de GTXs en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 3: HPLC chromatogram of GTXs in a sample of Aulacomya ater.
18
20
22
24
41
Detección de toxinas en mariscos de la XI Región
CH.
I C. S 2.50
A - 21
ATT 3
OFFS 10
08/09/00
STANDARD YESSOTOXINA
5
9.07
10
1.04
3.52
3.44
7.91
YTX
14.96
15
01:38
20
23.94
25
30
ESCAPE
CH.
I C. S
NOISE
CH.
20.00
ATT
3
33
I C. S 2 .50
A - 21
ATT 3
OFFS 10
08/09/00
05:57
ESTACIONES
ESTACIÓN MELINKA CHOLGAS
1.94
5
4.93
4.59
7.42
10
S .P
A00
11.00
8.99
10.07
17.23
20
25
30
S .P 1600
Fig. 4: Cromatograma por HPLC de YTX en una muestra de Aulacomya ater.
Fig. 4: HPLC chromatogram of YTX in a sample of Aulacomya ater.
YTX
14.16
15
9.63
42
Revista Ciencia y Tecnología del Mar, Vol. 27 (2) - 2004
AGRADECIMIENTOS
Se agradece al Comité Oceanográfico Nacional, al personal del AGOR “Vidal Gormaz”. Se agradece también la colaboración de la Srta. Valeria
Fuentealba y Sr. Luis Molina en los análisis de
laboratorio y la cooperación de la Unidad de Mantención de Animales del ISP, en especial al Dr.
Julio Maldonado y Sr. Humberto Domenech. (Proyecto Cona-C4F 98-14).
REFERENCIAS
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