Manejo del Virus del Nilo Occidental Test With Confidence™ Virus del Nilo Occidental La fiebre del Nilo Occidental es una enfermedad causada por el virus del Nilo Occidental (VNO), un virus con ARN monocatenario de la familia Flaviviridae. Otros virus pertenecientes a esta familia son responsables de la encefalitis japonesa, la fiebre amarilla y la encefalitis de San Luis. El nombre del virus proviene de la región occidental del Nilo, en Uganda, donde la enfermedad se documentó por primera vez en 1937 en una mujer que presentaba fiebre alta. En 1957, se atribuyó al virus del Nilo Occidental un brote grave de meningitis y encefalitis en Israel. En 1999, la enfermedad se extendió a Occidente, donde apareció por primera vez en el área de Nueva York y a continuación en Canadá, México y Latinoamérica. La Prueba IDEXX IgM WNV Ab detecta la exposición reciente al Virus del Nilo Occidental Alrededor del 70% de los caballos no presentan signos clínicos y el 20% presentan signos leves. Entre el 1% y el 10% de los caballos infectados presenta formas neuroinvasivas de la enfermedad, como meningitis, encefalitis, paresia, afección de las neuronas motoras y parálisis flácida. En los caballos, la tasa de mortalidad en el caso de infección neuroinvasiva se sitúa entre un 20% y un 60%. No existe ningún tratamiento específico para la fiebre del Nilo Occidental. Origen de la fiebre del Nilo Occidental en Uganda Ya que los anticuerpos IgM sólo pueden detectarse en los tres meses que siguen al momento de la infección, un resultado positivo indica tanto una exposición reciente al VNO como la presencia del VNO en la zona. La Prueba IDEXX IgM WNV Ab es un ELISA de captura en dos pasos que detecta de manera precisa anticuerpos IgM frente al Virus del Nilo Occidental (VNO) en suero equino. Otras pruebas ELISA del VNO detectan anticuerpos IgG, que permanecen en el suero del caballo durante varios años después de la infección. La presencia de anticuerpos IgG no proporciona información sobre el momento de la infección o la presencia actual del VNO en el entorno. Protocolo de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab Conjugado HRP anti-VNO Existen dos estirpes del virus. La estirpe 1 se encuentra sobre todo en Europa, en el norte y el centro de África, Israel, India, América Central, Norteamérica, Argentina y Colombia. La estirpe 2 es endémica del centro y el sur de África, así como de Madagascar. Muestra equina (IgM) ARVNO (o ACN) Volumen: 50 µl (previamente diluido 1:100) Incubación: 1 hora a 37 °C Lectura de la DO a 450 nm Lavado: 3 x 300 µl Conjugado: 50 µl Volumen: 50 µl Lavado: 3 x 300 µl Incubación: 1 hora a 37 °C 1937 1950–1975 1994–2006 Las aves salvajes son el reservorio del virus del Nilo Occidental y el vector de transmisión, los mosquitos. Los mosquitos se infectan al picar a aves infectadas. Luego transmiten el virus a otras aves y a otras especies, incluidos ACN Transmisión del virus del Nilo Occidental 1 2 3 A – 3 ... B + 4 C 1 5 D 2 6 E – 3 F + 4 G 1 5 H 2 6 Sustrato: 75 µl Solución de parada: 50 µl 4 5 6 1. Cada muestra se dispensa en dos de los pocillos de la microplaca. Si la muestra contiene IgM, éstas quedarán fijadas al revestimiento de IgM anti-equinas de los pocillos de la microplaca. 2. Tras el lavado de la microplaca, en uno de los pocillos se añade el antígeno recombinante del virus del Nilo Occidental (ARVNO) y, en el otro, el antígeno de células normales (ACN), para cada muestra. Si la muestra contiene IgM específicas frente al VNO, el ARVNO se fijará a las IgM de los pocillos. 7 8 9 10 11 • ISR ≥ 3.00 = muestra positiva (la muestra contiene IgM frente al virus del Nilo Occidental, lo que indica que ha habido una exposición reciente al virus). • ISR entre 2,00 y 3,00 (2,00 < ISR < 3,00) = muestra dudosa (es necesario realizar una prueba de confirmación). Ejemplo de interpretación de resultados de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab Criterios de validación (Deben cumplirse los cuatro criterios. Todas las lecturas son a 450 nm.) 1 2 3 A – 3 ... B + 4 C 1 5 D 2 6 E – 3 F + 4 DO control positivo > 0,40 G 1 5 Incubación: 10 min a 21 °C ISR control positivo > 3 H 2 6 Solución de parada: 50 µl (ISR control positivo = DO (B1) / DO450 (F1)) DO control negativo < 0,15 ... ISR control negativo < 2 (ISR control negativo = DO (A1) / DO450 (E1)) especies es insuficiente para alcanzar niveles de transmisión. DO (ACN) Vectores (mosquitos) • ISR ≤ 2.00 = muestra negativa (la muestra no contiene IgM frente al virus del Nilo Occidental). 12 considerados los hospedadores finales porque la replicación del virus en estas Hospedadores accidentales (Seres humanos, caballos y otros animales) Los resultados se interpretan del siguiente modo: 4. Tras un nuevo lavado de la microplaca, se añade el sustrato enzimático TMB a los pocillos. Si el conjugado se unió al ARVNO (paso 3), el sustrato enzimático TMB formará un compuesto azul que se volverá amarillo tras añadir la solución de frenado. los seres humanos y los caballos. Los seres humanos y los caballos son Hospedadores amplificadores (aves) Los resultados del ELISA se expresan como un índice de estado inmune (ISR), que es el cociente entre la densidad óptica del pocillo con ARVNO y la densidad óptica del pocillo con ACN para cada muestra. 5. La microplaca se lee a 450 nm. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de anticuerpo presente en la muestra. Incubación: 10 min a 21 °C Incubación: 1 hora a 37 °C o durante la noche a 5 °C ARVNO En caballos el período de incubación es de 3 a 15 días. Los caballos infectados suelen sufrir ataxia y pueden también presentar debilidad, fasciculaciones musculares y déficits de los pares craneales. DO (ARVNO) Brotes de la fiebre del Nilo Occidental ARVNO: Filas A a D La figura siguiente ilustra el método ELISA de captura en dos pasos empleado en el kit IDEXX IgM WNV Ab. 3. Después, la microplaca se lava y se añade el conjugado HRP frente al virus del Nilo Occidental a todos los pocillos. El conjugado se unirá al ARVNO que se encuentre fijado a las IgM. Lavado: 3 x 300 µl Muestra: suero equino Signos clínicos La fiebre del Nilo Occidental afecta principalmente a aves, seres humanos y caballos. Se trata de una afección generalmente asintomática, aunque en cerca del 20% de los casos cursa con síntomas gripales como fiebre, cefalea, anorexia y mialgia. También puede causar encefalomielitis en seres humanos y caballos. Anticuerpo IgM anti-equina El índice de estado inmune (ISR) permite interpretar con claridad los resultados Método ELISA de captura en dos pasos Lectura de la DO a 450 nm ACN: Filas E a H Volumen: 50 µl Incubación: 1 hora a 37 °C o durante la noche a 5 °C Lavado: 3 x 300 µl Conjugado: 50 µl Incubación: 1 hora a 37 °C Lavado: 3 x 300 µl Sustrato: 75 µl 4 5 6 7 8 9 10 11 12 ... DO (ARVNO) Índice de estado inmune (ISR): ISR = --------------DO (ACN) Detección de IgM e infección por el virus del Nilo Occidental Viremia Anticuerpos IgM Infección Aparición de los signos clínicos (sólo entre el 20% y el 30% de los caballos presentan signos clínicos) Diagnóstico de la fiebre del Nilo Occidental usando un método de detección de IgM La presencia de signos clínicos de la fiebre del Nilo Occidental apunta a una infección por el VNO, sin embargo puede haber casos de infección por el virus que cursan sin signos aparentes, por lo que el diagnóstico requiere no sólo una evaluación clínica, sino también pruebas analíticas. La fiebre del Nilo Occidental se puede diagnosticar mediante la detección del virus con métodos virológicos o realizando una PCR (reacción en cadena de la polimerasa). Sin embargo, el método más útil es el que detecta IgM frente al VNO. Los anticuerpos IgM se pueden detectar hasta tres meses después de la infección. Por consiguiente, la presencia de IgM indica la existencia de una infección reciente por el VNO, lo que hace que este método de detección sea útil en los estudios epidemiológicos, así como en el diagnóstico de la enfermedad. El Manual Terrestre de la OIE califica el método ELISA de captura de IgM como “particularmente útil para detectar la exposición natural y las infecciones recientes por el virus del Nilo Occidental.”1 Un resultado positivo en una muestra equina analizada con el método ELISA de captura de IgM indica que el caballo ha estado en contacto con el virus del Nilo Occidental en los últimos tres meses. Los mosquitos responsables de la transmisión del virus del Nilo Occidental han estado circulando recientemente en la zona y pueden estar aún presentes en el medio. Anticuerpos IgG 3 meses > 1 año Medidas de protección La clave para la protección frente al virus del Nilo Occidental es el control de la población de mosquitos y la disminución de la exposición a estos mosquitos. Las mallas anti-insectos y los repelentes son útiles. Otras recomendaciones son: aislar a los caballos de los mosquitos, utilizando ventiladores que los alejen, y apagar las luces por la noche. Virus del Nilo Occidental Una determinación precisa del momento de la infección permite una respuesta adecuada Ya que las IgM son detectables a partir del séptimo día y hasta tres meses después de la exposición al VNO, un resultado positivo en una prueba ELISA de captura de IgM significa que el caballo ha estado expuesto al virus del Nilo Occidental en los últimos tres meses. Una infección tan reciente indica que los mosquitos están propagando el VNO por la zona. Sabiendo esto, es posible adoptar las medidas adecuadas para la protección de los animales y la eliminación de los mosquitos. Estudios de especificidad y sensibilidad La Prueba IDEXX IgM WNV Ab mostró una sensibilidad del 99% y una especificidad del 100% en las poblaciones analizadas. Aunque no existe ningún suero de referencia para analizar las pruebas ELISA de detección del virus del Nilo Occidental, la Prueba IDEXX IgM WNV Ab se ha probado con un suero positivo del laboratorio de referencia francés. El kit de IDEXX detectó este suero positivo con una dilución de 1:102400. Características del kit IDEXX IgM WNV Ab Kit de 2 placas: Ref. P00730-2 Kit de 5 placas: Ref. P00730-5 • Las IgM frente al virus del Nilo Occidental se pueden detectar entre los 7 días y los 3 meses posteriores a la infección. • La presencia de IgM frente al VNO indica que el animal contrajo la infección por el VNO recientemente. Bibliografía 1. Organización Mundial de Sanidad Animal. Fiebre del Nilo Occidental. En: Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2008. París, Francia: Organización Mundial de Sanidad Animal; 2008. Disponible en: www.oie.int/Eng/Normes/Mmanual/2008/pdf/2.01.20_WEST_NILE.pdf. Visitado el 31 de julio de 2009. Para mayor información acerca del Virus del Nilo Occidental, por favor contacte a su representante de IDEXX o visite al.idexx.com/wnv. Oficina Central Corporativa de IDEXX Laboratories, Inc. One IDEXX Drive Westbrook, Maine 04092 EE.UU. Tel: Fax: +1 207 556 4890 o +1 800 548 9997 +1 207 556 4826 o +1 800 328 5461 Oficina Central Europea de IDEXX Europe B.V. Scorpius 60 Building F 2132 LR Hoofddorp Países Bajos Oficina Central Asiática de IDEXX Laboratories, Inc. 3F-5 No. 88, Rei Hu Street Nei Hu District 11494 Taipei, Taiwán Tel: +31 23 558 70 00 o +800 727 43399 Fax: +31 23 558 72 33 Tel: +886 2 6603 9728 Fax: +886 2 2658 8242 © 2011 IDEXX Laboratories, Inc. Reservados todos los derechos. • 09-71274-00 IDEXX y Test With Confidence son marcas comerciales o marcas comerciales registradas de IDEXX Laboratories, Inc. o de sus filiales en los Estados Unidos y/u otros países. La Política de Privacidad de IDEXX se encuentra disponible en al.idexx.com.