Manejo del Virus del Nilo Occidental

Manejo del Virus del Nilo Occidental
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Virus del Nilo Occidental
La fiebre del Nilo Occidental es una
enfermedad causada por el virus del
Nilo Occidental (VNO), un virus con ARN
monocatenario de la familia Flaviviridae.
Otros virus pertenecientes a esta familia son
responsables de la encefalitis japonesa, la fiebre
amarilla y la encefalitis de San Luis.
El nombre del virus proviene de la región
occidental del Nilo, en Uganda, donde la
enfermedad se documentó por primera vez en
1937 en una mujer que presentaba fiebre alta.
En 1957, se atribuyó al virus del Nilo Occidental
un brote grave de meningitis y encefalitis en
Israel. En 1999, la enfermedad se extendió a
Occidente, donde apareció por primera vez en el
área de Nueva York y a continuación en Canadá,
México y Latinoamérica.
La Prueba IDEXX IgM WNV Ab detecta la exposición reciente al Virus del Nilo Occidental
Alrededor del 70% de los caballos no presentan signos clínicos
y el 20% presentan signos leves. Entre el 1% y el 10% de los
caballos infectados presenta formas neuroinvasivas de la
enfermedad, como meningitis, encefalitis, paresia, afección de
las neuronas motoras y parálisis flácida. En los caballos, la tasa
de mortalidad en el caso de infección neuroinvasiva se sitúa
entre un 20% y un 60%. No existe ningún tratamiento específico
para la fiebre del Nilo Occidental.
Origen de la fiebre del Nilo Occidental en Uganda
Ya que los anticuerpos IgM sólo pueden detectarse en los tres meses que
siguen al momento de la infección, un resultado positivo indica tanto una
exposición reciente al VNO como la presencia del VNO en la zona.
La Prueba IDEXX IgM WNV Ab es un ELISA de
captura en dos pasos que detecta de manera
precisa anticuerpos IgM frente al Virus del
Nilo Occidental (VNO) en suero equino.
Otras pruebas ELISA del VNO detectan anticuerpos IgG, que permanecen
en el suero del caballo durante varios años después de la infección.
La presencia de anticuerpos IgG no proporciona información sobre el
momento de la infección o la presencia actual del VNO en el entorno.
Protocolo de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab
Conjugado HRP anti-VNO
Existen dos estirpes del virus. La estirpe 1 se
encuentra sobre todo en Europa, en el norte y el
centro de África, Israel, India, América Central,
Norteamérica, Argentina y Colombia. La estirpe
2 es endémica del centro y el sur de África, así
como de Madagascar.
Muestra equina (IgM)
ARVNO (o ACN)
Volumen: 50 µl
(previamente diluido 1:100)
Incubación: 1 hora a 37 °C
Lectura de la DO a 450 nm
Lavado: 3 x 300 µl
Conjugado: 50 µl
Volumen: 50 µl
Lavado: 3 x 300 µl
Incubación: 1 hora a 37 °C
1937
1950–1975
1994–2006
Las aves salvajes son el reservorio del virus del Nilo Occidental y el vector
de transmisión, los mosquitos. Los mosquitos se infectan al picar a aves
infectadas. Luego transmiten el virus a otras aves y a otras especies, incluidos
ACN
Transmisión del virus del Nilo Occidental
1
2
3
A
–
3
...
B
+
4
C
1
5
D
2
6
E
–
3
F
+
4
G
1
5
H
2
6
Sustrato: 75 µl
Solución de parada: 50 µl
4
5
6
1. Cada muestra se dispensa en dos de los pocillos
de la microplaca. Si la muestra contiene IgM,
éstas quedarán fijadas al revestimiento de IgM
anti-equinas de los pocillos de la microplaca.
2. Tras el lavado de la microplaca, en uno de los
pocillos se añade el antígeno recombinante del
virus del Nilo Occidental (ARVNO) y, en el otro,
el antígeno de células normales (ACN), para cada
muestra. Si la muestra contiene IgM específicas
frente al VNO, el ARVNO se fijará a las IgM de
los pocillos.
7
8
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10
11
• ISR ≥ 3.00 = muestra positiva (la muestra contiene
IgM frente al virus del Nilo Occidental, lo que indica
que ha habido una exposición reciente al virus).
• ISR entre 2,00 y 3,00
(2,00 < ISR < 3,00) = muestra dudosa
(es necesario realizar una prueba de confirmación).
Ejemplo de interpretación de resultados de la Prueba IDEXX IgM WNV Ab
Criterios de validación (Deben cumplirse los cuatro criterios. Todas las lecturas son a 450 nm.)
1
2
3
A
–
3
...
B
+
4
C
1
5
D
2
6
E
–
3
F
+
4
DO control positivo > 0,40
G
1
5
Incubación: 10 min a 21 °C
ISR control positivo > 3
H
2
6
Solución de parada: 50 µl
(ISR control positivo = DO (B1) / DO450 (F1))
DO control negativo < 0,15
...
ISR control negativo < 2
(ISR control negativo = DO (A1) / DO450 (E1))
especies es insuficiente para alcanzar niveles de transmisión.
DO (ACN)
Vectores (mosquitos)
• ISR ≤ 2.00 = muestra negativa (la muestra no
contiene IgM frente al virus del Nilo Occidental).
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considerados los hospedadores finales porque la replicación del virus en estas
Hospedadores accidentales
(Seres humanos, caballos
y otros animales)
Los resultados se interpretan del siguiente modo:
4. Tras un nuevo lavado de la microplaca, se añade
el sustrato enzimático TMB a los pocillos. Si el
conjugado se unió al ARVNO (paso 3), el sustrato
enzimático TMB formará un compuesto azul que
se volverá amarillo tras añadir la solución
de frenado.
los seres humanos y los caballos. Los seres humanos y los caballos son
Hospedadores
amplificadores (aves)
Los resultados del ELISA se expresan como un
índice de estado inmune (ISR), que es el cociente
entre la densidad óptica del pocillo con ARVNO y
la densidad óptica del pocillo con ACN para cada
muestra.
5. La microplaca se lee a 450 nm. La intensidad del
color es proporcional a la cantidad de anticuerpo
presente en la muestra.
Incubación: 10 min a 21 °C
Incubación: 1 hora a 37 °C
o durante la noche a 5 °C
ARVNO
En caballos el período de incubación es de 3
a 15 días. Los caballos infectados suelen sufrir
ataxia y pueden también presentar debilidad,
fasciculaciones musculares y déficits de los
pares craneales.
DO (ARVNO)
Brotes de la fiebre del Nilo Occidental
ARVNO: Filas A a D
La figura siguiente ilustra el método ELISA de
captura en dos pasos empleado en el kit
IDEXX IgM WNV Ab.
3. Después, la microplaca se lava y se añade el
conjugado HRP frente al virus del Nilo Occidental
a todos los pocillos. El conjugado se unirá al
ARVNO que se encuentre fijado a las IgM.
Lavado: 3 x 300 µl
Muestra: suero equino
Signos clínicos
La fiebre del Nilo Occidental afecta principalmente
a aves, seres humanos y caballos. Se trata de una
afección generalmente asintomática, aunque en
cerca del 20% de los casos cursa con síntomas
gripales como fiebre, cefalea, anorexia y mialgia.
También puede causar encefalomielitis en seres
humanos y caballos.
Anticuerpo IgM anti-equina
El índice de estado inmune (ISR) permite
interpretar con claridad los resultados
Método ELISA de captura en dos pasos
Lectura de la DO a 450 nm
ACN: Filas E a H
Volumen: 50 µl
Incubación: 1 hora a 37 °C
o durante la noche a 5 °C
Lavado: 3 x 300 µl
Conjugado: 50 µl
Incubación: 1 hora a 37 °C
Lavado: 3 x 300 µl
Sustrato: 75 µl
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5
6
7
8
9
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11
12
...
DO (ARVNO)
Índice de estado inmune (ISR): ISR = --------------DO (ACN)
Detección de IgM e infección por el virus del Nilo Occidental
Viremia
Anticuerpos IgM
Infección
Aparición de los signos clínicos
(sólo entre el 20% y el 30%
de los caballos presentan signos clínicos)
Diagnóstico de la fiebre del Nilo Occidental
usando un método de detección de IgM
La presencia de signos clínicos de la fiebre
del Nilo Occidental apunta a una infección por
el VNO, sin embargo puede haber casos de
infección por el virus que cursan sin signos
aparentes, por lo que el diagnóstico requiere
no sólo una evaluación clínica, sino también
pruebas analíticas.
La fiebre del Nilo Occidental se puede
diagnosticar mediante la detección del virus
con métodos virológicos o realizando una PCR
(reacción en cadena de la polimerasa). Sin
embargo, el método más útil es el que detecta
IgM frente al VNO.
Los anticuerpos IgM se pueden detectar
hasta tres meses después de la infección. Por
consiguiente, la presencia de IgM indica la
existencia de una infección reciente por el VNO,
lo que hace que este método de detección sea
útil en los estudios epidemiológicos, así como
en el diagnóstico de la enfermedad. El Manual
Terrestre de la OIE califica el método ELISA de
captura de IgM como “particularmente útil para
detectar la exposición natural y las infecciones
recientes por el virus del Nilo Occidental.”1
Un resultado positivo en una muestra equina
analizada con el método ELISA de captura de
IgM indica que el caballo ha estado en contacto
con el virus del Nilo Occidental en los últimos
tres meses. Los mosquitos responsables de la
transmisión del virus del Nilo Occidental han
estado circulando recientemente en la zona y
pueden estar aún presentes en el medio.
Anticuerpos IgG
3 meses
> 1 año
Medidas de protección
La clave para la protección frente al virus del
Nilo Occidental es el control de la población de
mosquitos y la disminución de la exposición a
estos mosquitos. Las mallas anti-insectos y los
repelentes son útiles. Otras recomendaciones
son: aislar a los caballos de los mosquitos,
utilizando ventiladores que los alejen, y apagar
las luces por la noche.
Virus del Nilo Occidental
Una determinación precisa del momento de la infección permite una
respuesta adecuada
Ya que las IgM son detectables a partir del séptimo día y hasta tres meses
después de la exposición al VNO, un resultado positivo en una prueba
ELISA de captura de IgM significa que el caballo ha estado expuesto al
virus del Nilo Occidental en los últimos tres meses.
Una infección tan reciente indica que los mosquitos están propagando el
VNO por la zona. Sabiendo esto, es posible adoptar las medidas adecuadas
para la protección de los animales y la eliminación de los mosquitos.
Estudios de especificidad y sensibilidad
La Prueba IDEXX IgM WNV Ab mostró una sensibilidad del 99% y una
especificidad del 100% en las poblaciones analizadas.
Aunque no existe ningún suero de referencia para analizar las pruebas ELISA
de detección del virus del Nilo Occidental, la Prueba IDEXX IgM WNV Ab se
ha probado con un suero positivo del laboratorio de referencia francés. El kit
de IDEXX detectó este suero positivo con una dilución de 1:102400.
Características del kit IDEXX IgM WNV Ab
Kit de 2 placas: Ref. P00730-2
Kit de 5 placas: Ref. P00730-5
• Las IgM frente al virus del Nilo Occidental se pueden detectar entre los
7 días y los 3 meses posteriores a la infección.
• La presencia de IgM frente al VNO indica que el animal
contrajo la infección por el VNO recientemente.
Bibliografía
1. Organización Mundial de Sanidad Animal. Fiebre del Nilo Occidental. En: Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial
Animals 2008. París, Francia: Organización Mundial de Sanidad Animal; 2008. Disponible en:
www.oie.int/Eng/Normes/Mmanual/2008/pdf/2.01.20_WEST_NILE.pdf. Visitado el 31 de julio de 2009.
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