Diagnóstico prenatal no invasivo de aneuploidias mediante ADN libre fetal en sangre materna Dr. Waldo Leiva L. Screening prenatal Screening combinado trimestre er 1 Screening prenatal Diagnóstico prenatal no invasivo • Enfoque clínico actual: Cribado aneuploidias (PAPA-A, fBHCG, TRN) CRL 45-84 mm. . TD: 90% TFP: 5%. • Se debe hacer en TODA LA POBLACIÓN, bajo y alto riesgo • Si se agrega HN, DV, RT, TD: 93-96% TFP 2,5% • Si el riesgo ajustado es >1/100 se debe realizar procedimiento invasivo Dg (CVS o AMCT) Prenat Diagn 2011; 31: 7–15. Screening prenatal Edad T21 Obstet Gynecol. 2007 Dec;110(6):1459-67. Otras American Journal of Obstetrics and Gynecology (2004) 191, 45e67 Diagnóstico prenatal no invasivo Prenat Diagn 2011; 31: 7–15. cfDNA el diagnóstico de aneuploidias cfDNA en sangre materna • ADN libre fetal (cfDNA) constituye el 10-15% del total en sangre materna (feto+madre). • Se detecta desde la 4ª semana de embarazo. • cfDNA tiene una vida media corta, indetectable post parto. • El tamaño de cfDNA es de 150 pares de base. • Se origina de la apoptósis de celulas trofoblásticas. • Su concentración aumenta con Edad gestacional y es inversamente proporcional peso materno. Hum Reprod. 2003;18(8):1733. Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33 ¿A quienes ofrecer? ¿Qué existe en el mercado? NIPT metodos DNA libre fetal: Sequenciacion masiva (MPSS) Sequenom MaterniT21 Verinata Verifi Sequenciacion dirigida (DANSR) Ariosa Harmony Recuento de secuencias especific a ms a cromosomas Sequenciacion dirigida Natera Panorama SNPs Polimorfiso s de nucleo dos 7 cfDNA el diagnóstico de aneuploidias (1) Zimmermann et al. Prenat Diag 2012, (2) Natera, internal data, (3) Rabinowitz et al. Presented at ASHG 2012, (4) Zimmermann et al. Presented at SMFM 2013. Métodos cuantitativos (Verifi test) MPS Obstet Gynecol 2012;119:890–901 Recuento Chrom 21 Chrom 3 Recuento Chrom 21 Cantidad esperada: Cantidad obtenida: Chrom 3 20% 25% 80% 75% 18 Secuenciación dirigida Harmony test Metodología SNP • SNP = Single Nucleotide Polymorphism • Estudia simultaneamente 19.500 SNPs 21 Metodología SNP SNP Sequencing Plasma = DNA Materno + DNA fetal Sangre materna SNP Sequencing Buffy coat = DNA Materno Materno + Fetal Genotype Fetal Genotype Materno Genotype 22 Metodología SNP cfDNA el diagnóstico de aneuploidias Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520 cfDNA el diagnóstico de aneuploidias Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520 Resultados Tipo de informe Sequenom MaterniT21 Plus Verinata Verifi Ariosa Harmony Natera Panorama Positive Negative Detected Not Detected Suspected Risk score (mat age, fetal fraction, 1 metric) Risk Score (mat age, fetal fraction, multiple metrics) Resultados Harmony test Natera-Panorama test Natera-Panorama test cfDNA el diagnóstico de aneuploidias Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33. cfDNA el diagnóstico de aneuploidias Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33. cfDNA el diagnóstico de aneuploidias • Tasa de falsos positivos aumenta: > peso materno. Mosaicismo confinado placenta Gemelo evanescente. Fracción fetal cfDNA < de 4% Futuro screening 1er trimestre propuesto 10 sem: Marcadores Bioquímicos + cfDNA 12 sem: TN, DV, RT, HN Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 34–40 Otras aplicaciones Otras aplicaciones • Determinación sexo fetal: – Enfermedades ligadas cromosoma X. – Hiperplasia suprarrenal congénita. • Determinación status RhD del feto en madres RhD (-). • Defectos monogénicos. – Sd Marfan – Acondroplasia. – Riñón poliquístico, etc • Preeclampsia - RCIU ¿Que costo tiene? Prenatal Diagnosis 2013, 33, 521–531 Consecuencias clínicas y económicas del uso cfDNA • Se usaron datos obtenidos del estudio MELISA. • Se evaluó el impacto de incorporar cfDNA en los exámenes de rutina de control prenatal: – En mujeres catalogadas de alto riesgo. – Como test de screening 2ario. • 66% de reducción en procedimientos invasivos (riesgo de aborto). • 38% aumento en diagnóstico de T21. • Los costos totales de screening y test diagnósticos disminuyó 1% anualmente. Garfield, Journal of Managed Care Medicine | Vol. 15, No. 2 | www.namcp.org En Chile? • 1 Laboratorio privado • Verifi y Harmony test • Costo aproximado 500.000 a 600.000 pesos. • Muestra es enviada a EEUU para análisis. • Requiere orden médica. • La muestra se toma en domicilio de la paciente. • El resultado demora 15 días aprox. Conclusiones • cfDNA en sangre materna es un examen promisorio dado su alta TD y baja TSF en dg aneuploidias en mujeres mujeres de alto riesgo. • De utilidad en múltiples patologías. • Utilidad como test de screening avanzado en conjunto con screening combinado en población de alto riesgo. • No reemplaza a test Dg como CVS o AMCT. • Limitado por su alto costo actual. Gracias