extracción de adn - Grupo de Biología – UNED

 Prácticas de Biología Grupo de Biología UNED http://dfmf.uned.es/biologia EXTRACCIÓN DE ADN
MUESTRA: Guisantes
MATERIAL:
Cada grupo contará en su armario de la bancada con el siguiente material de laboratorio:
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1 Gradilla
3 Vasos de precipitados (100, 200 y 500 ml)
2 Probetas (100 y 250 ml)
1 Embudo
Los alumnos deberán dejar todo el material empleado correctamente lavado
y secando sobre el papel de filtro dentro del armario, de forma que otros
compañeros puedan usarlo en la siguiente práctica.
PROTOCOLO:
1.- Preparar 50 ml de solución de lisis.
Solución de lisis:
- Medir 40 ml de agua destilada en una probeta.
- Pasarlos a un vaso de precipitados de 100 ml.
- Añadir 0.5 g de NaCl y 0.2 g de EDTA.
- Añadir 2.5 ml de SDS al 20%.
- Mezclar bien con la ayuda de un agitador magnético.
- Llevar a una probeta y enrasar con agua destilada hasta 50 ml.
2.- Tomar 25 g de guisantes y ponerlos en un vaso de precipitados de 500 ml (usar un vaso de
base estrecha para evitar salpicaduras). Añadir la solución de lisis y homogeneizar con la ayuda
de la batidora (1).
MUESTRA CONTROL: Homogeneización mecánica suave (5 pulsos de 1 segundo).
TRATAMIENTO 1: Exceso de homogeneización mecánica (1 pulso de 10 segundos).
3.- Incubar la mezcla durante 15 minutos a 55 º C, agitando suavemente cada 5 minutos.
4.- Dejar enfriar 5 minutos en nevera.
(1) En el punto 2, un grupo será designado por el profesor para llevar acabo el Tratamiento 1,
mientras los demás desarrollan el protocolo normal para obtener la muestra control.
Continúa por la otra cara
Prácticas de Biología Grupo de Biología UNED http://dfmf.uned.es/biologia 5.- Filtrar la mezcla con la ayuda de una gasa* y un embudo, pasando el líquido (extracto) a un
vaso de precipitados pequeño.
*Abrir
completamente la gasa y colocarla dentro del embudo doblada una vez.
6.- Rotular dos tubos de vidrio como “C” (control) y “T” (tratado) respectivamente. Con la ayuda
de una pipeta Pasteur de plástico tomar 2 ml del extracto de guisantes control y pasarlos a cada
uno de los tubos de ensayo (2). Añadir lentamente 5 ml de etanol frío (congelador a - 20 ºC),
dejando resbalar el etanol por la pared del tubo.
TRATAMIENTO 2: Hidrólisis ácida.
TRATAMIENTO 3: Hervido de muestra.
7.- Dejar reposar sin agitar.
(2) En el punto 6, los dos tubos llevarán 2 ml de la muestra control, pero antes de añadir el
etanol se llevará a cabo el Tratamiento 2 ó 3 en el tubo T.